基于网络药理学探讨红萸饮治疗溃疡性结肠炎的分子机制

张馨心 周唯 陆金根 王佳 潘一滨 许言午

摘要 目的：采用網络药理学的方法，对红萸饮（HYY）治疗溃疡性结肠炎（UC）的作用机制进行探讨。方法：通过TCMSP平台和Uniprot数据库对HYY进行活性成分及作用靶点筛选和标准化;在Genecards和在线人类孟德尔遗传数据库中获取疾病靶点。采用Draw Venny Diagram程序生成药物活性成分-疾病靶点数据集及韦恩图;String网站生成蛋白-蛋白互作网络图;Cytoscape 3.7.2软件构建成分-靶点网络;利用R3.6.0软件进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。实验通过DSS建立C57 UC小鼠模型，利用HE染色、酶联免疫吸附试验（ELISA）、qPCR检测来进一步验证。结果：共筛选出HYY 4味药所含50种类药成分;预测出110个潜在靶点;其中UC相关靶点共计3 870个;HYY-疾病共同靶点70个，主要富集于88个生物过程和113条信号通路上。实验也表明HYY可改善UC模型结直肠上皮完整性，降低血清IL-6和结直肠VEGF基因表达。结论：结合实验分析HYY可能通过调节CASP3、IL-6、VEGFA等靶点，调控PI3K-Akt等信号通路，从而调控细胞凋亡、血管生成，抑制炎性反应来达到对UC的治疗作用。

关键词 红萸饮;网络药理学;溃疡性结肠炎;炎性反应;凋亡;血管生成

Mechanism of Hongyu Drink in the Treatment ofUlcerative Colitis Based on Network Pharmacology

ZHANG Xinxin1，ZHOU Wei1，LU Jin′gen1，WANG Jiawen1，PAN Yibin1，XU Yanwu2

（1 Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200032，China; 2 College of Basic Medicine of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200032，China）

Abstract Objective：To explore the mechanism of the action of Hongyu Drink （HYD） in the treatment on ulcerative colitis （UC） by network pharmacology.Methods：The active ingredients and targets of HHD were screened by TCMSP platform，and the targets′ name of the selected targets were standardized by Uniprot database.The search was performed in Genecards database and online human Mendelian genetic database to obtain disease target points.The Draw Venny Diagram online program was used to generate the pharmaceutically active ingredient-disease target data set and the Venn diagram.Protein-protein interaction network map was generated by using String website; component-target network was constructed by using Cytoscape 3.7.2 software; GO function annotation and KEGG pathway enrichment analysis were performed by R3.6.0 software.The C57 UC mouse model was established by DSS，and HE staining、ELIS、qPCR were used to verify the results of network pharmacology detection.Results：A total of 50 kinds of drug components were included in the 4 herbs of HHY; 110 potential targets were predicted; the total number of UC-related disease targets was 3870; a total of 70 common targets of Pulsatilla chinensis-disease were obtained，and the co-targets were mainly enriched in 88 biological processes and 113 signaling pathways.The experimental results showed that HYDin can improve the colorectal epithelial integrity of UC animal model and reduce the expression of VEGF mRNA in serum IL-6 and colorectal tissues.Conclusion：Combined with experiment，network pharmacology analysis shows that HYDin may regulate the CASP3，IL-6，VEGFA，et al，and PI3K-Akt signaling pathway，et al，which regulates apoptosis，angiogenesis and inhibition of inflammation，achieves a therapeutic effect on ulcerative colitis.Other pathways need our further study.

