电化学发光法检测新生儿血清乙肝表面抗原的影响因素分析

张梦莹，周 军，张晓洁

南京医科大学第一附属医院检验学部，江苏南京 210029

乙肝是由乙肝病毒(HBV)引起的一种全球性疾病。感染HBV可以诱发一系列肝脏疾病，以慢性型和亚临床型多见。因其严重危害公共健康，我国从1992年开始为新生儿接种乙肝疫苗，2007年开始在全国范围内推广接种[1-2]。目前，本院妇幼分院采用罗氏电化学发光法(ECL)检测乙肝表面抗原(HBsAg)，检测工作中经常发现母亲HBsAg阴性而新生儿HBsAg弱阳性的病例。RYSGAARD等[3]报道新生儿接种疫苗后会出现短暂的HBsAg阳性。但近来有研究报道，新生儿高胆红素血症会对HBsAg的检测结果产生干扰[4]。本文对ECL检测新生儿HBsAg弱阳性的影响因素进行进一步分析发现了不同的结果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年2-8月在本院妇幼分院住院并进行HBsAg检测的516例新生儿作为研究对象，其中男315例(61.05)%，女201例(38.95%)；年龄1～7 d，中位年龄3 d；1～3 d 449例(87.02%)，4～7 d 67例(12.98%)。所有新生儿均在出生24 h内接种乙肝疫苗，其中349例(67.64%)新生儿血清总胆红素超过200.0 μmol/L，中位数水平230.5 μmol/L，以间接胆红素(中位数水平209.8 μmol/L)升高为主。初次65例(12.60%)新生儿血清HBsAg检测呈阳性，排除2例(3.08%，2/65)母亲HBsAg阳性的新生儿病例，其余63例纳入本研究。阳性标本高速离心后HBsAg结果转阴9例(14.29%,9/63),阳性标本蓝光照射后HBsAg结果转阴2例(3.17%,2/63),阳性标本7～14 d后HBsAg复检结果转阴62例(98.41%,62/63)。

1.2仪器与试剂 HBsAg检测采用ECL，在Cobas e601罗氏免疫分析仪上按照检测试剂说明书进行。Cobas e601仪器会自动根据每次定标时标准品的检测信号计算cut off值，每份标本的结果以该标本的检测信号cut off的形式(COI)报道。检测结果>1.0 COI判定为阳性。血清胆红素(包括总胆红素和直接胆红素)检测采用钒酸氧化法，在贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪上进行，使用试剂为宁波美康生物公司生产的总胆红素和直接胆红素试剂。成人总胆红素参考区间为5.1～19.0 μmol/L，直接胆红素参考区间为0.0～6.8 μmol/L，间接胆红素参考区间为0.0～20.0 μmol/L。新生儿血清胆红素目前尚无公认的参考区间，有研究发现，66.7%的足月儿和80.0%的早产儿出生后1周内由于生理、病理原因，会有肉眼可见的黄疸和不同程度的血清胆红素升高[5-8]。

1.3检测流程 抽取受试者静脉血2 mL，置于真空采血管中，以3 500 r/min离心10 min后上机检测HBsAg。HBsAg结果阳性的血清标本收集于冻存管中保存于-80 ℃。同时追溯HBsAg阳性新生儿母亲的HBsAg检测结果63例均为阴性，排除了母婴垂直传播的可能性。所有收集的血清标本分为2份：第1份进一步以12 000 r /min离心10 min后上机检测HBsAg，以排除纤维蛋白干扰或小颗粒物质干扰的可能性；第2份血清标本在贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪上检测血清胆红素(包括总胆红素和直接胆红素)，对血清总胆红素高于200 μmol/L的血清标本进行蓝光照射，照射时将血清装于透明的EP管中，在婴儿光疗箱中以450 nm蓝光照射8 h。照射后的血清再分为2份，一份用来检测胆红素，另一份用来检测HBsAg。对血清HBsAg检测阳性的新生儿，3～7 d后再次采集静脉血分离血清检测HBsAg。

1.4统计学处理 采用Graphpad Prism 7对数据进行统计分析。因患者年龄、HBsAg COI值、血清胆红素检测值均呈偏态分布，故统计描述用中位数表示。

