苯磺酸氨氯地平片与原研产品有关物质的对比研究

黄武军，鄢章龙，付向红，熊水莲，宋军

1.仁和（集团）发展有限公司，江西 樟树 331200；2.江西制药有限责任公司，江西 南昌 330052

苯磺酸氨氯地平片是临床常用的钙离子拮抗剂,是在高血压、冠心病、慢性稳定型心绞痛治疗过程中常见的药品选择之一。最初由Pfizer 公司研发，最早于1989 年在英国上市片剂Istin，是我国一致性评价289 目录中的一个，其质量标准在美国药典（USP40）、日本药典（JP16）、中国药典（2015年版）均有收载［1］。本研究对苯磺酸氨氯地平片有关物质检查的方法进行了探讨，并对江西制药有限责任公司的再评价产品及参比制剂中的有关物质进行了比较。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪：Waters2695 高效液相色谱仪系统、Waters2996 二极管阵列检测器，Waters 2487 紫外检测器，Empower 工作站；电子分析天平：CP224S电子天平（d=0.1 mg，赛多利斯公司）；CP225D 电子天平（d=0.01 mg，赛多利斯公司）。

1.2 试药

苯磺酸氨氯地平对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100374-201605，含量：100.0%）；氨氯地平杂质I 对照品（ACCS，批号：16072501，含量：96.4%）；苯磺酸氨氯地平片参比制剂（原研进口，批号：M69926），苯磺酸氨氯地平片待评价产品（批号1711064、1711093、1711094，由江西制药有限责任公司提供）；乙腈、甲醇、均为色谱纯（美国天地公司）；三乙胺为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 分析方法

2.1.1 供试品溶液制备取本品细粉适量（约相当于氨氯地平50 mg），置于50 mL 量瓶中，加流动相约40 mL，超声约30 min 使苯磺酸氨氯地平溶解，取出放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。

2.1.2 对照溶液制备取苯磺酸氨氯地平对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1 mL 中约含氨氯地平0.01 mg 的溶液。

2.1.3 系统适用性溶液取苯磺酸氨氯地平对照品5 mg，加浓过氧化氢溶液5 mL，置70 ℃加热10～30 min。

2.1.4 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（ACE，4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-0.7%三乙胺溶液（取三乙胺7.0 mL，加水稀释 至1 000 mL，用 磷 酸 调 节pH 值 至3.0±0.1）（42∶18∶40）；检测波长为237 nm；进样体积20 μL。

2.1.5 系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中，氨氯地平峰保留时间约为8 min，氨氯地平峰与氨氯地平杂质I（相对保留时间约0.6）之间的分离度应大于4.5，理论板数按氨氯地平峰计算不低于3 000。

2.1.6 测定法精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3 倍。

2.1.7 限度供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，氨氯地平杂质Ⅰ的峰面积乘以2 不得大于对照溶液主峰面积（0.3%），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（0.3%），小于对照溶液主峰面积0.1 倍的色谱峰忽略不计。

2.2 分析方法确认

按照《中国药典》2015 年版四部通则9101 药品质量标准分析方法验证指导原则，选取专属性、检测限、定量限、回收率、精密度、耐用性、稳定性作为确认指标，对本分析方法进行了确认，结果表明本法适用于本再评价产品有关物质的检测［2-12］。

3 杂质谱分析

对本再评价产品生产样品（批号1711094）、参比制剂Norvasc（批号：M69926）的有关物质进行高温、高湿、强光照射试验；对三批注册批样品进行长期稳定性实验；参比制剂及三批注册批样品进行加速稳定性实验，试验结果汇总如下。

表1 再评价产品与参比制剂在高温、高湿、强光照射下有关物质对比

表2 再评价产品与参比制剂稳定性实验有关物质对比

结果表明，再评价产品与参比制剂在长期与加速6 个月稳定性实验中，杂质均没有明显增加，杂质含量均符合规定；但在光照条件下均产生降解杂质，经与对照品比对，降解杂质为苯磺酸氨氯地平杂质I，通过数据对比，再评价产品中的有关物质含量均低于参比制剂，稳定性明显优于参比制剂，且本品的降解杂质谱与参比制剂一致。

4 讨论

参照《美国药典》与《中国药典》苯磺酸氨氯地平片有关物质的分析方法［13-15］，采用C18 色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）以甲醇-乙腈-0.7%三乙胺溶液（35∶15∶50）为流动相进行了确认，实验结果表明，苯磺酸氨氯地平与苯磺酸氨氯地平杂质分离度为12.9，符合药典系统适用性的要求，但主峰出峰时间较长（约21.7 min），于是对流动相比例进行了优化：采用C18 色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）以 甲 醇-乙 腈-0.7% 三 乙 胺（42∶18∶40）溶液对流动相比例进行了微调，结果表明：苯磺酸氨氯地平与苯磺酸氨氯地平杂质分离度为8.6，出峰时间适中（约8.6 min），符合药典系统适用性的要求，调整流动相比例后的理论塔板数和拖尾因子均优于药典的流动相比例，故选用甲醇-乙腈-0.7%三乙胺（42∶18∶40）作为本品有关物质分析方法流动相比例。

本研究中有关物质分析方法采用高效液相色谱法，其方法验证根据《中国药典》2015 版四部<9101>药品质量标准分析方法验证指导原则和ICH Q2（R1）的要求，对有关物质分析方法的专属性、检测限、定量限、回收率、精密度、耐用性、稳定性进行了验证，方法简便、灵敏，具有专属性，结果准确，可用于本品有关物质检查。

美国药典把氨氯地平乳糖加合物与氨氯地平半乳糖/葡萄糖加合物进行了单独控制，是因为其处方中含有乳糖，乳糖与氨氯地平伯氨基发生美拉德缩合反应产生有关物质；本再评价产品处方中无乳糖，故不对这两个杂质进行控制；试验中，对本再评价产品及参比制剂的质量进行了全面的对比研究（鉴别、有关物质、含量均匀度、溶出度、含量等），影响因素试验及稳定性试验结果表明，本再评价产品中的有关物质含量均低于参比制剂，稳定性明显优于参比制剂，且本品的降解杂质谱与参比制剂一致，表明本再评价产品处方、工艺优于参比制剂。