Keywords Hongyu Decoction; Network pharmacology; Ulcerative colitis; Inflammation; Apoptosis; Angiogenesis

中图分类号：R285;R284文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.01.009

溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC）是一种病因尚不十分清楚的结肠和直肠慢性非特异性炎症性疾病。病变部位多位于乙状结肠和直肠，也可延伸至降结肠，甚至整个结肠。UC病程漫长，常反复发作，严重影响患者的生命质量。2015年世界胃肠组织（World Gastroenterology Organization，WGO）发布的《炎症性肠病全球指南》显示UC在北欧、英国和北美的高患病率已趋于保持稳定，而在南欧、亚洲和大多数发展中国家，原本较低的患病率正在升高[1]。有研究推测，国内UC的患病率为11.6/10万[2]，且近年呈明显上升趋势[3-4]。

中医学无UC的病名，主要根据疾病各时期不同的临床表现来命名和治疗。红萸饮是龙华医院肛肠科陆金根教授临床治疗UC的常用有效方剂，具有急攻缓补，内外兼施，益气温阳、清热排毒的功效，但其具体的作用机制仍不十分清楚。本研究拟采用网络药理学方法，深入探讨红萸饮治疗UC的分子机制。

1 资料与方法

1.1 资料来源

1.1.1 红萸饮活性成分及其作用靶点的筛选

通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）检索红萸饮中大血藤、败酱草、黄芪、山茱萸4味中药的化学成分，并根据化合物类药性（Drug-Likeness，DL）大于0.18，口服生物利用度（Oral Bioavailability，OB）大于30%筛选药物的活性成分及靶点。通过Uniprot数据库，将已筛选出的靶点名称进行标准化，建立药物活性成分靶点数据集。

1.1.2 UC疾病相关基因的检索

以“Ulcerative colitis”作为关键词，在Genecards（https：//www.genecards.org/）和在線人类孟德尔遗传数据库（Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM）（https：//omim.org/）中检索获取UC相关的疾病靶点，建立疾病靶点数据集。

1.2 方法

1.2.1 红萸饮活性成分抗UC疾病蛋白靶点的筛选和可视化网络的构建

1.2.1.1 红萸饮活性成分抗UC疾病作用靶点的筛选

采用Draw Venny Diagram在线程序（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）将药物活性成分靶点数据集和疾病靶点数据集相交获得药物活性成分与疾病的共同靶点，此交集集合为药物活性成分治疗UC的可能潜在靶点，生成药物活性成分抗疾病作用靶点数据集。

1.2.1.2 红萸饮活性成分抗UC疾病作用靶点的可视化网络构建

将筛选出的药物活性成分抗疾病作用靶点数据集、药物活性成分列表等输入到Cytoscape 3.7.2软件中，构建红萸饮活性成分抗UC疾病靶点的可视化网络。

1.2.2 构建红萸饮活性成分抗UC疾病作用靶点的蛋白质-蛋白质相互作用网络及网络核心基因统计

1.2.2.1 蛋白质-蛋白质相互作用（Protein-Protein Interaction，PPI）网络的构建

将药物活性成分抗疾病作用靶点数据集提交至String网站（https：//string-db.org/）按minimum required interaction score为medium confidence（0.400）生成PPI网络图。

1.2.2.2 网络核心基因的统计分析

根据网络节点间的连接度寻找网络的核心基因，进行统计分析，生成网络关键基因连接度统计条图。

1.2.3 红萸饮活性成分抗UC疾病作用靶点的功能和通路富集性分析

1.2.3.1 红萸饮活性成分抗UC疾病作用靶点的功能（Gene Ontology，GO）富集分析

利用R3.6.0软件，安装Bioconductor的colorspace、stringi、DOSE、clusterProfiler、pathview、ggplot2等程集包，以p value Cutoff=0.05，q value Cutoff=0.05为标准，对活性成分抗疾病作用靶点数据进行GO富集分析。

1.2.3.2 红萸饮活性成分抗UC疾病作用靶点的通路（Pathway）富集分析

利用R3.6.0软件，安装Bioconductor的colorspace、stringi、DOSE、clusterProfiler、pathview等程集包，以p value Cutoff=0.05，q value Cutoff=0.05为标准，利用Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome（KEGG）数据库对活性成分抗疾病作用靶点数据进行通路富集分析。

