汉族、藏族胃癌患者胃癌组织中转化生长因子β诱导基因的表达及其临床意义△

邓伟，芦永福，王学红

1青海大学附属医院消化内科，西宁 810001

2成都大学附属医院消化内科，成都 610000

尽管近年来手术治疗、放化疗和免疫治疗等方法不断发展，但胃癌（gastric cancer，GC）仍是全球恶性肿瘤死亡的第二大原因，全球每年新发GC 病例约120 万例，而中国每年新发GC 病例达41 万例，每年死亡病例约为30 万例。全球GC 的流行病学存在极大的地理差异和人群分布差异，韩国、日本、中国等东亚国家GC 发病率和病死率明显高于北美、西欧及非洲地区的国家。青海地处青藏高原，自然条件差，经济滞后，是中国GC 的高发区之一，GC 的检出率高达8.49%，同时青海是一个多民族聚居的省份，研究表明GC 在不同民族间的检出率存在明显差异，藏族GC 检出率（6.13%）高于汉族（5.96%），但具体机制不明。转化生长因子β诱导基因（transforming growth factor β induced gene，TGFBI）在不同肿瘤微环境中与整合素结合而发挥促进或抑制肿瘤的作用，但具体机制尚待进一步研究。TGFBI 与肿瘤的发生发展密切相关，而目前国内外关于TGFBI 在GC 中具体作用的研究较少且仍存在争议，此外尚未查到TGFBI 在不同民族间表达情况的相关文献。因此，本研究采用逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）检测汉族、藏族患者GC 组织、癌旁组织、慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）和慢性非萎缩性胃炎（chronic non-atrophic gastritis，CNAG）组织中

TGFBI

的表达情况，探讨其在早期检测及诊断GC 中的价值，了解其在两个民族间的表达是否具有差异性，为揭示GC 高发及汉族、藏族GC 检出率差异的可能原因积累资料，为进一步探讨不同民族GC 高发的原因及GC 预防、早期诊治和预后判断提供一定的参考依据，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2017 年11 月至2018 年11 月于青海大学附属医院经胃镜检查及病理活检确诊的60 例GC患者（汉族30 例，藏族30 例）、60 例CAG 患者（汉族30 例，藏族30 例）及60 例CNAG 患者（汉族30例，藏族30 例）。纳入标准：①年龄为18～80 岁，性别不限；②长期（＞20 年）生活于青海的汉族或藏族居民；③经胃镜检查及病理活检确诊为GC、CAG 或CNAG。排除标准：①具有其他恶性肿瘤病史；②合并消化性溃疡、胃肠穿孔、消化道大出血等；③正在服用阿司匹林、华法林等抗凝药物或存在凝血功能障碍；④近1 个月接受过质子泵抑制剂（proton pump inhibitor，PPI）、抑酸药和保护胃黏膜的药物治疗；⑤近1 个月进行过抗幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）治疗；⑥合并肝功能衰竭、心力衰竭、肾功能衰竭；⑦合并严重的神经病变或精神疾病；⑧接受过放疗或化疗；⑨妊娠期；⑩酒精依赖。收集汉族GC 组织及其癌旁组织（距离肿瘤＞5 cm 的组织）、藏族GC 组织及其癌旁组织、汉族CAG 组织、藏族CAG 组织、汉族CNAG 组织、藏族CNAG 组织各30 例。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者及家属均对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 主要试剂与仪器

4S Red Plus 核酸染色剂（10 000×水溶液）购自加拿大BBI 公司，Maxima Reverse Transcriptase 及GeneRuler DNA Ladder Mix 均购自美国Thermo Scientific 公司，SMA4000 微量分光光度计购自美林恒通（北京）仪器有限公司，LightCycler480 Ⅱ型荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）仪购自瑞士Roche 公司，UNIQ-10 柱式Trizol总RNA 抽提试剂盒购自生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.3 RNA 提取及RT-PCR

严格按照Trizol 试剂盒提取各组织中的RNA，采用SMA4000 微量分光光度计检测各组织中总RNA 浓度与纯度，采用琼脂糖凝胶电泳显示RNA的完整性。根据逆转录试剂盒说明书合成cDNA，PCR 反应条件：94 ℃3 min；94 ℃5 s，57 ℃15 s，72 ℃30 s，共45 个循环。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司设计并合成，以甘油醛-3-磷酸脱氢 酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）作为内参基因。

