XPertMTB/RIF 检测技术在肺结核诊断中的临床应用

文静

（广西河池市南丹县人民医院 检验科，广西 河池 547200）

0 引言

结核病是结合分期杆菌引起的传染病，直接危害了机体多器官系统，我国2020年结核病流行学调查中，全国活动性肺结核患者高达499万例，每年新发结核患者约100万例[1]。随着临床医学不断发展，肺结核致死率已经较低，尤其是抗肺结核药物的出现，为肺结核的治疗提供了诸多便利，但由于化疗方案不合理，服药不正规及单一用药等，使结核杆菌产生耐药性，不易被治愈[2-3]。传统方法中的痰涂片找抗酸杆菌阳性率不高及金标准的痰结核菌培养时间过长均难以实现对结核病的做出早期诊断及及时有效的治疗，GeneXPertMTB/RIF作为一种实时荧光定量核酸扩增检测技术以诊断自动化，操作简单化，检测周期短的优势成为结核病早期诊断有利补充[4]。本文把该项检测技术纳入研究，选择对象为我院收治的76例临床确诊的肺结核患者，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选取广西河池市南丹县人民医院2020年10月至2021年5月收治的76例肺结核患者纳入研究，其中男61例，女15例，年龄15～82岁；平均（45.65±7.58）岁。纳入标准：①均为首次确诊患者，未进行抗结核治疗；②知晓本文相关研究；③同时进行痰涂片、痰培养及GeneXPertMTB/RIF检测。排除标准：①严重器官功能性障碍；②呼吸道中未留存足够标本患者；③合并其他传染疾病者。

1.2 方法。充分漱口后，用力深咳收集下呼吸道痰液及时送检，一式三份，分别进行金胺O染色法、罗氏培养、XPertMTB/RIF检测。金胺O染色法：按照抗酸染色液（荧光金胺O法）试剂盒说明进行专业操作。镜下查见呈明亮的橘黄色或黄绿色细长略带弯曲的杆菌即为抗酸分枝杆菌阳性，否则即为抗酸分枝杆菌阴性。

罗氏培养：按照罗氏培养管试剂盒说明进行专业操作。接种后第3 d、第7 d各观察，典型的分歧杆菌菌落粗糙且为淡黄色，菜花样干燥，如有菌落生长需要实施涂片镜检以鉴别污染，以及速生长分枝杆菌。每周观察一次，并及时记录，至第八周末，无菌生长，培养阴性。

XPertMTB/RIF：采用美国CePheid公司生产的GeneXPert仪器及XPertMTB/RIF检测试剂盒，检测痰中MTB及利福平耐药性。将痰标本与含氢氧化钠及异丙醇的处理液常规按1∶2混合，震荡均匀，常温静置15 min，使痰标本充分液化。再将处理后的痰标本转移至XPertMTB/RIF检测试剂盒中，置GeneXPert 系统全自动检测，在软件窗口直接明确结果。

质量控制：严格做好室内质量控制，积极参加广西检测能力验证的室间质评。

1.3 观察指标。记录三种检测方式下，患者阳性率情况。

1.4 统计学处理。本研究采用SPSS 18.0统计软件对本文数据计算，计量资料用表示，采用t检验，计数资料用百分比表达，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

三种检测方式阳性率。XPertMTB/RIF检测阳性率60.53%高于金胺O染色法40.79%、罗氏培养53.95%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 三种检测方法检测结果[n（%）]

3 讨论

结核俗称“痨病”，由于机体感染结核杆菌所致，是临床上常见的一种慢性的传染性疾病，不同季节均会发病。可影响全身多个器官（如脑膜、腹膜、肠、皮肤、骨骼等），尤其以肺结核发生率最高，主要表现为低热、乏力、消瘦等全身，系统症状主要在于咳痰、咯血、咳嗽、胸痛等，主要传播途径是呼吸道，传染源为传染性肺结核，具有较高的死亡率，成为人类重要致死传染病[5]。

我国结核病实验室检测结核菌，是按规定进行基本的检查方式，也就是标本涂片染色检查、药敏试验等。常规染色方法需要延长染色时间与加热，使得其着色；而金胺0荧光法属于荧光染色液，无需加热，相对较抗酸热染液更加安全。其染色原理在室温环境下染色复染，紫外光源荧光显微镜检查，而其他细菌与背景物质一般为暗黄色，此时可选择低倍镜检。而标本涂片抗酸染色操作较为简单，价格较低，已经在临床广泛用于结合杆菌检查，主要是在形态学观察下，受制痰液中分枝杆菌数量，检查期间敏感性较低，需要涂片中分枝杆菌达到103～104CFU/mL，对于部分患者无法检出，仅仅适合20%的活性结合人群，漏检率较高[6]，而且该方法无法区分非结核分枝杆菌（NTM）与结核分枝杆菌（MTB）。与涂片法相比，固体培养法灵敏度较高[7-8]，但检查时间较长，需要4～8周完成，会影响患者治疗，并会增加传播风险，无法满足临床诊疗要求。此时需要快速且简单的检查方式，用于临床诊断与治疗。

XPert MTB/RIF是一种新型方法，在2 h内完成痰样本中结核分歧杆菌复合群和利福平耐药rPoB基因突变检测，实现自动化扩增，操作简单，时效性较强的目标。有道报指出XPert MTB/RIF检测肺泡灌洗液诊断涂阴肺结核及结核病应急诊断灵敏度和特异度均较高[9-10]。本文将XPertMTB/RIF检测技术纳入研究，选择其他检测方式进行对比，结果显示：XPertMTB/RIF检测阳性率60.53%高于金胺O染色法40.79%、罗氏培养53.95%，差异有统计学意义（P＜0.05）。本文结果证实该方法整体检测情况理想，具有重要意义。目前XPertMTB/RIF检测已成为WHO重点推荐的肺结核和利福平耐药、以及HIV合并结核分枝杆菌感染疑似病例的重要检测方法。另外XPertMTB/RIF检测技术，利用巢式实时荧光聚合酶链反应，结合传统PCR检测需要的样品制备，使用独立一次性试剂盒，能够自动化完成，相比传统的PCR方法更简便、生物安全性更高、检测过程不会受到影响、硬件设施要求低等优势。XPertMTB/RIF实现了结核病患者从“检测＋等待”到“检测即治疗”的模式转换，这将是临床诊断肺结核的重要方式。

综上所述，XPert MTB/RIF在肺结核中，诊断价值较高，能够很好对患者进行诊断，操作简单、时间较短及安全性高，具有重要意义。