西门子Atellica® UAS800尿沉渣分析仪性能验证

杨韩燕 欧财文 郑智明 吴新忠

1 玉林市中医医院检验科 （广西 玉林 537000）

2 广东省中医院检验科 （广东 广州 510000）

内容提要： 目的：验证西门子Atellica® UAS800尿沉渣分析仪质量性能，以期对医学实验室尿沉渣分析仪的性能评估提供参考。方法：按中华人民共和国相关医药行业标准的要求，对Atellica® UAS800尿沉渣分析仪的红细胞和白细胞进行检测，判断其重复性、批间精密度、检出限、稳定性、携带污染率、线性范围。同时以显微镜检测结果为金标准，计算Atellica® UAS800检测红细胞、白细胞、管型的识别率和假阴性率。结果：Atellica® UAS800对红细胞、白细胞、管型的识别率分别为85.3%、86.7%、85.3%，假阴性率分别为0.43%、1.29%、2.79%，其余各项验证项目也均符合行业标准要求。结论：Atellica® UAS800各项性能达到行业标准要求，操作简单，自动化程度高，具有较高的临床应用价值。

尿常规检验是临床工作中最常用的检查项目之一，对全身特别是泌尿系统疾病的诊断具有重要参考价值[1]。规范的尿有形成分显微镜检查是保证尿液分析结果质量的基础，原则上每份尿液标本都应镜检，但实验室人员有限，工作量大，每天需要及时发出大量报告，为了提高工作效率和减轻工作负担，尿沉渣分析仪逐渐应用于临床实验室中，而仪器的性能是否达到相关行业标准要求，是结果准确性的重要保障[2]。为验证Atellica®UAS800的可靠性，本文根据国家医药行业标准《尿液有形成分分析仪（数字成像自动识别）》（YY/T0996-2015）[3]，及美国临床和实验室标准协会《定量测量方法的精密度性能评价；批准指南—第三版》（CLSI-EP5-A3）[4]以及中国合格评定国家认可委员会CNASCL02-A002:2018《医学实验室质量和能力认可准则在体液学领域的应用说明》[5]的要求，对其性能进行验证，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

标本来源：收集广东省中医院2019年10月10日～12月5日门诊患者及体检健康者新鲜尿液1038人份，用一次性塑料尿杯收集样本，检测前倒入试管10mL左右，充分混匀后置于测试架上，所有样本2h内完成检测。

仪器与试剂：德国西门子公司生产一次性计数池、校准液1-校准液4；美国伯乐公司生产尿液有形成分分析质控品（低值批号67221，高值批号67222）；对照仪器为德国科宝Auto，德国徕卡DM500光学显微镜，Uric-SCP一次性专用尿沉渣计数板，普通离心机。

1.2 方法

1.2.1 人工显微镜镜检方法

镜检按《全国临床检验操作规程》（第4版）[6]，取每份均匀混合尿10mL，相对离心力为400×g，离心5min后用吸管吸去上清液9.8mL，将剩余的0.2mL尿沉渣充分混匀，用移液管吸取20μL滴入计数板，静置5min后，首先用低倍镜观察，再用高倍镜计数10个大方格内的有形成分，记录实验结果，所有标本均在2h内完成。镜检由两名经验丰富的主管检验师采用双盲法进行检测，镜检结果以《尿液有形成分分析仪（数字成像自动识别）》中制定的值作为阳性标准：红细胞＞3个/HPF、白细胞＞5个/HPF、管型＞1个/LPF[3]。同时通过SPSS25.0软件中的Kappa检验，评估两者镜检结果一致性。高度一致性时，可取两者镜检结果均值作为判断标准。

1.2.2 尿液有形成分分析仪Atellica®UAS800验证方法

重复性：使用红细胞、白细胞浓度各为50个/μL和200个/μL的样本，进行20次检测，记录结果，计算CV值。判断标准参考YY/T0996-2015：浓度为50个/μL时，CV≤25%；浓度为200个/μL时，CV≤15%。

批间精密度：根据《定量测量方法的精密度性能评价；批准指南—第三版》（CLSI-EP5-A3）进行定量检测方法的精密度研究，使用伯乐低值和高值质控品，每天检测1次，连续检测20d，记录红细胞和白细胞值，计算SD、均值和CV值。判断标准：低值CV≤25%，高值CV≤15%。

检出限：使用浓度水平5个/μL的红、白细胞样品，重复检测20次，计算样本检测结果的检出率（检测结果大于0个/μL的次数与总检测次数的比值）。判断标准：检出率≥80%。

稳定性：使用红细胞、白细胞浓度各为200个/μL的样本，在开机预热0h，4h，8h这3个时间段，分别进行10次重复测试，计算所有结果的CV值。判断标准：CV≤15%。

携带污染率：选用高值红细胞、白细胞尿液样本（在检测线性范围内）及生理盐水，先取高值样本连续检测3次，记录检测结果为H1H2H3，再取生理盐水连续检测3次，记录检测结果为L1L2L3。携带污染率根据公式(携带污染率(%)=(L1-L3)/(H3-L3)×100%)，计算得到。判断标准参考文件YY/T0996-2015：携带污染率≤0.05%。

线性范围：取仪器厂家声称的线性范围上限浓度附近的红细胞和白细胞样本，将高浓度样本与基质尿按照1:2、1:4、1:16、1:64、1:256的比例进行稀释。每个稀释度测定3次，取平均值为实测值，以稀释计算值作为理论值，将实测值与理论值进行线性回归相关分析。得线性方程Y=aX+b及R²值，与厂商提供的性能参数相比较，判断其符合性，相关系数R²≥0.95。