经上述GO和KEGG分析将成分、靶点及通路的关联度更加数据化，以便得出更加明确的结果，进一步说明活性成分靶蛋白和信号通路在红萸饮治疗溃疡性结肠炎中的作用。

2 结果

2.1 红萸饮活性成分及其作用靶点

在TCMSP数据库中的检索、筛选表明，红萸饮4味中药中满足OB>30%，DL>0.18的单体成分共有58种，对应499个相关靶点;去除不同单味药间重叠活性单体成分计有50种，见表1，对应110个相关靶点，见图1。

2.2 UC疾病相关蛋白靶点的获取

通过Genecards和OMIM数据库进行检索，删除检索结果中重复的靶点，获得UC相关的疾病靶点共计3 870个。

2.3 红萸饮活性成分抗UC疾病作用蛋白靶点的筛选和可视化网络的构建

2.3.1 红萸饮活性成分抗UC疾病作用靶点的筛选

获得药物活性成分与疾病的共同靶点计70个，见图1，生成活性成分抗疾病作用靶点数据集。此集合为药物活性成分治疗疾病的潜在靶点。

2.3.2 红萸饮活性成分抗UC疾病靶点可视化网络的构建

进一步利用Cytoscape建立药物活性成分和活性成分抗疾病作用靶点数据集的相关联系的可视化网络图，见图2。

2.4 红萸饮活性成分抗UC疾病靶点的蛋白-蛋白相互作用网络

经STRING分析后得到PPI网络，共获得693条相互作用关系，平均节点连接数（Average Node Degree）为19.8，PPI enrichment p-value：<1.0e-16，见图3;按节点连接度从大到小为标准筛选网络关键基因统计，见图4（只显示前30条）。

2.5 红萸饮活性成分抗UC作用蛋白靶点的GO和KEGG富集分析

2.5.1 红萸饮活性成分抗UC作用靶点的功能富集分析

以p value Cutoff=0.05，q value Cutoff=0.05为标准，对活性成分-疾病靶点数据进行GO功能富集性分析，共获得88个统计学显著的结果。这些结果显示与核受体活性（Nuclear Receptor Activity）、转录因子活性，配体直接调控序列特异性DNA结合（Transcription Factor Sctivity，Direct Ligand Regulated Sequence-specific DNA Binding）、蛋白质异二聚活性（Protein Heterodimerization Activity）、泛素样蛋白连接酶结合（Ubiquitin-like Protein Ligase Binding）、类固醇激素受体活性（Steroid Hormone Receptor Activity）等功能相关，见图5。

2.5.2 红萸饮活性成分抗UC作用靶点的KEGG分析

以p value Cutoff=0.05，q value Cutoff=0.05为标准，对活性成分抗疾病靶点数据进行KEGG通路富集性分析，共获得113个统计学显著的结果。主要富集在PI3K-Akt信号通路、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染通路、人巨细胞病毒感染通路、乙肝病毒通路、前列腺癌通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化通路上，其中按P值由小到大排列前20条通路的气泡见图6。

3 实验验证

3.1 实验材料

3.1.1 实验动物

C57BL6小鼠（上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可号：SYXK（沪）2015-0020）70只，雌性，体质量18～20 g。造模前在复旦大学清洁级动物房饲养1周，给予充足食料，自由饮水，每日光照12 h，温度21～25 ℃，空气湿度40%～70%。

3.1.2 药物与试剂

大血藤中药配方颗粒（广东一方制药有限公司，批号：408124K）、败酱草中药配方颗粒（广东一方制药有限公司，批号：407071K）、黄芪中药配方颗粒（广东一方制药有限公司，批号：407250K）、山萸肉中药配方颗粒（广东一方制药有限公司，批号：405142K）依据《中药药理研究方法学》计算出中药人鼠等效剂量比例为大血藤：败酱草：黄芪：山萸肉=5∶10∶10∶4;Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS，M.W.36000-50000购于MP Biomedicals LLC，CAS#9011-18-1）;美沙拉秦缓释颗粒剂（艾迪莎，上海爱的发制药有限公司，批号：15237）;RayBioMouse IL-6 ELISA Kit（购于美国RayBiotech公司，批号：ELM-IL6）;TaKaRa SYBRòPremix Ex TaqTM试剂盒（货号RR420A）。

