B7-H3、葡萄糖6-磷酸脱氢酶及SET8 蛋白在肾透明细胞癌中的表达及与预后的关系分析

程波，黄连饴，张海芳

安阳市人民医院泌尿外科，河南 安阳 455000

肾透明细胞癌是泌尿系统中有着较高致死率的一类恶性肿瘤。据相关研究表明，其发病率、病死率均呈逐年上升趋势，全球每年新增肾透明细胞癌患者可达210 000 例，死亡人数也高达100 000 例。在透明细胞癌的临床治疗中，由于其具有早期转移率高、病程进展快、术后复发率高等特点，导致患者生存率低，治疗效果不理想，预后差，因此早期诊断和有效治疗是改善患者预后的关键。肿瘤的发生发展是一个多基因、多因素且多阶段性的综合过程，了解肾透明细胞癌发生的相关因素，阐明发病机制可为临床有效的靶向治疗提供参考。因此，本研究分析B7-H3、葡萄糖6-磷酸脱氢酶（glucose 6-phosphate dehydrogenase，G6PD）及SET8 在肾透明细胞癌中的表达及与预后的关系，旨在为临床肾透明细胞癌的诊治积累经验，提高其诊疗效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2016 年1 月至2018 年3 月安阳市人民医院收治的经手术后病理检查确诊为肾透明细胞癌患者的病历资料。纳入标准：①经病理检查、细胞学检查或影像学检查确诊为肾透明细胞癌；②不存在其他影响本研究的疾病；③临床资料、病理资料完整。排除标准：①病理检查前进行过放疗、化疗等治疗；②存在免疫系统或血液系统疾病。根据纳入、排除标准，共纳入81 例肾透明细胞癌患者，其中男57 例，女24 例；年龄30～70 岁，平均（44.59±8.77）岁；TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期51 例，Ⅲ～Ⅳ期30 例；肿瘤直径：≥5 cm 34 例，＜5 cm 47 例；有淋巴结转移25 例，无淋巴结转移56 例；细胞分级：G级55 例，G级26 例。

1.2 蛋白检测方法

B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白检测采用免疫组织化学法和苏木精-伊红染色，抗体均购自美国R&D公司，二抗试剂盒、磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）、二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。检验流程按照相关SP 试剂盒说明书所规定流程进行操作，均以PBS 代替一抗作为阴性对照。G6PD 蛋白主要表达于细胞质内，以细胞质内出现棕褐色染色为阳性；B7-H3 蛋白以细胞膜及少量细胞质呈淡黄色染色为阳性；SET8蛋白以细胞核或细胞膜上呈现出淡黄色到棕黄色不等的颗粒状染色为阳性。每5个随机高倍镜视野下有≥10%的染色细胞为阳性表达，＜10%为阴性表达。另选取手术治疗时切除的正常组织（距肿瘤病灶边缘3 cm，病理证实无非典型增生及肿瘤细胞）作为对照。

1.3 观察指标

比较不同组织中B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白阳性表达情况，并分析B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白与肾透明细胞癌预后的关系。

1.4 随访

在所有患者手术结束后开始进行为期2 年的随访，包括电话随访和上门随访，记录患者预后情况，预后不良包括复发、转移、死亡等。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白阳性表达情况的比较

肾透明细胞癌组织中B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白阳性表达率均明显高于正常组织，差异均有统计学意义（

P

＜0.01）。（表1）

表1 肾透明细胞癌组织及正常组织中B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白阳性表达情况的比较[n（%）]

2.2 肾透明细胞癌患者预后影响因素的单因素分析

随访2 年后，根据患者预后情况分为预后良好60 例，预后不良21 例。不同TNM 分期、肿瘤直径、淋巴结转移、细胞分级及B7-H3、G6PD、SET8 蛋白表达情况的肾透明细胞癌患者预后情况比较，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）。（表2）

表2 肾透明细胞癌患者预后影响因素的单因素分析（n=81）

2.3 肾透明细胞癌患者预后影响因素的多因素分析

多因素分析结果显示，肿瘤直径≥5 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、细胞分级为G级、B7-H3 阳性、G6PD 阳性、SET8 阳性均为影响肾透明细胞癌患者预后的独立危险因素（