识别率：识别率的研究方案是根据国家医药行业标准《尿液有形成分分析仪（数字成像自动识别）》来进行，收集符合要求的新鲜尿液标本450份，先在UAS800上完成检测，再人工显微镜镜检。以镜检法为金标准，单项结果与镜检结果的符合率为：红细胞识别率≥70%、白细胞识别率≥80%、管型识别率≥50%。

假阴性率：假阴性率的研究方案是根据国家医药行业标准《尿液有形成分分析仪（数字成像自动识别）》来进行，收集新鲜尿液标本466份，对红细胞、白细胞和管型进行检测，同时以人工显微镜镜检为金标准，计算UAS800检测结果的假阴性率，判断标准：假阴性率≤3%。

1.3 统计学分析

采用Microsoft Excel 2016版本对所有检测数据进行计算和分析，包括平均值、标准差（SD）、变异系数（CV）和R值的计算。对两位主管检验师人工镜检结果的一致性评估，采用SPSS25.0软件中的Kappa检验，计算Kappa值。Kappa值分级标准：0.41～0.60中度一致性；0.61～0.80高度一致性；0.81～1几乎完全一致。

2.结果

2.1 两位主管检验师显微镜检查技术评价

计算两位主管检验师镜检510份样本的红细胞、白细胞、管型的Kappa值分别为0.777、0.832、0.896，结果表明，两者的红细胞镜检结果具有高度一致性，白细胞和管型镜检结果达到几乎完全一致性，可取两者镜检结果的均值，作为判断标准。

2.2 尿沉渣分析仪Atellica® UAS800验证结果

2.2.1 重复性

红细胞浓度为50个/μL和200个/μL的CV值分别为15.06%、6.1%；白细胞浓度为50个/μL和200个/μL的CV值分别为15.1%、5.26%，均符合行业标准要求。见表1。

表1. UAS800批内精密度测定

2.2.2 批间精密度

红细胞低值和高值的CV值分别为6.46%、7.21%；白细胞低值和高值的CV值分别为17.46%、12.41%；均符合行业标准要求。见表2。

表2. UAS800批间精密度测定

2.2.3 检出限

红细胞样品的检出率为95%，白细胞样品的检出率为100%，均符合要求。

2.2.4 稳定性

红细胞和白细胞样品3个时间段检测的CV值分别为8%、8.7%，结果符合要求。见表3。

表3. UAS800仪器稳定性测定

2.2.5 携带污染率

根据携带污染率公式计算，红细胞、白细胞的携带污染率均为0，小于0.05%，符合行业标准要求。

2.2.6 线性范围

经测定，红细胞的相关系数R²为0.9999，回归方程为Y=0.9992X+3.4357；白细胞的相关系数R²为0.9975，回归方程为Y=1.0117X-17.802，结果显示仪器在该检测范围内（红细胞5～1477个/μL、白细胞4～822个/μL），线性良好。

2.2.7 识别率

通过与显微镜镜检结果进行比对，红细胞、白细胞、管型的识别率分别为85.3%、86.7%、85.3%，均符合行业标准要求。见表4。

表4. UAS800与显微镜镜检结果比对(n=150,n)

2.2.8 假阴性率

通过与显微镜镜检结果进行比对，红细胞、白细胞、管型的假阴性率分别为0.43%、1.29%、2.79%，均符合行业标准要求。见表5。

表5. UAS800与显微镜镜检结果比对(n=466,n)

3.讨论

本研究显示，该仪器重复性良好，红细胞和白细胞具有极低的检出限和极低的携带污染率；在连续开机0～8h，具有较高的稳定性；批间精密度使用不同浓度的质控品进行检测，结果显示各CV值均符合行业标准要求；本研究中所验证的线性范围已满足95%以上临床标本的分析需要，但是仍会有少数标本超出线性范围，按要求需用适当的稀释液和方法进行稀释后重新测定[8]。然而，在实际工作中，其稀释后检测的具体数值对临床诊治意义已不甚重要，所以无需再对超出线性范围的样本进行稀释后测定，直接报告上限即可。另外需要指出的是，尿液中红细胞容易受尿素、渗透压、pH等影响而发生溶解破裂，而线性范围的验证需要做大量稀释试验，为保证结果的稳定性，该验证选择了经过固定的红细胞来进行实验。以显微镜镜检结果为金标准，结果显示，该仪器识别率高，假阴性率低，完全符合行业标准要求。同时应注意到，管型的假阴性率接近临界范围，验证中也发现Atellica®UAS800对管型的识别受多种因素的干扰：①仪器有时会把黏液丝、纤维、成团聚集细胞等错认成管型。②仪器充池时仅吸取200μL样本，取样量少，有可能导致未能有效获取管型成分。③仪器是对15张高倍视野图片进行分析计算，而管型镜检要求是低倍观察，有可能漏检。

显微镜镜检是形态学检查的金标准[9]。仪器分析和识别细胞存在一定的局限性，不能完全取代显微镜镜检。尿液常规检查需尿干化学联合尿液有形成分分析，制定适合本实验室的复检规则，触发规则时进行人工显微镜镜检，才能确保结果的准确性。

综上，本研究通过对Atellica®UAS800尿沉渣分析仪的性能验证，显示各项分析参数的性能均符合行业标准要求，可应用于临床实验室。