气相色谱法测定洛索洛芬钠中7种残留溶剂的含量

周绪云，马晓茜（.山东省莒县中医医院，山东 莒县 76599；.山东医学高等专科学校，山东 临沂 7600）

洛索洛芬钠（loxoprofen sodium），其化学名为2-[4-（2-氧代环戊烷-1-基甲基）苯基]丙酸钠，属于非甾体类抗炎镇痛药，临床上用于类风湿关节炎、肩周炎等的镇痛及急性上呼吸道感染的解热镇痛[1-3]，具有解热镇痛作用强、消化道不良反应小、临床应用范围广等特点[4]，其质量标准收载在《新药转正标准》第66 册[5]。本文查阅洛索洛芬钠原料药合成方法相关的资料[6-9]，并对生产企业进行调研发现，洛索洛芬钠原料药具有多条不同的合成工艺路线，在化学合成过程使用到了多种不同的有机溶剂，这些有机溶剂均有可能残留在原料药中，从而影响到洛索洛芬钠原料药的安全性。在《新药转正标准》第66 册洛索洛芬钠质量标准中仅对甲苯一种残留溶剂进行了检验，并没有对其他有机溶剂进行检验，存在严重的标准缺陷。本文收集了3 家洛索洛芬钠原料药生产企业的样品，并对其合成路线进行调研，发现在洛索洛芬钠合成过程中使用到了丙酮、甲醇、二氯甲烷、异丙醇、乙腈、三氯甲烷和甲苯。其中甲醇、二氯甲烷、乙腈、三氯甲烷和甲苯属于第二类残留溶剂，为应该限制使用的溶剂；丙酮和异丙醇属于第三类溶剂。以上溶剂均具有不同的毒性，在《中国药典》2020年版四部通则中均规定了其限度要求[10]。为了有效控制洛索洛芬钠原料药的质量和安全性，药典中“残留溶剂测定法”的要求，本文对以上7 种有机溶剂进行检测，现报道如下。

1 材料

GC2010 Plus 型气相色谱仪（日本岛津）；Mettler XP205 型电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo）。洛索洛芬钠原料药（批号：16C5102004018，16C5102006008，A 公司；批号：200203，B 公司；批号：1D2004019，1D2005029，C 公司）；丙酮（批号：176178，纯度：100%，Fisher 公司），甲醇（批号：L1057307943，纯度：100%）、二氯甲烷（批号：1611001YT，纯度：99.5%）、异丙醇（批号：K50544740836，纯度：100%）、乙腈（批号：SHBL4495，纯度：100%）、甲苯（批号：K46504627511，纯度：99.9%）（Merck 试剂），三氯甲烷（批号：20180726，纯度：99.9%）、N，N-二甲基甲酰胺（批号：20150422，纯度：99.5%）（国药集团）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Thermo TG WAXMS 气相色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；载气为氮气；流速2 mL·min－1；检测器为FID；进样口温度为220℃；检测器温度为260℃；采用程序升温法：起始温度为40℃，保持10 min，以20℃·min－1的速率升温至200℃，保持5 min；进样量为1 μL；分流比为10∶1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 分别精密称取丙酮52.53 mg、甲醇30.66 mg、二氯甲烷28.86 mg、异丙醇52.40 mg、乙腈41.97 mg、三氯甲烷12.56 mg 和甲苯89.64 mg，置10 mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别制得每1 mL含丙酮5.253 mg、甲醇3.066 mg、二氯甲烷2.872 mg、异丙醇5.240 mg、乙腈4.197 mg、三氯甲烷1.255 mg 和甲苯8.955 mg 的对照品储备液；分别精密量取上述对照品储备液1 mL，置同一100 mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 精密称取洛索洛芬钠原料药约1.0 g，置10 mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.3 专属性试验

取“2.2”项下的混合对照品溶液、供试品溶液与空白溶剂（N，N-二甲基甲酰胺），按“2.1”项下色谱条件分别进样检测，结果7 种残留溶剂色谱峰分离度均符合规定，空白溶剂对待测残留溶剂色谱峰没有干扰，见图1。

图1 空白溶剂（A）、对照品溶液（B）、A 公司样品（C）、B 公司样品（D）、C 公司样品（E）GC 色谱图Fig 1 GC chromatogram of blank solvent（A），standard solution（B），sample of company A（C），sample of company B（D），and sample of company C（E）

2.4 线性关系考察

精密量取“2.1”项下各对照品储备液10、50、100、200、500 μL 分别置10 mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，制得系列浓度对照品溶液，以各待测成分色谱峰的峰面积为纵坐标，质量浓度（μg·mL－1）为横坐标，进行线性回归。结果在各自的浓度范围内，7 种溶剂线性关系良好。结果见表1。