3.1.3 仪器

Synergy2多功能酶标仪（BioTek公司，美国，型号：Synergy2）、Applied Biosystems 7300 Fast Real-Time PCR System（ABI公司，美国，型号：Stepone）。

3.2 实验方法

3.2.1 实验分组与给药

配置2.5%DSS，小鼠自由饮用10 d。造模后随机分为6组，每组10只。正常组（Norm）：消毒蒸馏水自由饮用10 d，第11天处死5只;消毒蒸馏水灌胃（10 mL/kg，2次/d）7 d，第18天处死5只。模型组（DSS）：2.5%DSS自由饮用10 d，第11天处死10只。空白对照组（DSS+NS）：2.5%DSS自由饮用10 d，消毒蒸馏水灌胃（10 mL/kg，2次/d）7 d，第18天处死10只。阳性药物对照组（DSS+5ASA）：2.5%DSS自由饮用10 d，美沙拉秦灌胃（0.5 g/kg，2次/d）7 d，第18天处死10只。红萸饮高剂量组（DSS+HH）：2.5%DSS自由饮用10 d，红萸饮灌胃（3.0 g/kg，2次/d）7 d，第18天处死10只。红萸饮低剂量组（DSS+HL）：2.5%DSS自由饮用10 d，红萸饮灌胃（1.5 g/kg，2次/d）7 d，第18天处死10只。

3.2.2 HE染色检测小鼠结直肠组织病理学改变

给药7 d后处死所有小鼠，在小鼠直肠及结肠处各取1段长约1 cm的结肠组织，4%甲醛溶液固定，制备石蜡切片，行HE染色，10×10倍光镜下观察肠黏膜损伤情况，按参考文献方法进行病理組织学评[5-7]，具体见表2。

3.2.3 ELISA检测血清IL-6水平

给药7 d后处死所有小鼠，摘眼球取血，取血清-80 ℃冻存，待测IL-6水平。测定时每份样本取50 μL血清，2倍稀释后取100 μL稀释液，按照ELISA试剂盒说明书进行操作，酶标仪450 nm处检测样本吸光值，根据标准品不同浓度的吸光值绘制标准曲线，再通过样本吸光值根据标准曲线算出相应的IL-6浓度。

3.2.4 qPCR检测直肠组织VEGF水平

设计引物，见表3，采用Trizol法提取各组小鼠直肠组织RNA并行反转录。取反转录后的cDNA行q-PCR检测基因表达。液氮保存组织常规提取RNA，紫外分光光度计法定量后取10 μg总RNA逆转录为cDNA。q-PCR条件：95 ℃，30 s;95 ℃，5 s;60 ℃，34 s;40个循环，10 μL体系上机分析。以VEGF产物量/β-actin产物量的比值为最终结果。

3.3 统计学分析

采用IBM SPSS Statistics 21统计软件。计量资料采用均数±标准差（±s）进行描述，2组正态分布计量资料组间比较采用t检验，多组正态分布计量资料组间比较采用单因素方差分析，2组及多组偏态分布计量资料组间比较采用秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

3.4 实验结果

3.4.1 HE染色检测小鼠结直肠组织病理学改变

在10×10光镜下观察，正常组小鼠结、直肠形态完整，无明显异常;模型组小鼠结肠黏膜间或固有层上皮细胞脱落、炎性细胞浸润、有溃疡且面积较大;空白对照组部分有溃疡，炎性细胞浸润;各用药组小鼠结肠黏膜炎症明显改善，黏膜较完整，部分有潰疡且面积较小，轻微炎性细胞浸润，见图8、10。分析病理组织学评分，见表4、5，与正常组比较，空白对照组和模型组结、直肠组织病理学评分显著提升（P<0.01）;与模型组比较，红萸饮高剂量组和低剂量组结、直肠组织病理学评分显著降低（P<0.01）;与空白对照组比较，阳性药物对照组结、直肠组织病理学评分降低（P<0.05）;红萸饮高剂量组、红萸饮低剂量组与阳性药物对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见图7、9。

