LC-MS/MS 测定蔬菜中苯醚甲环唑残留的研究

冯 涛 阮世勇 罗苑铭 许贞侃 陶 森

（阳江市检测检验中心，广东阳江 529500）

农药具有除草、防治病虫害、提高作物产量等作用，农药的不规范使用，会使农产品存在农药残留超标的风险，对人体和环境造成危害。为规范农药的使用，国家卫健委等部门颁布了农药残留安全标准，农业等部门一直在加强农药残留的检测。因此研究农药残留检测技术，对环境和人体的健康与安全具有重要意义。本试验以苯醚甲环唑为研究对象，大白菜为试验样品，采用试验室经典的提取净化方法对样品进行前处理，通过对比回收率以选取出最优的前处理方法，研究结果可为蔬菜中苯醚甲环唑的检测提供参考。

1 材料与方法

1.1 试剂、耗材与仪器

苯醚甲环唑标准品，SB05-170-2008，农业部环境保护科研所；乙腈、丙酮、正己烷、甲酸、甲醇、二氯甲烷，均为色谱纯，德国默克公司；乙酸铵，色谱纯，上海安普；氯化钠，分析纯，广州试剂；QuEChERS 净化柱、氨基净化柱、弗罗里硅净化柱、C18净化柱，上海安普科学仪器有限公司；0.22 μm 微孔滤膜，天津市津腾实验设备有限公司。

LCMS－8050 高效液相色谱串联质谱仪，日本岛津公司；31-8KS 离心机，美国Sigma 公司；MFV-24 氮吹仪，广州得泰仪器科技有限公司；KS130 振荡器，德国IKA 公司；KQ2200DE 超声仪，昆山超声仪器有限公司；T25 均质机，德国IKA 公司。

1.2 试验方法

1.2.1 仪器参数

1.2.1.1 液相色谱参数

色谱柱：C18（75 mm×3.0 mm，2.7 μm）；流动相：A 相为2 mmol 乙酸铵-0.1%甲酸水溶液，B 相为乙腈；流速：0.4 mL/min；柱温：40 ℃；采用梯度洗脱，洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序

1.2.1.2 质谱参数

离子源：ESI；离子化方式：ESI+；离子源温度：300 ℃；加热气：10 L/min；雾化气：3.0 L/min；干燥气：10 L/min；DL 管温度；250 ℃；定量离子对；405.90>251.00 CE -21V；定性离子对405.90 >337.00 CE-21V。

1.2.2 方法学验证

配制质量浓度为0 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L 的系列苯醚甲环唑标准溶液进行测定，验证其线性，对50 μg/L 标准溶液重复测定6 次，记录峰面积计算RSD 表示精密度，记录10 μg/L 标准溶液仪器测定的信噪比，评价仪器检出限；在提取净化试验的基础上进行重现性试验和加标回收试验，评价检测方法的精密度和准确度。

1.2.3 提取净化方法筛选

选取QuEChERS 净化柱、氨基净化柱（NH2）、弗罗里硅净化柱（Florisil）、C18净化柱4 种试验室常用净化小柱，向阴性样品基质溶液加入10 mg/L苯醚甲环唑标准储备液0.04 mL 定容至10 mL，制备成40 μg/L 的基标准溶液，取2.0 mL 基质标准溶液分别过4 种净化柱，测定基质净化液浓度，计算回收率，通过回收率评价净化效果。

在净化试验的基础上，选取振荡、超声、均质3 种常见的提取方法，对基质加标样品分别提取，经净化后上机测定，通过对比回收率评价提取效率。

2 结果与分析

2.1 方法学验证试验结果

以苯醚甲环唑标准溶液质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标进行一次线性回归拟合，线性方程为y=27 679x -17 320，R2=0.999，表明苯醚甲环唑在质量浓度为0 μg/L～200 μg/L 范围内线性良好，10 μg/L 标准溶液信噪比S/N=2 876，远大于3，仪器检出限低于10 μg/L，满足分析要求。

