非小细胞肺癌患者血浆LncRNA UCA1与吉西他滨耐药相关性研究

韦瑞富

肺癌为全球发病率及致死率较高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌占比较高。吉西他滨联合顺铂为中晚期肺癌患者的常用方案，但个体耐药性、化疗敏感性有差异，因而筛选与化疗药物敏感相关分子标志物，选择适宜方案是研究重点［1］。长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）在癌症发展过程中发挥重要作用，LncRNA 异常表达可广泛调控基因表达，经参与X 染色体沉默、基因组印迹及转录激活等途径，调控细胞增殖、分化及凋亡，参与肿瘤发生发展［2］。尿路上皮癌胚抗原1（urothelial carcinoma associated 1，LncRNA UCA1）为尿路上皮癌中一类LncRNA，经靶向调控微小RNA（microRNA，miRNA）而影响癌症［3］。研究发现，LncRNA UCA1 在非小细胞肺癌中有重要临床意义，且对caspase-3/7 活化和细胞凋亡诱导有一定影响［4］。本文主要分析LncRNA UCA1 与非小细胞肺癌患者吉西他滨耐药的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年4月至2020年10月本院收治的非小细胞肺癌患者84 例。纳入标准：①符合非小细胞肺癌的相关诊断标准［5］，且经病理组织学检查确诊；②临床分期为ⅢB～Ⅳ期，且预计生存期＞2年，卡氏评分（karnofsky performance status，KPS）［6］＞60 分；③均有可客观评价的病灶，且美国东部肿瘤协作组（Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG）全身功能状态评分［6］≤2 分。排除标准：①合并严重心、肝、肾功能不全者；②合并恶性肿瘤或有精神障碍性疾病者；③未完成既定化疗方案或因不耐受化疗而中途退出者。研究经本院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。84例患者随机分为吉西他滨组（n=43，予以吉西他滨/顺铂治疗）、紫杉醇组（n=41，予以紫杉醇/顺铂治疗）。见表1。

表1 一般资料比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general information［n（%），（±s）］

表1 一般资料比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general information［n（%），（±s）］

组别吉西他滨组紫杉醇组χ2/t 值P 值n 性别男28（65.12）24（58.54）0.385 0.535女中高43 41 15（34.88）17（41.46）年龄（岁）54.15±5.63 54.26±5.57 0.090 0.928临床分期ⅢB 23（53.49）21（51.22）0.043 0.835Ⅳ期20（46.51）20（48.78）吸烟31（72.09）26（63.41）0.725 0.394饮酒22（51.16）18（43.90）0.443 0.505分化程度低20（46.51）18（43.90）2.078 0.354 22（51.16）19（46.34）1（2.33）4（9.76）病理类型腺癌10（23.26）8（19.51）0.175 0.676鳞癌33（76.74）33（80.49）

1.2 方法

1.2.1 治疗方法

吉西他滨组予以吉西他滨/顺铂治疗：吉西他滨1 000 mg/m2，第1 d、第8 d 静滴；顺铂25 mg/m2，d1～d3 静滴，以21 d 为1 个周期，连续治疗2 个周期。紫杉醇组予以紫杉醇/顺铂治疗：紫杉醇150 mg/m2，d1 静滴；顺铂25 mg/m2，d1～d3 静滴。均以21 d 为1 个周期，连续治疗2 个周期。

1.2.2 化疗疗效评定

依据世界卫生组织（world health organization，WHO）的实体瘤近期疗效评价标准［6］，分为完全缓解（complete response，CR）、部分缓解（partial response，PR）、疾病稳定（stable disease，SD）、疾病进展（progressive disease，PD）。以CR+PR 为化疗有效/敏感，以SD 为化疗效果中介，以PD 为化疗耐药。

