老年高血压患者认知功能障碍与ApoA5 IVS3+476G＞A基因多态性关系

施勇 谢月萍 张春丽

高血压疾病是老年人常见慢性疾病之一，严重影响着老年人的生活与工作，有效预防老年人高血压疾病成为了医学界的主要研究的课题之一［1］。高血压疾病患者易出现认知功能障碍症状，尤其是老年高血压患者［2］。随着我国分子生物学技术以及生物信息学的不断发展，研究高血压疾病的遗传因素成为了当前医学界的热点之一。随着人们对高血压患者的认知功能障碍的关注度越来越高，更多的学者研究高血压认知功能障碍与遗传因素的关系［3］。载脂蛋白A5（Apolipoprotein A5，ApoA5）是载脂蛋白家族成员之一，是血浆重要的组成部分，且对血浆甘油三酯水平有着巨大的影响。载脂蛋白A5 有两个等位基因（T，C），共有三种基因型（TT、TC、CC）［4］。ApoA5基因在国内外已有研究，主要集中在与血脂代谢、动脉粥样硬化及冠心病方面，其基因研究位点主要是-1131T＞C、C56G，亦有少量文献报道ApoA5基因变异与脑梗死关系［5］，载脂蛋白A5 对中枢神经系统有着不利的影响，是导致患者发生认知功能障碍的主要因素［6］。而IVS3+476G＞A 位点与认知功能障碍的关系尚未见有文献报道。因此本文探究老年高血压患者认知功能障碍与ApoA5IVS3+476G＞A 基因多态性的关系。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年7月至2018年7月于本院诊治的90 例老年高血压患者。且分为老年高血压认知功能障碍组（n=40）和认知正常组（n=50）。正常组患者男性患者为25 例，女性患者为25 例，最小年龄为65 岁，最大的年龄为82 岁，平均年龄为（73.58±5.71）岁，文化程度初中及以下16 例，高中14 例，大学及以上20 例，平均舒张压为（83.58±10.71）mmHg，平均收缩压为（143.89±18.74）mmHg；老年高血压认知功能障碍组患者男性患者为20 例，女性患者为20 例，最小年龄为66 岁，最大的年龄为83 岁，平均年龄为（74.85±5.14）岁。初中及以下16例，高中9 例，大学及以上15 例，平均舒张压为（84.78±10.25）mmHg，平均收缩压为（142.14±17.65）mmHg；两组患者一般资料及学历比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。纳入标准：①在未服用抗高血压药物的情况下，收缩压≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）舒张压≥90 mmHg；②患者依从性良好且所选患者临床资料完整。排除标准：①既往有高血压史，目前正在服用抗高血压药物，血压虽然＜140/90 mmHg，亦诊断为高血压，临床资料不完整者；②继发性高血压、严重心脏病和脑血管意外者、糖尿病、甲状腺功能异常等内分疾病、抑郁、严重视听功能障及失语者，中神经系统感染性疾病、脑外伤、颅内脚以及神经外科手术史者；③恶性肿瘤、肝肾功能不全、其他严重躯体疾病和精神疾病等患者。本研究所选患者均知情同意并签署知情同意书，研究经伦理委员会同意。

1.2 研究方法

1.2.1 一般资料的收集

采用调查问卷的形式收集患者的一般资料，即年龄、性别、身高、体重以及学历等因素，且询问患者的吸烟和饮酒史。

1.2.2 血压测量

按照WHO 标准［7］，采用汞柱式标准袖带血压计对患者的血压情况进行测量，需测量3 次，时间间隔控制在2 min，取3 次测量值的平均值作为患者的血压值。

1.2.3 认知功能的测定和分组

本文的认知功能障碍和认知功能正常分组标准如下：利用国际通用智力状况量表（Mini Mental state examination，MMSE）［8］测定患者的认知功能。0～30 分是量表的评分范围，其中≤24 分者为认知功能障碍组，＞24 分者为认知功能正常者。

1.2.4 载脂蛋白A5 基因多态性检测

本文的载脂蛋白A5 基因多态性检测为：利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术测定患者的ApoA5基因。

1.2.4.1 标本采集及检测 所有研究对象均为入院后第二天清晨空腹坐位抽取肘静脉血两管各3 mL，一管不抗凝，待血液凝固后，以3 000 rpm 离心10 min，分离血清。ApoA5采用免疫透射比浊法，试剂盒由英国RAnDOX 公司提供。全部测定工作在南宁市第一人民医院检验科完成，使用日立7170 全自动生化分析仪进行检测。另一管用EDTA 抗凝，低渗法裂解红细胞，离心获得白细胞，采用DNA 提取试剂盒提取基因组DNA（ABI 公司，美国）。

1.2.4.2 引物设计与PCR 依据APO A5 基因的等位点的核苷酸碱基序列设计引物，正义链：5′-CTC AAG GCT GTC TTC AG-3′。反义链：5′-CCT TTG ATT CTG GGG ACTG G-3′（上海生工生物工程有限公司合成）。PCR 反应体系：总反应体系10 μL 中含有模板基因组1.0 μL，2.5×buffer（含Mg2+）4.0 μL，4×dnTP 4.7 μL，taq 酶0.1 μL，引物各0.2 μL。反应条件：95℃预变性5 min；95℃30 s，64℃30 s，72℃30 s 共35 个 循环；72℃延伸10 min。取PCR 产物约10 μL 用2%琼脂糖凝胶电泳后，结果为一条约为280 bp 大小的目标条带。

