免疫组化染色对病理技术质量控制的影响

邢延青

（中国人民解放军联勤保障部队第九六O医院，山东 济南 250000）

0 引言

临床病理学诊断的重要部分为病理技术，切片质量直接影响了对疾病判断的准确率，所以病理技术质量控制尤为重要。常规的病理制片，存在一定的诊断局限性，容易漏诊或误诊。随着现代医疗水平的不断提高，免疫组化技术水平逐渐提升，这种技术切片质量高，诊断准确，已成为最普遍以及不可替代的辅助诊断技术[1]。本研究就100例患者为研究对象，对免疫组化染色对病理技术质量控制的影响进行探究。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选取2019年12月至2020年12月在中国人民解放军联勤保障部队第九六O医院接受治疗的100例患者作为此次研究对象，并将其随机分为研究组与对照组，每组患者50例，其中，对照组男28例，女22例，年龄31～78岁，平均（48.38±6.76）岁；研究组男23例，女27例，年龄35～80岁，平均（52.56±4.73）岁。100例患者均自愿参与研究，签署了《知情同意书》，比较两组患者的基本资料，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法。对照组采用常规苏木精-伊红染色法（HE染色法），首先将组织蜡块进行常规切片、烤片处理，随后二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各脱蜡5 min，无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇洗涤各1 min，流水冲洗后，放入苏木精染色5～10 min，水洗，1%盐酸乙醇分化数秒，水洗，0.5%氨水反蓝，水洗，醇溶性伊红染色数秒钟，最后85%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ脱水，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明，中性树胶封片。染色结果：细胞核呈蓝色，细胞浆呈粉红色。研究组采用免疫组化染色，首先将切片在室温下进行常规脱蜡处理，在常温下放入3%的双氧水中浸泡20 min；浸泡完之后，用PBS将切片进行冲洗，注意需要清洗三次以上，5 min一次，清洗时间要大于15 min；然后将700 mL+pH6.0的柠檬酸缓冲液倒入1000 mL的烧杯中，对其进行加热，加热至沸腾；将记HBsAg、HBcAg、ki-67、CK19抗体的切片均放入烧杯中并做好标记，加热15 min后取出；在常温下冷却后用pH7.4的PBS对切片进行清洗，次数与时间同上；所有切片均给予一抗处理，放置于4℃的冰箱内过夜孵育；用pH7.4的PBS进行冲洗，次数时间同上，再给予切片滴加二抗，放置于常温下孵育，时间为10 min；最后一次用pH7.4的PBS进行冲洗，次数时间同上，5～10 min的DAB显色；水洗后用苏木精进行衬染，用脱水透明中型树胶进行封固；将阴性阳性设置好以便针对不同的抗体[2]。常规病理制片的切片结构要求完整、薄，最佳厚度为3μm，无破损无折叠，细胞的形态可以观察清楚，染色较为明显，能够较好的进行核物质对比；免疫组化染色切片固定要及时，染色要清晰，对比鲜明，透光性好，结构完好无损，能够精确定位阳性物质，背景干净，色泽艳丽，无特异性着色。

1.3 指标观察。观察比较两组患者的切片优良总计率和确诊率。切片质量标准[3]：优：患者病理活检组织一致，细胞结构没有损坏、不收缩，细胞形态清楚，染色明显，能够很好的对比核质染色，没有脱片现象；良好：患者病理活检组织不完全一致，细胞结构没有明显损坏、不收缩，细胞形态较为清楚、染色较为明显，能够较好对比核质染色，脱片现象不明显；差：患者病理活检组织不一致，细胞结构有明显损坏、细胞收缩，细胞形态模糊，染色无法分辨，核质染色对比效果较差，有严重的脱片现象。