P

＜0.05）。（表3）

表3 肾透明细胞癌患者预后影响因素的多因素分析

3 讨论

在肾细胞癌的发生、发展过程中，组蛋白甲基化修饰在其中起着重要的作用。组蛋白甲基化是由组蛋白甲基化酶和去甲基化酶调节的可逆过程，因此，在临床中组蛋白甲基化与肿瘤之间的关系一直为临床研究重点。SET8 属于特异性单甲基化组蛋白H4 中的赖氨酸甲基化转移酶，参与了基因的转录、调控、染色质的形成、细胞周期进程等多种生理过程。在以往文献研究中有发现，在食管癌患者中SET8 明显高表达，与食管癌患者预后有着重要的联系。在杨艳梅等的研究中发现乳腺癌组织中SET8 也高表达，且与预后存在相关性。在本研究中，在肾透明细胞癌组织中SET8 阳性表达率为82.72%，且在预后不良患者中，其阳性表达者居多，与以往文献研究相符。

B7-H3 作为免疫球蛋白超家族的Ⅰ型跨膜蛋白，也属于B7 家族的新成员。

B7

-

H3

mRNA 在健康心、肝脏、前列腺、子宫、胰腺、肺部等组织中广泛表达，但B7-H3蛋白却未表达。B7-H3在T细胞、单核细胞、树突状细胞表面呈可诱导性表达。B7-H3可刺激T细胞增殖和细胞毒性T细胞的活性，在B7-H3 共刺激后γ干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）、IFN-α会分泌增加，在使用树突状细胞的B7-H3 进行反义核苷酸处理后逆转。在洪正东等的研究中提出B7-H3 可保护肿瘤细胞避免被自然杀伤细胞溶菌，在肿瘤的逃逸中有重大意义。在肾癌组织中存在着大量的浸润性T淋巴细胞，与患者的生存率息息相关，因此可了解到，肾癌潜在地破坏了患者体内抗肿瘤免疫机制。在本研究中，肾透明细胞癌组织中B7-H3 高表达，与张萌萌等报道的结果相符。且B7-H3 为影响肾透明细胞癌患者预后的独立危险因素。G6PD 在肿瘤细胞中的表达及其活性一直是临床研究的重点，在许多研究中均证明其与多种肿瘤恶性程度存在一定的联系，其可刺激肿瘤组织生长。在以往文献研究中，免疫组织化学法检测结果显示，在41 例脑胶质瘤组织中G6PD 阳性表达率为56.10%，在正常组织中其阳性表达率为0%，二者比较存在明显的差异；而其与肿瘤分级也存在明显相关性，恶性程度越高的患者G6PD 表达越高。在肝癌、胃癌等多种肿瘤的发展、转移中G6PD 也有重要的作用。在白宏刚等研究中，通过分析肾透明细胞癌的分子代谢特征发现其代谢改变涉及多种途径，其中戊糖磷酸途径、三羧酸循环、脂肪酸合成等途径均与G6PD 有关，同时也发现，在预后较差的肾透明细胞癌患者中

G6PD

等相关基因的表达明显增加。在本研究中，肾透明细胞癌组织中G6PD 阳性表达率为72.84%，且其阳性表达为预后的独立危险因素，与上述文献研究结果相符。

Cui 等研究也指出，G6PD 在肾透明细胞癌中异常激活，可上调细胞周期蛋白D1 表达，有促进肿瘤细胞增殖的作用。在鞠林成等的研究中发现，B7-H3 与肾透明细胞癌的转移和进展有关，提示其为帮助肿瘤细胞逃脱免疫的重要机制，对患者预后有着重要影响。SET8 可影响基因转录与细胞活动，与WNT 信号通路激活密切相关，并可能对肿瘤血管生成有重要影响。在本研究中三者均为预后的重要影响因素，结合以往文献分析，提示以三者作为靶点进行干预性治疗，可增加机体T细胞抗肿瘤免疫能力，增加免疫治疗效果，对提高患者生存率有积极影响。

综上所述，B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白在肾透明细胞癌中均高表达，在临床中检测三者表达水平对患者预后评估有重要参考价值。