仪器测定的稳定性是检测方法稳定有效使用的重要方面，影响液相色谱-串联质谱仪测定稳定性的因素主要有液相端的色谱条件，包括柱温、柱压、流动相pH、流动相比例等，通过影响分离度和出峰时间影响测定稳定性；质谱端离子化条件，包括雾化气温度、离子源温度、加热气温度等。本试验采用重复测定的方法评价仪器测定的稳定性，对50 μg/L 苯醚甲环唑标准溶液重复测定6 次，测定结果见表2。

表2 仪器测定稳定性试验测定结果

由表2 可知，峰面积RSD=1.01%，表明仪器检测稳定性良好。

2.2 净化柱筛选

不同净化柱处理试样的回收率如图1 所示。

由图1 可知，QuEChERS 净化效果最好，QuEChERS 小柱中包含Mg2SO4、PSA、GCB、C18等多种净化填料，对色素、脂肪、蛋白质、纤维等均具有良好的净化效果；C18净化柱净化效果最差，回收率仅为19.08%，可能的原因为苯醚甲环唑在C18净化小柱上保留能力差，净化过程中流失严重。因此本试验选用QuEChERS 净化小柱，该净化方法回收率高、操作简单、高效，适用于苯醚甲环唑检测中的净化。

2.3 提取方法的选择

在净化试验的基础上，采用振荡、超声、均质3 种提取方法进行试验，基质加标样品分别采用3种方法提取后，均使用QuEChERS 净化上机，通过对比回收率选取最佳提取方法，试验结果见图2。由图2 可知，3 种提取方法的回收率在77.30%～91.26%之间，均满足农残检测回收率应在70%～120%的要求。其中振荡提取效率最高，但所需时间一般为30 min，比超声和均质时间长，对于回收率要求高的检测任务可采取该方法。均质提取回收率最低，但时间最短，2 min 内即可完成提取操作，适用于食物中毒应急检测等对时效性要求高的检测任务。

图2 不同提取方法回收率

2.4 重复性试验

重复性试验是评价检测方法稳定性的有效方式，取大白菜阴性样品6 份，每份10 g，加入10 mg/L 的标准储备液0.1 mL，制备0.1 mg/kg 的加标样品，向加标样品中加入10 mL 乙腈，5 g 氯化钠，采用振荡提取，QuEChERS 净化方法对加标样品进行前处理，上机测定，样品溶液理论值为100 μg/L，重复试验6 次，记录测定浓度和峰面积，计算测定结果RSD，衡量检测方法精确度，试验结果见表3。

表3 重复性试验测定结果

由表3 可知，测定结果中过半数据结果大于理论值，回收率高于100%，可能是基质效应引起的，即使用该方法测定大白菜中的苯醚甲环唑时基质会增大苯醚甲环唑在仪器上的响应值，但基质效用小于10%，影响不显著，通过使用空白基质溶液配制标准曲线的方式可以控制基质效用。

2.5 回收率试验

取阴性样品7 份，其中1 份为空白对照，其余6 份分成2 组，每组3 份，按低、中、高三水平加标，加标样品4 ℃冷藏过夜使农药同基质充分接触。取出样品使之恢复至室温，加20 mL 乙腈，5 g氯化钠，10 000 r/min 均质提取30 s，离心取上清液至QuEChERS 净化小柱中，振摇1 min，8 000 r/min离心10 min，取上清过孔径0.22 μm 微孔滤膜上机测定。加标回收试验结果如表4 所示。

表4 加标回收试验测定结果

由表4 可知，低、中、高三水平回收率为77.59%～96.63%，回收率表现出随加标浓度增大而增大的趋势，组内平行样品平行性良好，可满足农残检测要求。

3 结论

试验结果表明，蔬菜中苯醚甲环唑的测定中QuEChERS 净化效果好、效率高，3 种提取方法没有显著差异，振荡提取方法的回收率略高于其他2种，对于大白菜中的苯醚甲环唑最优的前处理方式为振荡提取、QuEChERS 净化。通过重复性试验和加标回收试验可知，运用LC-MS/MS 法测定蔬菜中的苯醚甲环唑，具有灵敏度高、精密度良好，检测结果准确高效的优点，能够满足国家规定的要求。