3.4.2 ELISA检测血清IL-6水平

与正常组比较，模型组及空白对照组血清中IL-6表达明显升高（P<0.01）;与模型组和空白对照组比较，红萸饮高剂量组、红萸饮低剂量组和阳性药物对照组IL-6表达均明显下降（P<0.01）;红萸饮高剂量组、红萸饮低剂量组与阳性药物对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表6、图11。

3.4.3 qPCR检测直肠组织VEGF水平

与正常组比较，模型组及空白对照组结肠组织中VEGF表达明显降低（P<0.01）;与模型组和空白对照组比较，红萸饮高剂量组、红萸饮低剂量组和阳性药物对照组VEGF表达均上升（P<0.05）;红萸饮高剂量组、红萸饮低剂量组与阳性药物对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表7、图12。

3.4.4 结论

中药红萸饮对DSS诱导的UC小鼠结直肠上皮完整性及IL-6和VEGF指标有明显调节作用。与对照组比较，模型组结直肠病理分数明显降低，血清IL-6含量明显升高，VEGF mRNA表达上调。中药红萸饮能够降低DSS诱导的UC小鼠结直肠病理分数，血清IL-6含量，抑制VEGF mRNA的表达。这从一定程度上证实了我们在中药-成分-靶点-信号通路网络中连接度最高的网络药理学检测。

4 讨论

网络药理学是整合了系统生物学、药物化学、药理学和生物化学的一门新兴学科[8]。其借助已研究出的大量生物学信息，构建药物分子-作用靶点-疾病的生物网络，分析三者之间可能的关联，从而给出了药物对疾病作用机制的线索，为多靶点药物的开发和机制研究提供了依据[9-10]。中药作用机制的研究具有有效成分过于复杂、作用机制不够明确等特点，而网络药理学恰好可以为此类研究提供有力的工具。对复方中药的网络药理学研究业已成为研究中药分子机制的新策略和新模式。顺应了中医药现代化的潮流，适应了推动中药复方深入研究和扩大临床适应证发展的需要，有力保障了中医药的世界发展[11]。

龙华医院肛肠科陆金根教授经历将近10年的临床经验总结，结合溃疡性结肠炎中医证候的湿毒内蕴、气血壅滞、脾肾亏虚病机，创立红萸饮，以清热解毒、凉血活血，兼职温补脾肾。方中君药大血藤具有清热解毒、活血通络的功效，也是治疗肠痈的要药。在TCMSP检索到的大血藤主要成分中，类药性最高的前两位活性成分是β-谷甾醇（Beta-Sitosterol）和谷甾醇（Sitosterol）。谷甾醇是真核生物生物膜的重要组成部分，其中的β-谷甾醇对免疫调节、炎性反应、疼痛、溃疡具有较强的抵抗作用。有研究表明，β-谷甾醇具有抵抗大鼠慢性乙酸型与冷应激型胃溃疡的活性，并具有抵抗多种胃溃疡模型的胃黏膜保护效果[12]，这与溃疡性结肠炎的病理表现的治疗有一定的相似关联性。同时这两位活性成分在方中败酱草和山茱萸中均有较高的表达。败酱草为方中臣药，与红藤合用，加强清热解毒，活血排脓的作用。在TCMSP检索到的败酱草的主要活性成分中，蒙花苷（Linarin）、槲皮素（Quercetin）、山柰酚（Kaempferol）含量较高。研究表明蒙花苷作为黄酮类化合物不仅具有抗炎作用，而且还具有血管保护的作用，可以减少炎性反应递质IL-6、TNF-α等的产生，并可以通过PI3K-Akt信号通路而发挥其作用[13-14]。槲皮素是多羟基黄酮类化合物，具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等多方面生物活性[15-17]。研究表明，槲皮素可以抑制细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联激活，对LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎性反应具有保护作用[18]。也有研究显示槲皮素和山柰酚对肠道炎性反应有抑制作用[19]，此外槲皮素和山柰酚也是方中佐使药黄芪的主要活性成分。以上结果均从另一个角度证实了本研究预测结果的可靠性，也无疑为深入探讨红萸饮抗UC有效单体成分及其机制的研究提供了重要指导依据。

