盐吴茱萸饮片的炮制方法及含量测定

孙立丽，高莹莹，商丽丽，李岩

（1吉林市食品药品检验所，吉林 吉林；2白城市食品药品检验所，吉林 白城）

0 引言

盐吴茱萸为吴茱萸的炮制加工品，有温中散寒，开郁止痛的功效。吴茱萸为常用中药，除《中国药典》1953年版未收载吴茱萸外，历版中国药典均有收载，现收载于《中国药典》2015版一部[1]，其收载的饮片有吴茱萸、制吴茱萸两种。主产于我国贵州、广西、湖南、湖北、云南、四川、江西、江苏、浙江等地。吴茱萸主要化学成分含有生物碱、挥发油、吴茱萸内酯（柠檬苦素）、黄酮、酚酸等成分。生物碱是吴茱萸的主要化学和生物活性成分，其中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、羟基吴茱萸碱是其主要活性成分[2,3]。药理作用吴茱萸具有止呕作用，对癣菌有抑制作用，同时具有抗病毒作用。对心脏具有广泛压力作用如抗心律失常，调节血压；同时具有抗动脉粥样硬化作用和抗炎作用。其盐制品镇痛作用最强,盐制后使吴茱萸生物碱溶出增加所致。

炮制目的：吴茱萸经盐制，盐能引药入肾，盐可凉血解毒，盐炙与药材配伍以提高疗效；改变药物性能，增强止痛、入肾作用；苷类及挥发油成分盐制后含量降低，减毒，缓和吴茱萸的燥性，滋阴降火；盐对植物细胞较强的穿透力可增加有效成分的溶出，提高药材使用效率；防腐矫味，便于储存[4,5]。

1 炮制工艺

1.1 样品收集

起草样品收集情况：共收集吴茱萸2个品种11批次药材，其中吴茱萸9批、石虎2批，来自湖北省、江西省、贵州省、广西壮族自治区10个产地。

1.2 炮制工艺参数考察

根据吴茱萸药材的特性，以企业生产炮制方法为基础，参照盐炙法（《中国药典》2015版四部通0213）炮制。用小型炒货机进行炮制工艺优化，首先进行闷润时间、炒制温度、药盐比例考察，选择（80℃-150℃）不同温度条件下炮制。对盐吴茱萸外观性状、浸出物、吴茱萸碱与吴茱萸次碱的总量、柠檬苦素的含量为评价指标，在此基础上进行多因素炮制工艺研究，采用正交试验方法进一步炮制工艺优化，选择闷润时间（min）、炒制温度（℃）、时间炒制（min）为考察因素，以吴茱萸碱与吴茱萸次碱的含量、柠檬苦素的含量及浸出物为评价指标，优选盐吴茱萸的炮制工艺条件，确定炮制的最佳工艺[6]。

单因素考察：吴茱萸的盐制方法多为盐水闷透后以“文火加热，炒至近干”，故以外观性状、浸出物、柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量为考察指标，选取“药盐比例、闷润时间、炒制温度和炒制时间”进行单因素考察。

单因素考察结果：初步考察闷润时间60min比较合适；炒制温度120℃比较合适；炒制时间30min、40min比较合适；食盐用量为100kg用食盐2.0kg比较合适。

多因素考察：采用正交试验方法进行优选，以闷润时间（A）、炒制温度（B）、炒制时间（C）为考察因素，三水平进行正交试验，以吴茱萸碱与吴茱萸次碱总量、柠檬苦素含量、浸出物为考察指标。