2 结 果

2.1高速离心后HBsAg结果 对母亲HBsAg阴性的63例标本经12 000 r/min高速离心10 min后，82.54%(52/63)的血清HBsAg结果有不同程度降低，其中9例(14.29%)血清HBsAg转阴，且转阴的标本HBsAg初次检测结果COI值多集中在1.0～1.2。见表1。

2.2蓝光照射后HBsAg结果 63例新生儿标本总胆红素水平(230.5 μmol/L)均远远高于正常参考范围，79.37%(50/63)的标本胆红素>200 μmol/L，经蓝光照射8 h后血清总胆红素水平均小于检测下限。蓝光照射后有42.86%(27/63)的标本血清HBsAg检测水平降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。仅有2例标本血清HBsAg转阴，见表1。

2.33～7 d后复检HBsAg结果 对63例血清HBsAg检测结果阳性的新生儿，收集其3～7 d后的静脉血血清检测HBsAg。结果发现63例标本中的62例(98.41%)血清HBsAg均在3～7 d后转阴，只有1例新生儿6 d后检测HBsAg未转阴，但后续结果失访。见表1。

表1 不同条件处理对新生儿血清HBsAg的影响

续表1 不同条件处理对新生儿血清HBsAg的影响

3 讨 论

HBsAg是体内存在HBV感染的重要标志之一，感染后最先出现，具有免疫原性，可激发机体产生相应的抗体[9]。HBV传播方式有3种：血液传播、性接触传播和母婴垂直传播，我国乙肝高发的主要原因是家族性传播，其中以母婴垂直传播为主。检验工作中经常发现母亲HBsAg阴性而新生儿HBsAg弱阳性的病例。有研究表明，接种乙肝疫苗会导致血清HBsAg检测呈弱阳性反应[10]。史晓敏等[4]发现，新生儿高胆红素血症影响其血清HBsAg的检测结果，是造成新生儿血清HBsAg检测假阳性的主要原因之一。本研究对新生儿高胆红素血症对HBsAg检测结果的影响进行探究，并对其他影响因素进行分析。

516例新生儿中有65例血清HBsAg检测结果为阳性，回顾HBsAg阳性的新生儿母亲血清HBsAg检测结果，其中63例阴性，2例阳性。排除母婴垂直传播的干扰，对这63例母亲血清HBsAg阴性的新生儿标本进行高速离心，高速离心后82.50%的标本HBsAg检测结果有不同程度的降低，14.29%的标本HBsAg结果转阴，转阴的标本HBsAg初次检测COI值多集中在1.0～1.2。这种假阳性可能是由于离心力不足，血清中残留有纤维蛋白或细胞碎片等其他小颗粒物质与试剂中的顺磁微粒结合造成的，可以通过增加离心力，延长离心时间消除。

史晓敏等[4]认为，新生儿体内高水平的间接胆红素会引起清蛋白之间交联形成微小的颗粒物质，无法通过高速离心去除时会导致血清HBsAg检测结果呈假阳性。蓝光照射可以破坏胆红素分子的氢键，增加间接胆红素的水溶性，使其通过胆汁和尿液迅速排泄，从而达到降低体内胆红素水平。因而临床上对于新生儿黄疸一般采用蓝光照射治疗[11]。本研究对血清HBsAg阳性的新生儿标本进行蓝光照射，照射后检测血清胆红素水平均低于检测下限，排除了胆红素的干扰。复检后仅有2例HBsAg转阴，42.86%(27/63)的标本血清HBsAg检测水平有不同程度的降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。不足以证实新生儿高血清胆红素血症的干扰造成HBsAg检测呈假阳性的观点。

有研究报道，新生儿接种乙肝疫苗后HBsAg阳性主要发生于接种后0～7 d[12-13]。由于本研究入选的新生儿标本采集时间均小于7 d，所以在3～7 d后再次采集静脉血检测血清HBsAg，结果有53例转阴，有1例新生儿HBsAg未转阴，但多种原因造成结果失访。进一步佐证乙肝疫苗接种会引起HBsAg一过性阳性的推论[3]。

因此，临床工作中对于新生儿HBsAg阳性，尤其是COI值<1.2 的标本，应首先考虑离心力和离心时间不够导致的小颗粒物质干扰。经提高转速，延长离心时间消除干扰后复检，仍然阳性者考虑乙肝疫苗接种后阳性，2周后复检或进一步检测病毒核酸，尚无足够证据证明新生儿血清高胆红素血症对HBsAg检测结果的影响。