在中药-成分-靶点-信号通路网络中连接度最高的前6位靶点为CASP3，IL-6，VEGFA，EGFR，MAPK8和MYC。CASP3是一种蛋白剪切酶，属于凋亡家族的重要成员，在细胞凋亡机制网络中居中心地位，是致使凋亡发生的关键。它一旦被激活，即可发生下游的级联反应，从而发生凋亡，不可逆转，因而CASP3也被称为“死亡蛋白酶”[20]。IL-6是白细胞介素家族的一员，也是重要的炎性反应递质，可以结合其受体以激活其一系列的炎性反应。在由死亡受体介导的凋亡途径中，炎性反应递质IL-6可以激活CASP8，从而进一步介导CASP3的活化最终导致凋亡的发生[21]。研究表明，在细胞内介导凋亡及炎性信号转导的通路中，CASP3的升高与肠道炎性反应的发生密切相关[22]。也有研究表明IL-6与炎性反应、肠道炎性反应以及溃疡性结肠炎的关系密切[23]，IL-6作为黏膜固有层产生的一种在炎性反应中发挥重要作用的细胞因子，可以调节免疫反应及多种细胞的增殖和分化。IL-6和其受体相结合可以激活JAK产生磷酸化，并进一步特异地激活STAT3发生磷酸化转移入核，从而诱导STAT3异常活化导致炎性反应的发生;也可以调节STAT3下游基因如VEGF的表达，在细胞凋亡的调控等过程中发挥重要作用[24]。VEGFA是PDGF/VEGF生长因子家族的成员。它可以诱导内皮细胞的增殖，促进细胞迁移，抑制凋亡并诱导血管通透性。有研究显示VEGF在活动性UC炎性组织中表达增强可以加速血管和内皮细胞的增殖以及细胞代谢，可引起血小板大量激活，血管收缩、微血栓形成等，影响肠黏膜微循环，加重肠黏膜缺氧损伤和导致病情的恶化[25]。而EGFR本身具有酪氨酸激酶活性，一旦与表皮生长因子（EGF）组合可启动细胞核内的有关基因，从而促进细胞分裂增殖。在红萸饮自由度较高的生物学功能中，EGFR和泛素样蛋白连接酶结合功能有密切的关联，EGFR和VEGFA也同蛋白质异二聚化活性功能密切。临床上溃疡性结肠炎也表现有黏膜及黏膜下层的损伤[26]，而结直肠黏膜的不典型增生也被认为与溃结最严重并发症结肠癌的发生密切相关[27]，这也进一步印证了VEGFA和EGFR与溃疡性结肠炎病理的密切关联。我们在实验验证中也证明，红萸饮可以调节c57 UC模型小鼠结肠组织中VEGF mRNA水平的降低，也进一步证实了VEGF的关键性。MAPK8是促有丝分裂原活化蛋白激酶家族（MAPKs）的重要成员，MYC为原癌基因，二者均是PI3K-Akt信号通路上的重要组成因子，二者共同作用发挥该通路在细胞凋亡和炎性反应上的重要作用[28]。因此，红萸饮可能主要是通过影响CASP3、IL-6、VEGFA、EGFR、MAPK8和MYC等靶点发挥对溃疡性结肠炎的治疗作用的。