GAPDH

正向引物5'-TGGGTGTGAACCATGAGAAGT-3'，反 向 引 物5'-TGAGTCCTTCCACGATACCAA-3'；

TGFBI

正向引物5'-GGGACATGCTCACTATCAACG-3'，反向引物5'-TGGCTGAGTCTGGGATGAGTA-3'。每个样本重复测3 次，取平均值为Ct 值。采用2法计算

TGFBI

mRNA 相对表达量。

1.4 观察指标

分析汉族、藏族患者不同胃黏膜组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量，比较汉族、藏族间同一类型胃黏膜组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量，比较不同临床特征GC 患者GC 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件对数据进行统计分析，非正态分布的计量资料以中位数（四分位数）[

M

（

P

，

P

）]表示，两组间比较采用Mann-Whitney

U

检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis

H

检验，多组间两两比较采用Nemenyi 检验。以

P

＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 汉族不同胃黏膜组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较

汉族GC 组织、癌旁组织、CAG 组织及CNAG组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异有统计学意义（

H

=35.765，

P

＜0.01）；GC 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于癌旁组织、CAG 组织、CNAG 组织，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）；癌旁组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于CNAG 组织，差异有统计学意义（

P

＜0.05）；癌旁组织和CAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异无统计学意义（

P

＞0.05）；CAG 组织和CNAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异无统计学意义（

P

＞0.05）。（表1）

表1 汉族不同胃黏膜组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较[M（P25，P75）]

2.2 藏族不同胃黏膜组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较

藏族GC 组织、癌旁组织、CAG 组织及CNAG组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异有统计学意义（

H

=35.494，

P

＜0.01）；GC 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于癌旁组织、CAG 组织、CNAG 组织，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）；癌旁组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于CNAG 组织，差异有统计学意义（

P

＜0.05）；癌旁组织和CAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异无统计学意义（

P

＞0.05）；CAG 组织和CNAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异无统计学意义（

P

＞0.05）。（表2）

表2 藏族不同胃黏膜组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较[M（P25，P75）]

2.3 汉族、藏族间同一类型胃黏膜组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较

汉族、藏族间同一类型胃黏膜组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异均无统计学意义（

P

＞0.05）。（表3）

表3 汉族、藏族间同一类型胃黏膜组织中TGFBI mRNA的相对表达量[M（P25，P75）]

2.4 不区分民族的情况下不同胃黏膜组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较

不区分民族的情况下，GC 组织、癌旁组织、CAG 组织及CNAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异有统计学意义（

H

=70.623，

P

＜0.01）；GC 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于癌旁组织、CAG 组织、CNAG 组织，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）；癌旁组织和CAG 组织中

TGFBI

mRNA相对表达量均高于CNAG 组织，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）；癌旁组织和CAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异无统计学意义（

P

＞0.05）。（表4）

表4 不区分民族的情况下不同胃黏膜组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较[M（P25，P75）]

2.5 不同临床特征GC 患者GC 组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较

不同性别、年龄、肿瘤直径、分化程度及远处转移情况的GC 患者GC 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异均无统计学意义（

P

＞0.05）。浸润深度为T～T、有淋巴结转移、TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ期的GC 患者GC 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量分别高于浸润深度为T～T、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期的GC 患者，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）。（表5）

表5 不同临床特征GC 患者GC 组织中TGFBI mRNA 相对表达量的比较（n=60）

3 讨论

GC 的发病率较高，其早期常无明显症状，缺乏有效的早期诊断方法，确诊时往往处于晚期，因此成为全球发病率和病死率最高的肿瘤之一。自从Skonier 等发现TGFBI 后，其研究不断深入，目前认为TGFBI 可能通过多种通路和自身途径参与调节细胞黏附、迁移、增殖、凋亡及炎性反应，从而发挥促癌或抑癌作用。

本研究检测了汉族、藏族不同胃黏膜组织中

TGFBI

mRNA 的表达情况，结果显示汉族GC 组织、癌旁组织、CAG 组织及CNAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量逐渐降低，GC 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于癌旁组织、CAG 组织、CNAG 组织，癌旁组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于CNAG 组织，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）；癌旁组织和CAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异无统计学意义（