1.2.3 血浆LncRNA UCA1 表达水平测定

采集化疗前、化疗1 个周期、化疗2 个周期时的静脉血4 mL，4 000 r/min 速率离心10 min，取上层血浆置于无RNA 酶的5 mL 离心管，-80℃冰箱保存备用。采用TrizolTM LS Reagent（中国赛默飞世尔科技有限公司）提取总RNA 后对RNA 浓度进行检测，应用逆转录cDNA 合成试剂盒（中国赛默飞世尔科技有限公司）合成cDNA。qRT-PCR 仪检测血清中LncRNA UCA1 表达水平，其引物序列为：上游引物为5′-TGCCAGCCTCAGCTTAATCC-3′，下游引物5′-TCCCTGTTGCTAAGCCGATG-3′，内参选择GAPDH，其上游引物为5′-AAGATGTTGCCAGGGAGGAC-3′，下游引物5′-TGGTCAGAAGACTTCCCTGG-3′。反应条件：95℃预变性60 s，1 个循环；95℃变性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸20 s，共45 个循环。采用实时荧光定量仪对LncRNA UCA1 水平进行测定，以2-△△CT法计算LncRNA UCA1 的相对表达量。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0 软件对数据进行处理。计数资料采用n（%）表示，采用χ2检验；计量资料以（）表示，采用独立样本t检验、单因素方差分析及LSD-t检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血浆LncRNA UCA1 表达水平及与临床参数的关系

耐药亚组LncRNA UCA1 表达水平高于中介亚组、敏感亚组，差异具有统计学意义（P＜0.05），三组其他临床参数比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 血浆LncRNA UCA1 表达水平及与临床参数的关系［n（%），（±s）］Table 2 Expression level of plasma LncRNA UCA1 and its relationship with clinical parameters［n（%），（±s）］

表2 血浆LncRNA UCA1 表达水平及与临床参数的关系［n（%），（±s）］Table 2 Expression level of plasma LncRNA UCA1 and its relationship with clinical parameters［n（%），（±s）］

临床资料性别敏感亚组（n=19）中介亚组（n=8）耐药亚组（n=16）χ2/F 值P 值男女3.161 0.206年龄（岁）临床分期ⅢBⅣ期吸烟饮酒分化程度10（52.63）9（47.37）53.78±5.46 5（62.50）3（37.50）53.69±5.42 13（81.25）3（18.75）54.83±5.57 11（57.89）8（42.10）12（63.16）10（52.63）5（62.50）3（37.50）6（75.00）4（50.00）7（43.75）9（56.25）13（81.25）8（50.00）0.194 1.019 1.454 0.029 0.825 0.601 0.483 0.985低中高9（47.37）9（47.37）1（5.26）3（37.50）5（62.50）0（0）8（50.00）8（50.00）0（0）1.706 0.841病理类型腺癌鳞癌LncRNA UCA1 5（26.32）14（73.68）0.43±0.06 1（12.50）7（87.50）0.64±0.07 4（25.00）12（75.00）0.75±0.09 0.645 83.033 0.724＜0.001

2.2 不同化疗效果患者的LncRNA UCA1表达水平

化疗后吉西他滨组不同化疗效果患者的LncRNA UCA1 表达水平比较差异有统计学意义（P＜0.05）。紫杉醇组不同化疗效果患者的LncRNA UCA1 表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 不同化疗效果患者的LncRNA UCA1 表达水平［n（%），（±s）］Table 3 Expression level of LncRNA UCA1 in patients with different chemotherapy effects［n（%），（±s）］

表3 不同化疗效果患者的LncRNA UCA1 表达水平［n（%），（±s）］Table 3 Expression level of LncRNA UCA1 in patients with different chemotherapy effects［n（%），（±s）］

注：与PD 比较，aP＜0.05；与SD 组比较，bP＜0.05；与PR 比较，cP＜0.05。

化疗效果CR PR SD PD F 值P 值吉西他滨组（n=43）例数9（20.93）10（23.26）8（18.60）16（37.21）表达水平0.38±0.05abc 0.47±0.06ab 0.64±0.07a 0.75±0.09 60.573＜0.001紫杉醇组（n=41）例数6（14.63）8（19.51）14（34.16）13（31.70）表达水平0.53±0.07 0.55±0.06 0.58±0.07 0.60±0.07 1.825 0.159

2.3 LncRNA UCA1 表达水平随化疗周期变化

化疗1 个周期、2 个周期，吉西他滨耐药亚组的LncRNA UCA1 表达水平增加，敏感亚组的LncRNA UCA1 表达水平下降（P＜0.05），而中介亚组的LncRNA UCA1 表达水平无明显变化（P＞0.05）。化疗1 个周期、2 个周期耐药亚组LncRNA UCA1 表达水平高于敏感亚组，中介亚组化疗2 个周期LncRNA UCA1 表达水平高于敏感亚组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 LncRNA UCA1 表达水平随化疗周期变化（±s）Table 4 Changes of the expression level of LncRNA UCA1 with chemotherapy cycle（±s）