从通路富集分析结果可知，在该治疗过程中主要涉及通路可能是PI3K-Akt信号通路、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染通路、人巨细胞病毒感染通路、乙肝病毒通路、前列腺癌通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化通路等。PI3K/Akt信号通路参与细胞的分化、增殖、凋亡及血管生成等病理生理过程，是目前研究细胞凋亡信号调控通路之一。在中药-成分-靶点-信号通路网络中自由度最高的前6位靶点中，EGFR、VEGFA、MYC也均是上述两条通路上的关键因子，其中IL-6也作为PI3K通路上的一个重要的外源性細胞因子而存在，同样也可以激活细胞衰老信号通路和TNF炎性反应通路从而发生一系列的反应[29];此外也有研究证实PI3K信号通过与树突状细胞表面的CD80/CD86相互作用，可以调节IL-6的分泌[30]。我们通过实验验证红萸饮确对c57 UC小鼠模型血清水平的IL-6有抑制作用，进一步证实了IL-6在红萸饮治疗UC疾病中的关键性。由此我们可以发现，红萸饮可能是通过调控细胞凋亡、血管生成和抑制炎性反应来达到对溃疡性结肠炎的治疗作用。

综上所述，本研究利用网络药理学方法与技术，挖掘到红萸饮中50种类药性成分及110个潜在靶点，溃疡性结肠炎疾病相关靶点3 870个，其中红萸饮活性成分抗UC作用靶点70个。通过对这些靶点进行GO生物过程及KEGG信号通路的富集性分析，预测红萸饮可能是通过调节CASP3，IL-6，VEGFA，EGFR，MAPK8，MYC等靶点，调控PI3K-Akt信号通路、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染通路、人巨细胞病毒感染通路、乙肝病毒通路、前列腺癌通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化通路等，从而通过调控细胞凋亡、血管生成和抑制炎性反应来达到对溃疡性结肠炎的治疗作用。由于各种平台数据库数据及相应分析算法和软件功能的限制，得出的其他结论还有待实验研究的进一步证实。

参考文献

[1]Bernstein CN，Eliakim A，Fedail S，et al.World Gastroenterology Organisation Global Guidelines Inflammatory Bowel Disease：Update August 2015[J].J Clin Gastroenterol，2016，50（10）：803-818.

[2]Lui R，Ng SC.The Same Intestinal Inflammatory Disease despite Different Genetic Risk Factors in the East and West？[J].Inflamm Intest Dis，2016，1（2）：78-84.

[3]朱水津，江石湖，马天乐，等.766例IBD住院患者的人口资料分析[J].胃肠病学，2013，18（7）：425-427.

[4]朱振华，曾志荣，彭侠彪，等.广东省中山市炎症性肠病的发病率及临床特点[J].中华消化杂志，2013，33（6）：390-393.

[5]Butzner JD，Parmar R，Bell CJ，et al.Butyrate enema therapy stimulates mucosal repair in experimental colitis in the rat[J].Gut，1996，38（4）：568-73.

[6]Ekstrm GM.Oxazolone-induced colitis in rats：effects of budesonide，cyclosporin A，and 5-aminosalicylic acid[J].Scand J Gastroenterol，1998，33（2）：174-1791.

[7]Sangfelt P，Carlson M，Thrn M，et al.Neutrophil and eosinophil granule proteins as markers of response to local prednisolone treatment in distal ulcerative colitis and proctitis[J].Am J Gastroenterol，2001，96（4）：1085-1090.

[8]Hopkins AL.net work pharmacology：the next paradigm in drug discovery[J].Nat Chem Biol，2008，4（11）：682-690.

[9]王歡欢，吴宏伟，李欣，等.基于网络药理学分析厚朴抗抑郁的物质基础及其作用机制[J].中国实验方剂学杂志，2019，25（10）：162-169.

[10]陈文娜，朱爱松，丛培玮，等.基于网络药理学的二陈汤治疗冠心病分子机制研究[J].中草药，2019，50（2）：441-448.

[11]Li S，Zhang B.Traditional Chinese medicine network pharmacology：theory，methodology and application[J].Chin J Nat Med，2013，11（2）：110-120.

[12]肖志彬，刘小雷，成日青，等.β-谷甾醇对阿司匹林副作用抵抗及抗炎作用影响的实验研究[J].内蒙古医科大学学报，2015，37（4）：350-354.

