美藤果叶中提取羟基酪醇方法①

肖培富

（海南启星生物科技有限公司 海南三亚 572000）

羟基酪醇（hydroxytyrosol），化学名称为3，4‐二羟基苯乙醇，分子式为C8H10O3，即可溶于醇、水，又能溶于脂类溶剂［1］。羟基酪醇具有抗肿瘤、抗血栓、调血脂和抗功脉硬化，抗病原微生物，防治视网膜黄斑变性，抑制DNA 氧化损伤，抗炎、镇痛等药效，具有保护软骨和抗骨质疏松作用，还能有效降低和抑制吸烟対人体的危害，快速恢复体能，増强抵抗力和运动能力［2］。在食品工业中，羟基酪醇可作为天然防腐剂，防止食品的氧化变质。在营养保健领域，羟基酪醇可作为营养补充剂、抗菌剂，添加到各种食品中。在美容方面，羟基酪醇能有效增强皮肤弹性和润泽，减少紫外线对皮肤的损伤作用，延缓皮肤老化。在保健方面，可防止脑衰，延缓衰老，保持青春活力［3］。在防癌方面，可防治肺癌、乳腺癌、子宮癌、前列腺癌等，促进癌症后期恢复和提高化疗效果。羟基酪醇也被广泛用于农业病虫害防控［4］。

羟基酪醇主要分布在自然界，如橄榄枝叶中羟基酪醇含量为0.3%～0.8%［5］；美藤果叶中羟基酪醇的含量为0.7%～0.9%。目前，羟基酪醇的制备以化学合成法为主，以天然植物提取为辅。朱正红等［6］以对羟基苯乙醇为原料制备了羟基酪醇。叶建中等［7］采用超声波用90%的甲醇从油橄榄叶提取羟基酪醇。

美藤果（Plukenetia volubilis L.）又名印奇果、印加花生、南美油滕，原产于南美洲［8］。2006 年，我国云南、海南等地引种成功并推广。通过研究浸泡时间、温度因素、料液比等因素，探讨水提美藤果叶中羟基酪醇的最佳工艺，为工业化加工美藤果叶提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料

海南三亚红花村产的美藤果叶。

1.2 方法

50～70 ℃，以水为溶剂，循环提取2～3 次，每次1.5～3.0 h，第一次加水量为原料8 倍，第二次加水量为原料6倍，合并提取液，离心去杂，所得清液经等量D‐101树脂吸附，柱层析药液流速为2 BV/h，随后用4 BV 水快速洗脱去杂，30%乙醇解吸附2 次，第一次乙醇用量为4 BV，流速为1 BV/h，第二次乙醇用量为1 BV，快速解吸附；最后将洗脱液合并，60 ℃下减压蒸馏，回收乙醇并继续蒸发浓缩至d≥1.05 g/mL，冷冻干燥［9‐10］。

1.2.1 浸泡时间

取100 g 烘干美藤果叶（羟基酪醇的含量为0.8%）5 份，各加水2 000 mL，分别浸泡0、1、2、3、4、5 h，循环提取2 h，提取液离心分离（≥2500 rpm，10 min），弃去沉淀物，所得清液在60℃下减压浓缩至干，收集产品，称量、测定。

1.2.2 温度的影响

分别取100 g 烘干美藤果叶（羟基酪醇的含量为0.8%）5 份，各加水2 000 mL，不浸泡，提取 1 次，在30、40、50、60、70、80 ℃不同温度下循环提取4 h。提取液经离心分离（≥2 500 rpm，10 min），弃去沉淀物，所得清液置于旋转蒸发仪中在60 ℃下减压浓缩至干，收集产品，称量、测定。

1.2.3 清液的提取

分别取100 g 烘干美藤果叶（羟基酪醇的含量为0.8%）加水800 mL，不浸泡，60 ℃恒温条件下循环提取2 次，每次2 h。提取液经离心分离（≥2 500 rpm，10 min），弃去沉淀物，得到清液。

1.2.4 羟基酪醇的提纯

大孔树脂是中草药提取的常用树脂，将 D‐101 、 AB‐8、X‐5、HP‐20 树脂各 100 g 湿法装柱［11‐12］。各取 100 g 原料，加水 800 mL （第 2 次600 mL），升温至60 ℃后，恒温提取2 次，每次2 h，合并提取液，离心分离（≥2 500 rpm，10 min），弃去沉淀物，所得清液分别进行柱层析，60 ℃下减压浓缩至干，收集产品，称量、测定。

1.2.5 料液比

在60 ℃的条件下循环提取4 h。其他条件与1.2.4 相同，考察料液比1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14的提取效果。

1.2.6 提取时间

分别取100 g 原料，加水800 mL，在60 ℃恒温条件下提取，考察了0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h不同提取时间因素的影响。

1.2.7 提取次数

分别取美藤果叶100 g，加水800 mL，不浸泡，60 ℃直接提取，每次提取时间为2 h，研究提取次数为1，2，3，4，5次，考察提取次数。

2 结果与分析

2.1 浸泡时间的影响

由表1可知，浸泡时间对于产量和提取率并无影响，基于羟基酪醇的化学性质较为活泼，易被氧化，所以要尽可能地缩短生产周期。

表1 浸泡时间的影响

2.2 温度影响

表2 可知，当温度为60 ℃时，产量9.4 g，纯度是5.10%，提取率为60%，提取率最高。

表2 温度的影响

2.3 料液比

由表3可知，当料液比为1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14时，结果相差不大，但1∶4 的料液提取率相对要低一些。

表3 料液比的影响

2.4 提取时间因素

由表4 可知，提取时间低于2 h 时，产量和提取率有明显差异，当提取时间≥2 h 时，差异不大，这可能是由于当提取时间过短（＜2 h），产量和提取率偏低，但提取时间过长，提取率增加并不明显，反而增加生产成本。综合考虑，提取时间2 h为最佳实验条件。

表4 提取时间的影响

2.5 提取次数

由表5 可知，最佳提取次数为2 次，产量为13.8 g，提取率86.8%。

表5 提取次数的影响

2.6 纯化方法研究

由表6 可知，4种树脂的纯化效果无明显差别。基于D‐101的价格、使用周期、供应来源、再生等因素考虑，选择D‐101树脂作为最佳纯化树脂。

2.7 干操方法的筛选

结合轻基酪醇的化学性质及生产实际，首选冷冻干燥方式。将洗脱液在60 ℃下减压蒸馏回收乙醇，并继续蒸发浓缩至d≥1.05 g/mL，冷冻干燥。

3 结论

水提美藤果叶提取羟基酪醇最佳条件为：取烘干美藤果叶（羟基酪醇的含量为0.8%），以水作为溶剂，提取温度为60 ℃，提取时间为2 h，料液比为1∶8，纯化用树脂为D‐101，冷冻干燥，原料提取物产率为2.5%～3.1%，其中羟基酪醇的含量为25%～30%，美藤果叶中提取的羟基酪醇含量为28.44%，原料产物有效成分的提取率为82%～85%。采用水提美藤果叶羟基酪醇，大大降低了生产成本，提取工艺合理，安全，操作简单，提取物杂质少。