叶酸受体1、间皮素蛋白在卵巢癌中的表达及临床意义

黄华民，康燕，崔英，李娴

青海红十字医院妇二科，西宁 810000

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，发病率较高，患者预后较差。由于其发病隐匿，70%以上的患者在就医时伴有远处转移，进入肿瘤晚期。晚期卵巢癌的标准治疗方法是手术和铂类化疗，但2 年内复发率较高，并且复发后缺乏有效的治疗方法。因此，寻找高灵敏度和高特异度的实验室卵巢癌标志物对早期诊断和准确评估病情具有重要意义。叶酸受体1（folate receptor 1，FOLR1）是叶酸受体家族的特征成员，在妇科恶性肿瘤中，FOLR1 的表达异常升高，并且由于FOLR1 易于从肿瘤细胞表面脱落到血液中，因此血清检测灵敏度高。但目前FOLR1 在卵巢癌中高表达的机制仍不清楚，其在卵巢癌发生和发展中的作用尚有争议。间皮素（mesothelin，MSLN）主要通过糖基磷脂酰肌醇附着在细胞膜上，在各种恶性实体瘤中均有较高水平。有研究认为，MSLN 和糖类抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）共同促进卵巢癌的转移。本研究主要通过回顾性分析观察卵巢癌患者FOLR1、MSLN 蛋白表达情况的变化，并分析其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017 年3 月至2020 年6 月在青海红十字医院接受治疗的卵巢癌患者的病历资料。纳入标准：①符合卵巢癌的诊断标准；②无其他系统严重疾病；③具有完整的临床资料。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②有自身免疫性疾病、甲状腺疾病等其他疾病；③2 周内应用过抗生素。根据纳入、排除标准，共纳入80 例卵巢癌患者，年龄18～80岁，平均（56.74±2.28）岁；国际妇产科联盟（Ιnternational Federation of Gynecology and Obstetrics，FΙGO）分期：Ⅰ期32 例，Ⅱ期20 例，Ⅲ期15 例，Ⅳ期13 例；分化程度：高分化35 例，中分化25 例，低分化20 例；化疗≥6 个周期48 例，﹤6 个周期32 例；有淋巴结转移33 例，无淋巴结转移47 例；伴腹腔积液45 例，无腹腔积液35 例。取80 例卵巢癌患者的卵巢癌组织及癌旁正常卵巢组织。

1.2 检测及评价方法

采用免疫组织化学法检测FOLR1、MSLN 的表达，检测仪器为美国西门子医学诊断股份有限公司的ATELLΙCA 化学发光仪及配套套件。手术切除的标本组织，经10%甲醛固定24～48 h，石蜡包埋。石蜡标本连续切片4 张，厚度约为4 mm，于60 ℃烘烤3 h，常规脱蜡，加入3%HO10 min，在室温下孵育，采用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）洗涤3 次，每次3 min，柠檬酸溶液修复，PBS 洗涤3 次，每次3 min，加一抗孵育过夜，PBS 洗涤3 次，每次3 min，添加聚合物增强剂，在室温下孵育20 min，PBS 洗涤3 次，每次3 min，室温下添加酶标记的抗小鼠聚合物（二抗），在室温下孵育30 min，PBS 洗涤3 次，每次3 min，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色后用水冲洗，苏木素复染，常规脱水封片。试剂盒购自北京中山生物制品有限公司。

根据染色强度及阳性细胞百分比计分。染色强度：无色为0 分，浅黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分；阳性细胞百分比：无阳性细胞为0 分，1%～25%为1 分，26%～50%为2 分，51%～75%为3分，76%～100%为4 分；染色强度和阳性细胞百分比得分的乘积作为最终得分，0～4 分为蛋白质表达阴性（-），﹥4 分为蛋白质表达阳性（+）。

1.3 观察指标

采用免疫组织化学法检测FOLR1、MSLN 在卵巢癌组织及癌旁正常卵巢组织中的表达，比较不同临床特征卵巢癌患者卵巢癌组织中FOLR1、MSLN 蛋白的差异。

1..4 统计学分析

2 结果

2.1 FOLR1、MSLN 蛋白表达情况的比较

卵巢癌组织中的FOLR1、MSLN 阳性表达率均明显高于癌旁正常卵巢组织，差异均有统计学意义（

P

﹤0.01）。（表1）

表1 卵巢癌组织及癌旁正常卵巢组织中FOLR11、MSLN蛋白表达情况的比较[n（%）]

2.2 不同临床特征卵巢癌患者卵巢癌组织中FOLR1、MSLN 蛋白表达情况的比较

低分化、FΙGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢癌组织中FOLR1 阳性表达率分别高于高中分化、FΙGO 分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（

χ

=4.706、7.602、6.312，

P

﹤0.05）；低分化、FΙGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢癌组织中MSLN 阳性表达率分别明显高于高中分化、FΙGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（