1.4 统计学分析。将数据输入SPSS 20.0中处理，计量资料用（）表示，用t、χ2检验，计数资料n/%表示，P＜0.05，组间数据比较存在意义。

2 结果

2.1 两组患者切片优良率。经过对比统计，研究组患者50例，其中优良切片48例，切片优良率为96%；对照组患者50例，其中优良切片有40例，优良切片率为80%，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者切片优良率[n（%）]

2.2 两组患者的确诊率。通过免疫组化染色的研究组确诊率为（94.00%），常规HE染色对照组确诊率为（74.00%），研究组确诊率明显高于对照组确诊率，组间数据比较差异有统计意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组患者的确诊率[n（%）]

3 讨论

随着我国医疗水平的不断提高，人们清楚的认识到病理技术质量控制的重要性。切片质量对病理诊断具有重大意义，免疫组化染色能够有效的提高切片质量。

免疫组化染色原理是合酶聚合物与二抗相结合，形成了多聚螯合物，再结合一抗，使得抗原抗体的信号放大，由于不会有链霉菌抗生物素蛋白在多聚物中出现，所以不会发生背景染色的现象，也就提高了切片的质量。在施行免疫组化染色时，最为重要的一步就是取材，在进行取材时极易出现以下问题[4]：①免疫组化取材时，对切片的质量要严格把控，要保证选取的病变组织适宜且体积厚度一致，对标本的描述要详尽，对标本的组织部位记载要准确，对标本要进行及时处理和保存，避免标本被污染，影响切片效果。②操作人员要在取材时就严格把控好切片的质量标准。后期进行固定操作后，能让新鲜组织保存好原来细胞形态，未能固定好，组织会形成自溶现象，在术后取得组织标本后，需尽快放置在固定液之中，让其充分固定好，固定时间依据样本大小不同存在差异性，大样本固定时间在18～24 h，小样本固定时间在4～6 h。免疫组化染色操作时，需良好染色试剂，能直接影响染色效果，脱蜡、浸水、脱水及透明时，选用酒精及二甲苯等试剂，需及时更新和补充，每一种试剂是否稳定会直接影响临床病理诊断结果。常见问题为[4]：①试剂的保存方法存在问题，使得试剂产生挥发，造成纯度下降；②长时间未能更新制剂，未能及时添加缺漏制剂，延滞了切片工作，使得组织切片质量下降，直接造成诊断准确性受到影响；在日常工作中，应定期更换免疫组化试剂，严格把关试剂使用、采购及配置，保障所有切片质量。在控制好免疫组化治疗过程中，最为重要的步骤为[5]：①对抗原进行高压修复操作，对染色结果有着重大影响的操作就是抗原修复，一旦在抗原修复过程中，修复不当或修复时间短和温度低，会造成无色片或假阴性片的形成；②组建免疫组化抗原阳性和阴性对比化学实验室时，检验免疫组化染色结果通过设置对照片来提升可信性，让免疫组化形成标准化操作，这个步骤不可缺少，也是极为关键步骤，完善质量技术指标也是我院医务人员形成自我保护的一种良好方式；③免疫组化染色操作时，对操作人员的要求非常高，所有操作严格依据要求进行，这也是保障染色质量和可重复性的重要依据。

本研究中通过对比常规HE染色与免疫组化染色对病理技术质量控制的影响，发现，研究组患者50例，其中优良切片48例，切片优良率为96%；对照组患者50例，其中优良切片有40例，优良切片率为80%；研究组确诊率为（94.00%），常规HE染色对照组确诊率为（74.00%），结果显示，使用免疫组化染色的研究组患者，切片优良率明显高于使用常规HE染色对照组；研究组的确诊率比对照组确诊率要高，这些结果都可以说明免疫组化染色的有效性、准确性，在常规HE染色切片不能对病例做出诊断时，可优先选择免疫组化染色技术进行辅助诊断。

综上所述，免疫组化染色对病理技术质量控制起着积极作用，能够有效地提高诊断的准确性，让患者能够得到快速且全面的治疗，同时也使病理技术的质量更上一层楼。