顶空-气相色谱法测定富马酸伊布利特原料药中5种溶剂残留量

杨 帆,朱 梦,仝 倩

(江苏九旭药业有限公司,徐州 221200)

富马酸伊布利特,化学名为N-[4-[4-(乙基庚基胺)-1-羟基丁基]苯基]甲磺酰胺富马酸盐,是一种安全、有效、快速转复房颤抗心律失常药物[1]。在富马酸伊布利特的合成过程中用到二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇和丙酮等有机溶剂,药物中残留的溶剂会增加毒性,因此应在药品生产过程中对引入溶剂的残留量进行测定[2],以保证药品的安全性。

目前,关于溶剂残留量的测定方法主要有气相色谱法(GC)[3-5]、气相色谱-质谱法(GC-MS)[6-7],还有文献报道采用顶空-气相色谱法对富马酸伊布利特原料药中有机溶剂残留量进行测定[8-9]。为有效控制富马酸伊布利特的质量,保证药品的疗效,本工作结合其制备工艺,根据人用药品注册技术要求国际协调会议(ICH)Q3C(R7)及《中华人民共和国药典》2015年版通则中对残留溶剂的控制要求[10],采用顶空-气相色谱法对富马酸伊布利特原料药中可能存在的二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇和丙酮等溶剂残留进行测定。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 7890B型气相色谱仪;7697A 型顶空自动进样器;XSE 205DU 型电子天平(十万分之一天平)。

混合对照品储备溶液:分别称取二氯甲烷约48.0 mg、四氢呋喃约57.6 mg,用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解并定容至10 mL 容量瓶中,摇匀,配制成二氯甲烷和四氢呋喃的混合储备溶液;再分别称取乙酸乙酯40 mg、乙醇40 mg、丙酮40 mg,移取二氯甲烷和四氢呋喃的混合储备溶液1 mL,用DMF稀释溶解并定容至100 mL容量瓶中,得到二氯甲烷的质量浓度为48.0 mg·L-1,四氢呋喃的质量浓度为57.6 mg·L-1,乙酸乙酯、乙醇、丙酮的质量浓度均为400 mg·L-1的混合对照品储备溶液。

混合对照品溶液1～3:分别移取混合对照品储备溶 液12.5,25,50mL置于50mL容量瓶中,用DMF定容,摇匀,依次得到混合对照品溶液1～3。

富马酸伊布利特原料药,质量分数大于98.0%;二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇和丙酮均为分析纯;DMF和二甲基亚砜(DMSO)均为色谱纯。

1.2 仪器工作条件

1)顶空条件 顶空温度为105 ℃;平衡时间为20 min。

2)色谱条件 DB-624毛细管色谱柱(60 m×0.32 mm,1.8μm);进样口温度200 ℃;分流进样,分流比为10∶1;火焰离子化检测器(FID),检测器温度250 ℃;载气为氮气,流量1.0 mL·min-1;进样量1 000μL。柱升温程序:初始温度40 ℃,保持7 min;以10 ℃·min-1速率升温至100 ℃,保持4 min;再以30 ℃·min-1速率升温至200 ℃,保持4 min。

1.3 试验方法

称取富马酸伊布利特0.2 g,置于20 mL 顶空瓶中,加入DMF 5 mL,压盖,作为供试品溶液,按照仪器工作条件进行测定。

2 结果与讨论

2.1 溶剂和柱温的选择

顶空-气相色谱法测定残留溶剂时,通常以水为溶剂,但试验中测定的二氯甲烷和乙酸乙酯两种残留溶剂不溶于水,因此选择DMF或DMSO 作为溶剂进行测定。但DMSO 对样品中丙酮的测定有干扰(专属性不符合要求),而DMF 对样品中丙酮的测定无干扰,因此试验选择DMF为溶剂。

乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃均为极性相似的低沸点溶剂,沸点分别为78,57,40,77,66 ℃,因此试验选择色谱柱的初始温度为40 ℃。

2.2 专属性试验

分别取空白溶液、5 mL 的混合对照品溶液2,各置于20 mL 顶空瓶中,压盖,按仪器工作条件测定。称取2份富马酸伊布利特0.2 g,置于20 mL顶空瓶中,分别加入5 mL的DMF和5 mL的混合对照品溶液2,压盖,依次得到供试品溶液和加标供试品溶液,按仪器工作条件进行测定。记录各溶剂峰与相邻峰的分离度,各溶液的色谱图见图1。

图1 色谱图Fig.1 Chromatograms

由图1可知:空白溶剂对样品的测定无干扰,各溶剂峰间的分离度均大于1.5,符合测定要求。5种溶剂的保留时间见表1。

2.3 标准曲线与检出限

取混合对照品溶液2适量,用DMF 逐级稀释,按照仪器工作条件进行测定,以3倍信噪比(S/N)计算方法的检出限(3S/N),以10倍信噪比计算方法的测定下限(10S/N),结果见表1。

取5种溶剂测定下限对应浓度的溶液、混合对照品溶液1～3、混合对照品储备溶液等5个浓度水平(均在《中华人民共和国药典》2015年版通则中残留溶剂的限度内)的溶液作为线性溶液,按试验方法进行测定。以5种溶剂的质量浓度为横坐标,对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线,线性参数见表1。

表1 5种溶剂的保留时间、线性参数、检出限与测定下限Tab.1 Retention times,linearity parameters,detection limits and lower limits of determination for 5 solvents

由表1可知:乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和四氢呋喃的质量浓度在一定范围内呈线性关系,其相关系数均大于0.999 0。

2.4 重复性试验

称取6份富马酸伊布利特0.2 g,置于20 mL顶空瓶中,加入5 mL的混合对照品溶液2,压盖,即得加标供试品溶液,按照仪器工作条件对残留溶剂进行测定,并计算测定值的相对标准偏差(RSD),结果见表2。

表2 重复性试验结果(n＝6)Tab.2 Results of test for repeatability(n＝6)

由表2 可知:5 种溶剂残留量的RSD 均小于2.0%,符合测定要求。

2.5 回收试验

按试验方法对富马酸伊布利特原料药样品进行低、中、高等3个浓度水平的加标回收试验,每个浓度水平平行测定5次,其回收率和测定值的RSD 见表3。

由表3可知:5种溶剂的加标回收率为102%～105%,RSD 均小于2.0%,说明方法的准确度较高。

表3 回收试验结果(n＝5)Tab.3 Results of test for recovery(n＝5)

2.6 样品分析

取3 批样品按试验方法进行检测,结果表明:3批样品中均未检出二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯和乙醇,而丙酮的检出量均为0.001%。

本工作采用顶空-气相色谱法测定富马酸伊布利特中二氯甲烷、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯和乙醇等5种溶剂的残留量,该方法的专属性强、灵敏度高、准确性好,满足药物分析的要求。