表1 线性、检测限及定量限结果Tab 1 Linearity，LOD and LOQ

2.5 检测限与定量限

取“2.2.1”项下混合对照品溶液，用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀释后，进样测定，以信噪比S/N＝3 计算各残留溶剂的检测限（LOD），以信噪比S/N＝10 计算各残留溶剂的定量限（LOQ），结果见表1。

2.6 回收试验

分别精密量取“2.2.1”项下各对照品储备液20、50、100 μL，置10 mL 量瓶中，每个浓度水平平行考察3 份，共9 个样品，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为回收试验溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样检测，并计算各残留溶剂的回收率。结果丙酮、甲醇、二氯甲烷、异丙醇、乙腈、三氯甲烷和甲苯的平均回收率在97.6%～103.5%，RSD在1.7%～2.7%。

2.7 精密度试验

取“2.2”项下混合对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件，连续进样6 次测定，并计算丙酮、甲醇、二氯甲烷、异丙醇、乙腈、三氯甲烷和甲苯色谱峰面积的RSD分别为1.8%、1.6%、2.2%、1.7%、3.2%、2.2%、1.7%，表明仪器精密度良好。

2.8 重复性试验

分别取3 家企业的洛索洛芬钠原料药各一批，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液各6 份，按“2.1”项下色谱条件进样测定。结果，A 公司样品检出丙酮与异丙醇，平均含量分别为0.030%与0.016%，RSD分别为2.8%与3.4%；B 公司样品检出甲醇与甲苯，平均含量分别为0.025%与0.014%，RSD均为2.4%；C 公司样品检出丙酮与异丙醇，平均含量分别为0.021%与0.011%，RSD分别为2.6%与2.8%。表明该方法重复性良好。

2.9 耐用性试验

本文参照《中国药典》2020年版四部通则9101 药品质量标准分析方法验证指导原则中方法耐用性的要求[10]，对气相色谱条件进行调整，通过改变气相色谱柱型号[Thermo TG WAXMS 气相色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）与Agilent DB WAX 气相色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）]；载气流速（1.9、2.0、2.1 mL·min－1）；进样口温度（215 ℃、220、225 ℃）；检测器温度（255、260、265℃）等试验条件，考察该方法的耐用性。结果显示本方法耐用性良好。

2.10 样品测定结果

取洛索洛芬钠原料药，按“2.2.2”项下方法分别制备供试品溶液，进样测定，计算各供试品中残留溶剂的含量。结果如表2所示。结果显示，A 公司与C 公司样品均检出丙酮与异丙醇，B 公司样品检出甲醇与甲苯，且检出含量均未超过《中国药典》2020年版四部通则中对各残留溶剂的限度规定要求，其余溶剂均未检出。

表2 样品中残留溶剂测定结果(%，n＝2)Tab 2 Determination of residual solvent in samples (%，n＝2)

3 讨论

3.1 溶剂的选择

分别考察以水、二甲基亚砜和N，N-二甲基甲酰胺作溶剂，采用水作溶剂时，部分有机溶剂如三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯等溶解性较差；采用二甲基亚砜和N，N-二甲基甲酰胺作溶剂时，均能与各待测有机溶剂完全互溶；但N，N-二甲基甲酰胺的色谱图基线更平直，各色谱峰的分离度更好，因此本文选择N，N-二甲基甲酰胺作为溶剂。

3.2 进样方式的选择

测定残留溶剂时，有溶液直接进样和顶空进样两种进样方式[11-13]。本文中检测的有机溶剂共7 种，各有机溶剂的沸点相差较大，采用溶液直接进样测定，方法简单，快速，重现性好。

3.3 色谱柱的选择

分别考察不同极性毛细管色谱柱，通过试验比较，发现采用Thermo TG WAXMS 色谱柱能使7种待测有机溶剂实现较好分离，采用其他中等极性或弱极性色谱柱时分离度达不到要求。

3.4 柱温的选择

本文测定的有机溶剂的沸点相对较低，采用40 ℃等温保持10 min，可以将多种待测成分分开，程序升温可以将沸点相对较高的待测成分实现分离。由于N，N-二甲基甲酰胺的沸点较高，为了使N，N-二甲基甲酰胺完全流出色谱柱，本试验采用200 ℃，保持5 min，将N，N-二甲基甲酰胺与所有的干扰杂质成分完全排出色谱柱，既保证了进样的重复性，又保护了色谱柱。

洛索洛芬钠原料药在化学合成过程中使用了多种有机溶剂，然而现有质量标准仅对其中的甲苯进行了检测，而忽略了其他的残留溶剂。根据本文检测结果发现，在洛索洛芬钠原料药中除甲苯外，还存在丙酮、异丙醇和甲醇等残留溶剂，严重影响了洛索洛芬钠原料药的质量与安全性，有必要对其中可能存在的所有残留溶剂进行全面检测，按照“最严谨的标准”来控制洛索洛芬钠的质量。本文建立的气相色谱方法可以同时检测洛索洛芬钠原料药中7 种残留溶剂，具有良好的效果。