真核起始因子4A及组蛋白乙酰转移酶表达水平与卵巢癌患者FIGO分期的相关性

李川，杨金花

(郑州人民医院 病理科，河南 郑州 450000)

卵巢癌具有发病隐匿、发病率高、恶性程度高、易远处转移等特点，是女性常见恶性肿瘤，多数患者就诊时已存在远处转移或局部浸润，不利于临床干预[1]。因此，及早诊断并进行干预是改善卵巢癌患者预后的重要因素，寻找科学、可行的生物学诊断指标具有重要临床价值。近年来，表观遗传学对恶性肿瘤进展影响的相关研究逐渐增多，为卵巢癌生物学指标研究提供新方向。组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase，HAT)是组蛋白转移酶家族成员，真核起始因子4A(eukaryotic initiation factor 4A，eIF4A)是翻译起始复合因子，二者均在多种肿瘤中存在异常表达，但目前在卵巢癌相关研究中报道较少。本研究选取2012年12月至2014年10月郑州人民医院收治的43例卵巢癌患者和同期40例良性卵巢疾病患者作为研究对象，分析HAT、eIF4A对卵巢癌临床诊断及预后评估的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2012年12月至2014年10月郑州人民医院收治的43例卵巢癌患者作为观察组，另选取同期40例良性卵巢疾病(由于其他妇科疾病需进行部分卵巢切除，且术后病理证实为非卵巢癌)患者为对照组。对照组：年龄34～63岁，平均(48.57±6.52)岁。观察组：年龄33～65岁，平均(50.03±6.71)岁；黏液性囊腺癌28例，浆液性囊腺癌15例。两组年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 选取标准(1)纳入标准：①经手术病理确诊为卵巢癌；②临床资料完善；③术前未经免疫治疗或放化疗干预。(2)排除标准：①临床资料不完善；②国际妇产科协会(Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO)分期不明确。

1.3 检测方法术中取得卵巢标本后以免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶两步法进行检测。用磷酸盐缓冲液冲洗标本后以福尔马林固定，采用石蜡包埋，酒精脱水，以4 μm厚度进行切片，脱蜡水化，高温高压下修复抗原；在切片上滴加过氧化酶，孵育10 min，设置温度为37 ℃，滴加山羊血清封闭；滴加一抗，孵育过夜，设置温度为4 ℃；以磷酸盐缓冲液冲洗，滴加二抗，孵育20 min，设置温度为37 ℃；以磷酸盐缓冲液冲洗，加入过氧化物酶溶液，孵育20 min，设置温度为37 ℃；以鲜二氨基联苯胺显色，复染，封片，于荧光显微镜下观察；以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。采用半定量评分法判定，采用染色强弱与阳性细胞比率乘积评估表达水平。染色强弱：强计3分，中计2分，弱计1分，无计0分。阳性细胞比率：>75%计4分，>50%～75%计3分，>25%～50%计2分，5%～25%计1分，<5%计0分。9～12分为高表达，5～8分为中表达，1～4分为低表达，0分为阴性。所有患者均进行为期5 a的随访。

1.4 观察指标(1)HAT、eIF4A阳性表达率。(2)不同FIGO分期HAT及eIF4A阳性表达率。(3)HAT、eIF4A阳性表达率与FIGO分期的相关性。(4)HAT、eIF4A表达水平与卵巢癌患者中位生存期的关系。(5)卵巢癌患者预后的影响因素。

1.5 统计学方法采用SPSS 22.0统计软件处理数据。计数资料以频数和率(%)表示，组间比较采用χ2检验，采用Spearman秩相关分析HAT及eIF4A阳性表达率与FIGO分期的相关性，不符合正态分布的计量资料采用中位数表示，采用Mann-WhitneyU检验，采用多因素logistic回归分析影响卵巢癌患者预后的因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HAT及eIF4A阳性表达率观察组HAT阳性表达率低于对照组，eIF4A阳性表达率高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组HAT、eIF4A阳性表达率比较[n(%)]

2.2 不同FIGO分期HAT及eIF4A阳性表达率FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期HAT阳性表达率高于Ⅲ～Ⅳ期，eIF4A阳性表达率低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)。见表2。