χ

=15.038、23.375、33.229，

P

﹤0.01）。不同年龄、化疗周期卵巢癌患者的卵巢癌组织中FOLR1、MSLN 阳性表达率比较，差异均无统计学意义（

P

﹥0.05）。（表2）

表2 不同临床特征卵巢癌患者卵巢癌组织中FOLR11、MSLN蛋白表达情况

2.3 卵巢癌患者FOLR1、MSLN 蛋白表达情况影响因素的多因素分析

将单因素分析中差异有统计学意义的因素作为自变量（分化程度：高中分化=0，低分化=1；FΙGO分期：Ⅰ～Ⅱ期=0，Ⅲ～Ⅳ期=1；淋巴结转移：无=0，有=1），将卵巢癌患者的FOLR1、MSLN 表达作为因变量，进行多因素回归分析。结果显示，FΙGO 分期是影响卵巢癌患者FOLR1、MSLN 表达的因素（

P

﹤0.05）。（表3）

表3 卵巢癌患者FOLR11、MSLN 蛋白表达情况影响因素的多因素分析

3 讨论

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，由于卵巢位于骨盆腔的深处，卵巢癌缺乏特异的症状和体征，发病隐匿，发现时患者大多处于晚期，并且失去了最佳治疗机会。晚期卵巢癌患者预后较差，如果在疾病的早期可以诊断卵巢癌，可能会提高治愈率和生存率。提高卵巢癌的早期诊断准确率对于改善患者的预后具有重要意义。血清肿瘤标志物是由肿瘤细胞异常表达产生的蛋白质和生物抗原，有助于恶性肿瘤的诊断和病情评估。由

FOLR1

基因编码的叶酸受体α通过糖基磷脂酰肌醇与细胞膜表面偶联的单链糖蛋白结合并转运叶酸进入细胞。FOLR1 在许多恶性肿瘤细胞（例如宫颈癌、肝癌、子宫内膜癌等）的基底膜和侧膜上显著表达。肿瘤细胞可以通过上调FORL1 增加叶酸的摄取，并促进DNA 合成以确保肿瘤细胞的快速增殖。研究认为，FOLR1 有利于肿瘤细胞的增殖和修复，与肿瘤细胞的恶性行为密切相关，并且与患者的临床特征有一定关系。本研究结果显示，卵巢癌组织中的FOLR1 阳性表达率明显高于癌旁正常卵巢组织，并且低分化、FΙGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者卵巢癌组织中FOLR1 阳性表达率较高，该结果表明，FOLR1 的表达对卵巢癌具有一定的诊断价值，这是因为FOLR1 有利于肿瘤细胞的生长和增殖，可以促进肿瘤细胞转移和其他恶性行为。本研究结果显示，卵巢癌组织中的FOLR1、MSLN 阳性表达率均明显高于癌旁正常卵巢组织，这表明FOLR1 和MSLN 可能共表达发挥作用。低分化、FΙGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者卵巢癌组织中MSLN 阳性表达率较高，可见，卵巢癌患者MSLN 蛋白阳性表达率较高，与临床分期、分化程度和淋巴结转移密切相关。这表明MSLN 可能是卵巢癌重要的不良预后因素。因此，抑制MSLN 的表达可能是减缓卵巢癌侵袭和耐药性的重要方向。

MSLN

基因位于16p13.3 号染色体上，含有17 个外显子，编码628 个氨基酸，在细胞内被蛋白酶水解并剪接成两部分，羧基端的疏水序列被糖基磷脂酰肌醇取代并偶联到细胞膜上，称为MSLN。MSLN 属于一种可以被单克隆抗体K1特异性识别的抗原，其基因编码产生的膜结合蛋白在常见的恶性肿瘤组织如卵巢癌、肺癌和宫颈癌中高表达。MSLN 是一种肿瘤分化抗原，主要影响恶性肿瘤细胞的分化程度及其生物学特性。在体外卵巢癌细胞实验中，已发现该蛋白的异常升高可能与恶性肿瘤细胞的增殖有关。研究表明，上皮性卵巢癌患者的临床分期越高、分化程度越低且有淋巴结转移患者的MSLN 蛋白阳性表达率越高，这与本项研究结果一致，本研究中低分化、FΙGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者卵巢癌组织中FOLR1、MSLN 阳性表达率均较高，不同年龄、化疗周期卵巢癌患者卵巢癌组织中FOLR1、MSLN 阳性表达率无差别。FOLR1、MSLN 表达水平可用于评估临床分期、分化程度和淋巴结转移，可预测疾病发展和预后。将卵巢癌患者的FOLR1、MSLN 水平作为因变量，将单因素分析中差异有统计学意义的因素作为自变量，进行多因素回归分析。结果显示，FΙGO 分期是影响卵巢癌患者FOLR1、MSLN 表达的因素。该结果表明，卵巢癌患者中FOLR1和MSLN的水平与FΙGO分期密切相关，三者的水平升高可反映卵巢癌的发展和恶化，可作为卵巢癌诊断和病情评估的指标。

目前临床对于卵巢癌的临床诊断指标尚不统一，本研究通过对卵巢癌组织中FOLR1、MSLN 蛋白阳性表达率进行研究，以期及时对卵巢癌患者进行早期诊断及改善预后。但本研究样本量很小，结果可能会存在偏差，因此下一步研究中需要扩大样本量以获得更准确的诊断结果。

综上所述，卵巢癌组织中FOLR1、MSLN 蛋白阳性表达率均较高，且受FΙGO 分期的影响，可以用于卵巢癌的早期诊断。