[13]吴亚军，苏洁，黄浦俊，等.蒙花苷对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎症损伤及TLR4/IκBα/NF-κB信号通路的影响[J].中国现代应用药学，2017，34（5）：637-643.

[14]许韩婷，苏洁，吴亚军，等.蒙花苷对脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症损伤的影响[J].中药药理与临床，2016，32（1）：29-32.

[15]Chen KC，Hsu WH，Ho JY，et al.Flavonoids Luteolin and Quercetin Inhibit RPS19 and contributes to metastasis of cancer cells through c-Myc reduction[J].J Food Drug Anal，2018，26（3）：1180-1191.

[16]Men K，Duan X，Wei XW，et al.Nanoparticle-delivered quercetin for cancer therapy[J].Anticancer Agents Med Chem，2014，14（6）：826-832.

[17]李韶静，廖应芬，杜青.槲皮素纳米载药系统的研究与应用[J].中国中药杂志，2018，43（10）：1978-1984.

[18]任改艳，张步有，黄剑林.槲皮素对LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用[J].中成药，2019，41（8）：1795-1799.

[19]卞艺斐.马齿苋对实验性肠炎大鼠的保护作用及其机制研究[D].北京：中国农业大学，2018.

[20]杨涛，费振海，钟兴明.Caspase家族与细胞凋亡的研究进展[J].浙江医学，2018，40（18）：2083-2087，2091.

[21]焦佩娟，应小平.Caspase-3与肿瘤细胞凋亡关系的中医药研究进展[J].山东中医杂志，2017，36（8）：721-724.

[22]步楠，王烨，王瑞，等.雷公藤多苷通过JAK2/STAT3信号通路减轻溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜细胞凋亡及炎症的实验研究[J].现代消化及介入诊疗，2019，24（5）：466-470.

[23]Chen YY，Ma ZB，Xu HY，et al.IL-6/STAT3/SOCS3 signaling pathway playing a regulatory role in ulcerative colitis carcinogenesis[J].Int J Clin Exp Med，2015，8（8）：12009-12017.

[24]董艳，曹永清，陆金根.IL-6/STAT3信号通路在溃疡性结肠炎发病中的机制及香连丸对其的干预作用[J].上海中医药杂志，2016，50（6）：75-79.

[25]Zundler S，Neurath MF.Integrating Immunologic Signaling Networks：The JAK/STAT Pathway in Colitis and Colitis-Associated Cancer[J].Vaccines（Basel），2016，4（1）：5.

[26]Adams SM，Bornemann PH.Ulcerative colitis[J].Am Fam Physician，2013，87（10）：699-705.

[27]Matsuoka H，Ikeuchi H，Uchino M，et al.Clinicopathological features of ulcerative colitis-associated colorectal cancer pointing to efficiency of surveillance colonoscopy in a large retrospective Japanese cohort[J].Int J Colorectal Dis，2013，28（6）：829-834.

[28]查锡良.生物化学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2010：375-375.

[29]嵇莹莹，龚国清.PI3K/Akt/mTOR通路在炎症相关疾病中分子机制研究进展[J].药学研究，2018，37（4）：226-229.

[30]杨丕山，宋爱梅.TNF-α/NF-κB信号通路对牙周炎发展和牙周再生的影响及其干预[J].口腔医学，2019，39（1）：1-5.

（2020-02-24收稿 责任编辑：杨觉雄）

基金项目：国家自然科学基金青年基金项目（81202696）;上海中医药大学研究生创新培养专项（Y201920）

作者简介：张馨心（1993.11—），女，医学硕士，规培医师，研究方向：中医药治疗肛肠疾病的研究，E-mail：agathazkitazawa@163.com

通信作者：潘一滨（1975.11—），女，医学博士，副主任医师，研究方向：中医药治疗肛肠疾病的研究，E-mail：panyibin29@163.com

;许言午（1974.04—），男，理学博士，副教授，研究方向：中药药理及其机制，E-mail：xyw551268@sina.com