表4 LncRNA UCA1 表达水平随化疗周期变化（±s）Table 4 Changes of the expression level of LncRNA UCA1 with chemotherapy cycle（±s）

注：与化疗前比较，aP＜0.05；与化疗1 周比较，bP＜0.05；与敏感亚组比较，cP＜0.05；与中介亚组比较，dP＜0.05。

化疗2 个周期0.43±0.06ab 0.64±0.07c 0.75±0.09acd 18.697＜0.001组别敏感亚组中介亚组耐药亚组F 值P 值n 19 8 16化疗前0.64±0.07 0.61±0.07 0.65±0.07 456.712＜0.001化疗1 个周期0.57±0.08a 0.62±0.07 0.70±0.06acd 22.357＜0.001

3 讨论

多数非小细胞肺癌患者在确诊时已处于晚期，吉西他滨为其一线化疗方案，但有效率仅25%左右，联合用药疗效也在50%左右［7］。LncRNA 为一类因缺乏开放阅读框架导致缺乏蛋白编码能力的非编码RNA，其中LnRNA UCA1 可在多种肿瘤中表达上调。Wang 等［8］发现LncRNA UCA1在较多肿瘤抗癌药物耐药中起着关键作用，下调LncRNA UCA1 可恢复药物敏感性。

本研究结果这表明非小细胞肺癌患者LncRNA UCA1 表达水平可能与其接受吉西他滨化疗的效果有相关性，与顺铂无相关性。吉西他滨为细胞周期特异性抗代谢类药物，其主要作用于DNA 合成期的肿瘤细胞，有抗瘤谱广、毒副反应轻等特点。LncRNA UCA1 可通过调节上皮细胞-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）及细胞凋亡参与肿瘤发生发展，且和多种肿瘤耐药有关，也可能参与吉西他滨耐药发展［9］。早期Liu 等［10］发现沉默LncRNA UCA1 可抑制肺癌细胞株A549 细胞迁移和侵袭，其作用机制可能与下调EMT 有关。Jun 等［11］则发现，LncRNA UCA1 可通过调节microRNA-143 表达来调控肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

本研究也发现，化疗1 个周期、2 个周期，吉西他滨耐药亚组的LncRNA UCA1 表达水平增加，敏感亚组的LncRNA UCA1 表达水平下降，而中介亚组的LncRNA UCA1 表达水平无明显变化，表明在化疗期间对非小细胞肺癌患者予以血浆LncRNA UCA1 水平监测可能有利于帮助判断其化疗效果。吉西他滨在细胞内代谢过程较复杂，有多种相关蛋白及因子参与，近年来临床对肺癌耐药研究逐渐从蛋白质拓展至RNA 及DNA 水平［12］。LncRNA UCA1 主要通过表观遗传学转录及转录后水平调控基因表达与翻译，从而参与肿瘤生物学功能［13-14］。本次也得出了相似结论，因此认为LncRNA UCA1可能是未来非小细胞肺癌防治新策略的潜在靶点，对其进行监测有重要意义。既往有研究［15］发现，LncRNA UCA1 可抑制糖代谢的关键酶并促进肺腺癌的转移能力，其可能成为肺癌新诊断指标及治疗靶点。Wu 等［16］发现，Lnc RNA UCA1 可通过microRNA-193a/HMGB1 轴促进肺癌细胞增殖、迁移。蔡华荣等［17］的研究显示，LncRNA UCA1 可通过靶向调控miR-185-5p 而促进非小细胞肺癌增殖、侵袭和转移，其作用机制可能与Wnt1/β-catenin 信号通路激活有关。本研究因条件限制，未作此方面的研究，后期将进一步开展体外实验进行探讨。

综上所述，非小细胞肺癌患者LncRNA UCA1与吉西他滨耐药有密切关系，LncRNA UCA1 可能是未来非小细胞肺癌防治新策略的潜在靶点。