1.2.4.3 基因型分析 取PCR 产物约5 μL 进行酶切，内切酶Fau I（由NEB 公司提供）。酶切总反应15 μL 反应体系中含：10×NEB 缓冲液1.5 μL，PCR产物5 μL，内切酶0.8 μL。反应条件：55℃温育3 h，4%琼脂糖凝胶电泳。根据本所研究片段酶切位点，酶切结果：141 bp、114 bp、25 bp 大小的三条带为纯合子TT 型；141 bp、73 bp、41 bp、25 bp 大小的四条带为杂合子TC 型；141 bp、73 bp、41 bp、25 bp大小的两条带为纯合子CC 型。为进一步证实PCR 结果，将PCR 产物及酶切产物进行基因测序（广州达安基因股份有限公司完成）。

1.3 统计学分析

采用SPSS 25.0 进行数据分析；计量资料采用（）表示，采用t检验；计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；比较影响因素采用单因素及Logistic 多因素回归分析并筛选差异明显的危险因素；以统计学P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的ApoA5 IVS3+476G＞A 位点多态性基因型频率比较

认知障碍组ApoA5IVS3+476G＞A 位点多态性基因型频率与正常组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），认知障碍组TC 的频率和CC 的频率明显高于认知正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者的ApoA5 IVS3+476G＞A 位点多态性基因型频率比较［n（%）］Table 1 Comparison of ApoA5 IVS3+476G＞A site polymorphism genotype frequency between 2 groups of patients［n（%）］

2.2 两组患者的ApoA5 IVS3+476G＞A 位点等位基因频率比较

认知障碍组ApoA5IVS3+476G＞A 等位基因频率与正常组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），认知障碍组明显高于认知正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组患者的ApoA5 IVS3+476G＞A 位点等位基因频率比较［n（%）］Table 2 Comparison of ApoA5 IVS3+476G＞A locus allele frequency between 2 groups of patients［n（%）］

2.3 高血压患者认知功能障碍因素分析

认知障碍组ApoA5IVS3+476G＞A 基因的TT、TC、CC 与认知功能障碍呈现出正向相关性（P＜0.05），文化程度是影响认知功能障碍的保护因素（P＜0.05）。见表3。

表3 高血压患者认知功能障碍影响因素Table 3 Analysis of influencing factors of cognitive dysfunction in patients with hypertension

3 讨论

高血压疾病具有诸多特点，如①血压变异性较大，患者极易发生低血压症状；②患者的收缩压增加，促使患者的脉压也在增加；③患者在患有高血压疾病时，其患有的并发症以及合并症也多，包含糖尿病、高血脂、高尿酸血症等。相关的研究表明，30%～50%的高血压患者的致病因素为遗传因素。即该种疾病是环境因素与遗传因素相互作用的一种多基因遗传性疾病，其可以分为两种遗传形式，即显著遗传和多基因关联遗传［9］。

ApoA5基因位于人类染色体11q23，长约2.5 Kb，与载脂蛋白A1/C3/A4 基因簇紧密相连，组成一个基因家族。apoAV 由肝脏特异性表达，分泌于血浆后存在于高密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及乳糜颗粒中，生理情况下血液中apoAV 浓度极低，仅有114～258 μg/L。多项研究表明，ApoA5基因多态性与TG 升高、冠心病、脑梗死及代谢性疾病有一定的关联性且存在种族及地域差异［10-12］。如今，高血压患者的认知功能障碍与载脂蛋白A5基因多态性的关系成为了热门话题，且国内外的研究较少［13］。本文认为载脂蛋白A5 基因对于高血压患者认知功能障碍有着较大的影响，它是导致患者发生认知功能障碍的危险因素［14］。且随着患者年龄的增加，患者的认知功能越来越低，如果患者具有较高的学历，其可以有效的预防高血压患者发生认知功能障碍症状［15］。

多项研究表明，ApoA5基因位于人类的染色体11q23，长约2.5 kb，与载脂蛋白A1/C3/A4 基因簇紧密相连，组成一个基因家族。ApoA5由肝脏特异性表达，分泌于血浆后存在于高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）及乳糜颗粒中，生理情况下血液中ApoA5 浓度极低，仅有（114～258）μg/L.ApoA 主要影响血浆TG 代谢并呈负相关。敲除纯合子基因的小鼠的VLDL 水平升高，相反，转染ApoA5基因的小鼠VLDL 水平下降：而敲除杂合子基因的小鼠的VLDL 水平介于纯合子基因敲除小鼠和野生型小鼠之间，以上这些结果均表明ApoA5基因对TG 有负性调节作用。ApoA5基因多态性与TG 升高、冠心病、脑梗死及代谢性疾病有一定的关联性且存在种族及地域差异，研究发现，ApoA5IVS3+476G＞A 基因型是所有缺血性卒中的危险因素，其机制主要是通过提高TG 水平，加速动脉粥样硬化进程，从而增加高血压的发生风险。目前国内尚无研究报道ApoA5IVS3+476G＞A 位点与脑梗死的关系，中国汉族人群的高血压患者是否与ApoA5IVS3+476G＞A 位点变异有关尚未明确。与国外关于白种人的ApoA5IVS3+476G＞A 位点突变作为脑梗死危险因素的研究结果相似。

由于本实验例数较少，尚不能准确的反映APOA5基因IVS3+476G＞A 位点是否在我国汉族人群中存在突变，更无法进一步研究此位点突变是否与认知功能障碍的发生有关，有待进一步扩大样本研究。综上所述，本文的实验分析说明ApoA5IVS3+476G＞A 基因多态性可能影响患者的认知功能，对深入研究高血压患者认知功能障碍具有着重要意义。同时对预防高血压患者发生认知功能障碍具有指导意义。综上所述，本文的实验分析说明ApoA5IVS3+476G＞A 基因多态性可能影响患者的认知功能，对深入研究高血压患者认知功能障碍具有着重要意义。同时对预防高血压患者发生认知功能障碍具有指导意义。