多因素考察结果：按照正交试验考察结果优选最佳炮制工艺为闷润时间60min、炒制温度130℃、炒制时间30min。

2 含量测定

盐吴茱萸参照吴茱萸饮片质量标准《中国药典》2015年版一部正文171页含量测定项进行测定。方法学考察：

2.1 线性关系考察

标准曲线的制备：精密称取吴茱萸次碱对照品适量，置100ml量瓶中，加甲醇超声使溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用；再精密称取吴茱萸碱对照品适量、柠檬苦素对照品适量，置同一100ml量瓶中，加上述吴茱萸次碱对照品溶液50ml,超声使溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含吴茱萸碱83.6μg和吴茱萸次碱54.4μg，柠檬苦素0.1003mg的混合溶液，作为对照品混合溶液；精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25、30μl，分别注入液相色谱仪，测得峰面积，以进样量（µg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果吴茱萸碱回归方程为Y=8E+06X-37213 r=1.0000，进样量在0.0836µg-2.5080µg范围内线性关系良好。吴茱萸次碱回归方程为Y=7E+06X-55365 r=0.9999，进 样 量 在0.0544µg-1.6320µg范围内线性关系良好。柠檬苦素回归方程为Y=553330X-435.91 r=0.9995，进 样 量 在0.1003µg-3.0090µg范围内线性关系良好。

2.2 仪器精密度试验

取同一供试品（WZY-11）溶液，连续进样6次，每次10µl，依法测定，记录峰面积。吴茱萸碱峰面积平均：8523684，RSD=0.6%；吴茱萸次碱峰面积平均：3283522，RSD=1.0%；柠檬苦素峰面积平均：336839，RSD=1.2%。结果表明精密度良好。

2.3 稳定性考察

取同一供试品（WZY-11）溶液，分别在0h、3h、6h、9h、12h、18h、24h各进样测定一次，记录峰面积。吴茱萸碱峰面积平均值：8494491，RSD=0.5%，吴茱萸次碱峰面积平均值：3282688，RSD=1.0%，柠檬苦素峰面积平均值：342128，RSD=1.8%。结果表明：供试品溶液在24h内三个成分相对标准偏差较小，稳定性较好。

2.4 重复性考察

取同一批供试品（WZY-11）6份，依法测定，平行测定6次，计算。结果吴茱萸碱平均含量为1.00%，RSD为0.5%；吴茱萸次碱平均含量为0.44%，RSD为1.4%；柠檬苦素平均含量为0.56%，RSD为1.9%,表明本方法重复性较好。

2.5 准确度试验

取已知含量的样品（WZY-11）（含吴茱萸碱0.997%、吴茱萸次碱0.441%、柠檬苦素0.568%）9份，每份约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别按测定成分（1∶0.5、1∶1、1∶1.5）的比例加入对照品溶液，即分别精密加入对照品混合溶液（吴茱萸碱0.2562mg/ml、吴茱萸次碱0.1149mg/ml，柠 檬 苦 素0.1401mg/ml）3ml、6ml、9ml各3份，按拟定方法制备待测溶液9份，分别精密加入70%乙醇溶液适量，使总体积至25ml，依法测定，计算回收率，结果吴茱萸碱平均回收率为101.2%，RSD=2.7%；吴茱萸次碱平均回收率为96.4%，RSD=2.8%；柠檬苦素平均回收率为101.7%，RSD=1.5%，n=9。

对照品、盐吴茱萸供试品、空白溶剂HPLC图见图1、图2、图3。

图1 对照品混合溶液HPLC图

图2 盐吴茱萸供试品HPLC图

图3 空白溶剂HPLC图

3 讨论

吴茱萸是一种比较常用的中药，具有温中止痛、理气、燥湿的功效。主要成分之一为生物碱，有研究指出，吴茱萸镇痛、体温上升作用和吴茱萸碱及吴茱萸次碱有关[7,8]。本次研究对吴茱萸的化学成分、炒制目的及炮制方法进行了分析，并采用反相高效液相色谱法，测定吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱及柠檬苦素含量。对吴茱萸炮制方法的研究应结合其用途进行，丰富炮制种类，扩大其用途，更好地服务于临床。而反相高效液相色谱法检验方法简便、重现性好，在吴茱萸的含量测定中有重要价值[9,10]。