P

＞0.05）。同时在藏族胃黏膜组织中及不分民族的情况下也得到了相似的结果，与Han 等采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测GC 患者血清中TGFBI 呈高表达的结果一致，与尹青香的研究结果有不同之处。提示TGFBI 与GC的发生密切相关，但尚需加大样本量进一步研究。癌旁组织与GC 组织同处于一个内外环境中，癌旁组织常常被认为是肿瘤易发组织。本研究结果显示，在汉族、藏族或不分民族的情况下，癌旁组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量均介于GC 组织与CNAG 组织之间，提示癌旁组织处于GC 和CNAG 的中间状态，因此推断TGFBI 逐渐累积到一定水平可导致GC 的发生，动态监测TGFBI 可能有助于GC 的早期筛查。虽然癌旁组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于CAG 组织，但差异无统计学意义（

P

＞0.05）。可能的原因如下：①样本量太小，尚需加大样本量进一步研究；②CAG 作为一种癌前疾病，其基因层面已发生改变，改变后的CAG与肿瘤易发组织无太大差异，但仍需进一步研究。汉族、藏族间同一类型胃黏膜组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量比较，差异均无统计学意义（

P

＞0.05），提示汉族、藏族间的TGFBI 表达无明显差异，TGFBI 可能不是两个民族间GC 检出率不同的原因，汉族、藏族间GC 检出率不同可能与汉族、藏族不同的生活饮食习惯有关，其次本研究并未进行基因测序，基因多态性是否为导致汉族、藏族间GC 检出率不同的原因尚待进一步研究，这也是接下来研究的新方向。本研究进一步比较了不同临床特征GC 患者GC组织中

TGFBI

mRNA相对表达量，结果显示，浸润深度为T～T的GC患者GC组织中

TGFBI

mRNA相对表达量高于浸润深度为T～T的患者（

P

＜0.05），与Li 等研究中TGFBI 高表达与GC 腹膜转移密切相关的结果相似，提示TGFBI 参与GC 腹膜转移。GC 腹膜转移的关键在于肿瘤细胞附着到腹膜，TGFBI 有助于成纤维细胞的黏附和扩展，成纤维细胞可通过膜上的糖蛋白与肿瘤细胞进行选择性黏附。本研究结果显示，有淋巴结转移的GC患者GC组织中

TGFBI

mRNA相对表达量高于无淋巴结转移的患者，与Li等研究中TGFBI 在淋巴结转移阳性的GC患者中表达升高的结果相似。与之相反，Holmberg 等研究指出转化生长因子β诱导蛋白通过激活p42/44激酶抑制胰岛素样生长因子2刺激的肿瘤相关肌成纤维细胞的增殖和迁移，从而减慢GC细胞生长和GC进展。因此，TGFBI表达与淋巴结转移有关，但在GC 患者同一种肿瘤内环境中TGFBI是否扮演着不同的作用，尚待加大样本量研究。TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ期的GC 患者GC 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量高于TNM 分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者（

P

＜0.05），与Ma等研究结果相似，可能的原因是TGFBI 通过激活整合素ανβ5-Src 信号通路诱导血管内皮钙黏蛋白分离，从而导致血管内皮渗透性增加，肿瘤细胞外渗有助于肿瘤细胞扩散和转移，但在GC中是否有着相同的机制尚待研究，因此高表达的TGFBI 可能参与GC 细胞的迁移及侵袭，可用于评估GC预后。综上所述，汉族、藏族GC 患者间

TGFBI

mRNA 相对表达量无明显差异，TGFBI 可能不是汉族和藏族间GC 检出率不同的原因，但本研究仅检测

TGFBI

mRNA 的表达情况，并未进一步对基因进行测序，基因多态性是否为导致汉族、藏族间GC 检出率不同的原因尚待进一步研究。癌旁组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量介于GC 组织与CNAG 组织间，提示TGFBI 逐渐累积到一定水平可导致GC 的发生，但具体机制仍需进一步研究。此外GC 组织、癌旁组织、CAG 组织、CNAG 组织中

TGFBI

mRNA 相对表达量逐渐下降，且TGFBI 表达情况与浸润深度、淋巴结转移及TNM 分期有关，因此动态检测TGFBI 对GC 患者的早期诊断、治疗及预后评估具有一定的帮助。