动物源性食品中喹诺酮类药物残留检测方法的优化探究

◎ 苗育可，王然然，王楠楠，董建锋

（承德市食品药品检验检测中心，河北 承德 067000）

随着人们对动物源食品由需求型向质量型的转变，动物源食品中的兽药残留已逐渐成为全世界关注的一个焦点，也是影响动物源性食品安全的重要因素之一。某些生产者为提高存活率会给批量生产的食用动物使用兽药，但使用方法不当、休药期结束前屠宰动物或动物接触含有抗生素的污水等都可能造成兽药残留超标，蓄积在动物的细胞组织器官内，或进入乳汁、蛋中。喹诺酮类药物是以4-喹诺酮为基本结构的人工合成的抗菌药，是使用较多的兽药抗生素[1]。过量可引起人体的肠胃不适，甚至还会引起中枢系统的不良反应。

我国有国家强制标准、国家推荐标准、地方标准、行业标准、农业部公告和卫生部公告等多种类型的食品标准。目前我国关于动物源性食品中喹诺酮类药物残留检测方法的标准，现行有效的有30余条，这些标准种类繁多，不同动源性类基质提取方法各异、仪器方法不同，检测喹诺酮的种类数量也不同。目前最常用的为GB/T 21312—2007与GB/T 20366—2006，均为高效液相色谱-质谱联用法，本文结合长期检测经验，以两种标准为基础，优化整合出一套便捷高效的喹诺酮类药物残留的实验方案[2-3]。本文实施后对前处理过程的优化，可简化实验步骤，最大程度涵盖动物源性基质的种类，降低实验系统误差，大大提高工作效率，避免浪费，节省实验资金。

1 材料与方法

1.1 材料

样品：检测样品来自河北省承德市双滦区超市，包括鸡肉、猪肉、牛肉、鸡蛋和牛奶。

试剂：冰乙酸（99.5%，凯通化学试剂公司）；正己烷（98.0%，凯通化学试剂公司）；柠檬酸（99.5%，凯通化学试剂公司）；甲酸（99.0%，罗恩试剂公司）；氢氧化钠（96.0%，红岩试剂厂）；乙二胺四乙酸二钠（99.0%，罗恩试剂公司）；磷酸氢二钠（99.0%，泰兴试剂厂）；甲醇（色谱级，美国Fisher公司）；乙腈（色谱级，美国Fisher公司）；娃哈哈纯净水。

标准品：氧氟沙星（纯度99.7%，坛墨质检）。

1.2 仪器

ME303T/02型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、KS-500DE型超声波清洗器（昆山洁力美超声仪器有限公司）、HC-3018R高速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司）、液相色谱串联质谱仪（AB SCIEX公司）、旋转蒸发仪（瑞士布奇公司）和氮吹仪（美国Biotage公司）。

1.3 仪器条件

本文所采用的仪器流动相为0.2%甲酸水溶液和乙腈，流速为0.2 mL·min-1，梯度洗脱情况见表1。

表1 流动相梯度洗脱表

1.4 样品前处理

样品前处理是检验检测过程中重要的试验步骤，其占据整个分析过程约60%的时间，主要的分析误差都来自样品前处理环节，样品前处理直接影响到检验检测结果的准确性。本文主要依据国家标准《动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T 21312—2007）与《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB/T 20366—2006），在其中选取了3种喹诺酮类药物残留检测前处理方法作为比较。

1.5 试验方法

1.5.1 相同基质

以猪肉为基质，氧氟沙星为例。①前处理方法1。使用EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取样品，采用固相萃取柱净化。称取试样加入20 mL 0.1 mol·L-1的EDTA Mcllvaine缓冲溶液，进行旋涡混合超声离心后，使用HLB固相萃取柱进行净化。使用1 mL 0.2%甲酸水溶液涡旋溶解。供液相色谱串联质谱仪测定[2]。②前处理方法2。使用0.2%甲酸乙腈提取样品，采用乙腈饱和正己烷净化旋蒸 称取均质试样加入20 mL甲酸-乙腈溶液进行提取，均质离心后，用20 mL甲酸-乙腈溶液再重复提取一次，合并上清液。使用25 mL乙腈饱和的正己烷进行净化，旋蒸氮吹，准确加入1.0 mL甲酸-乙腈溶液溶解残渣定容，供液相色谱串联质谱仪测定[3]。③前处理方法3。根据QuEchERS方法的要求，进行提取净化，供液相色谱串联质谱仪测定。

1.5.2 不同基质

使用0.2%甲酸乙腈提取样品，采用乙腈饱和正己烷净化旋蒸，以氧氟沙星为例，以猪肉、鸡肉、牛肉、鸡蛋和牛奶[4]为基质。

2 结果与分析

2.1 3种前处理方法的回收率比较

由图1知，使用EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取样品，采用固相萃取柱净化，最终回收率为31.2%。使用0.2%甲酸乙腈提取样品，采用乙腈饱和正己烷净化旋蒸，最终回收率为74.3%。采用QuEchERS方法最终回收率为75.0%[5]。

图1 3种前处理方法的回收率图

2.2 5种基质的回收率比较

由图2知，猪肉回收率为73.2%，鸡肉回收率为72.9%，牛肉回收率为75.4%，鸡蛋回收率为69.1%，牛奶回收率为66.4%。结论为畜禽类基质回收率较好，鸡蛋、牛奶较低。

图2 5种基质的回收率图

3 结论与讨论

使用0.2%甲酸乙腈提取样品，采用乙腈饱和正己烷净化旋蒸和QuEchERS方法回收率相差不大，且二者均比使用EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取样品，采用固相萃取柱净化的方法回收率高。使用固相萃取柱在具体实验过程中对于目标物质的损失更大，且更加耗时。而对于畜禽肉、鸡蛋牛奶来说，使用QuEchERS方法或0.2%甲酸乙腈提取样品，采用乙腈饱和正己烷净化旋蒸的方法，回收率较高，试验效率较高。此结果为喹诺酮药物残留检测方法提供技术支撑。