表2 HAT、eIF4A阳性率与FIGO分期的关系[n(%)]

2.3 HAT及eIF4A阳性表达率与FIGO分期的相关性Spearman秩相关分析表明，HAT阳性表达率与FIGO分期呈负相关(r=-0.305，P<0.001)，eIF4A阳性表达率与FIGO分期呈正相关(r=0.373，P<0.001)。

2.4 HAT及eIF4A表达水平与卵巢癌患者中位生存期的关系HAT阴性表达患者中位生存期(30.7个月)较阳性表达患者(65.5个月)短，eIF-4A阳性表达患者中位生存期(31.5个月)较阴性表达患者(70.4个月)短(P<0.05)。

2.5 卵巢癌患者预后的影响因素多因素logistic回归分析结果显示，HAT阴性、eIF4A阳性是卵巢癌患者中位生存期短的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 卵巢癌患者预后的影响因素

3 讨论

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤，全球范围内每年新发病例可达25万，14万以上患者因卵巢癌死亡[2]。卵巢癌发病机制与免疫、环境、遗传等多种因素相关，既往研究主要集中于遗传易感性[3]。近年来由于分子生物学的迅速发展，临床逐渐关注表观遗传学异常改变，如组蛋白修饰、DNA甲基化、RNA调控等在卵巢癌中的作用。

HAT是组蛋白乙酰化过程中的重要成员，可通过组蛋白H3和组蛋白H4赖氨酸氨基端作用参与核苷酸修复、复制、转录、染色体重构等过程，HAT水平表达异常会造成蛋白乙酰化失衡，从而诱发肿瘤[4]。有研究指出，与正常卵巢组织相比，卵巢癌患者HAT水平明显偏低[5]。eIF4A在多种肿瘤中均表现为过度表达，如淋巴瘤、乳腺癌、肝癌。卵巢上皮肿瘤组织中eIF4A阳性率明显偏高[6]。eIF4A是翻译起始复合因子，在对腺嘌呤核苷三磷酸依赖的DEAD-box RNA解旋酶中水平较高，可调控蛋白合成起始过程，若eIF4A表达失控则造成蛋白合成异常，从而诱发肿瘤。本研究结果显示，观察组HAT阳性表达率低于对照组，eIF-4A阳性表达率高于对照组，说明卵巢癌患者eIF4A及HAT阳性表达情况与良性卵巢疾病患者存在明显差异，通过检测eIF4A、HAT阳性表达情况对卵巢癌临床诊断有一定的价值。进一步分析eIF4A及HAT与卵巢癌的关系发现，FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期HAT阳性表达率高于Ⅲ～Ⅳ期，eIF-4A阳性表达率低于Ⅲ～Ⅳ期，且Spearman秩相关分析表明，HAT阳性表达率与FIGO分期呈负相关，eIF4A阳性表达率与FIGO分期呈正相关。这说明通过检测eIF4A及HAT阳性表达情况有助于鉴别卵巢癌FIGO分期，且eIF4A、HAT可能共同参与卵巢癌发生及进展过程。eIF4A为翻译起始复合因子，其表达异常会造成蛋白合成失控，卵巢上皮细胞增殖失控及恶性转化，并逐步进展为卵巢癌。HAT作为催化亚基，对组蛋白H4K16特异性乙酰化，促使染色质基因暴露，有助于转录因子结合，加快启动基因转录过程。卵巢癌患者HAT呈低水平表达，降低乙酰化H4K16水平，导致基因组不稳定，增加染色体畸变风险，降低DNA修复功能，促使肿瘤发生。因此，eIF4A及HAT参与卵巢癌进展过程。多因素logistic回归分析结果显示，HAT阴性、eIF4A阳性是卵巢癌患者中位生存期短的独立危险因素，提示通过检测HAT及eIF4A表达水平可评估患者预后，有助于临床早期指导干预。

综上，HAT及eIF4A在卵巢癌患者中存在异常表达，与卵巢癌发生、进展关系密切，HAT阴性、eIF4A阳性则提示卵巢癌患者预后较差，通过检测HAT及eIF4A表达水平有助于卵巢癌早期诊断及预后分析，可为临床干预提供指导意见，具有较高的临床价值。