顶空气相色谱法测定盐酸奥布卡因中有机溶剂残留量

魏乐坤，张肖肖，刘宜辉

（1.山东海佑福瑞达制药有限公司，山东 临沂 276700；2.山东省药学科学院，山东 济南 250101）

盐酸奥布卡因（oxybuprocaine hydrochloride），化学名为2-（二乙胺基）乙基-4-氨基-3-丁氧基苯甲酸酯盐酸盐，是一种局部麻醉药，具有渗透力强、吸收快、表面麻醉作用强等优点，被广泛应用于各种检查及小手术的表面麻醉、润滑止痛等方面[1-4]。该原料药在合成和精制过程中用到二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚、二甲基甲酰胺，这些有机溶剂如果残留在药品中会对人体健康产生一定危害[5-7]，因此需对产品中的上述溶剂残留量进行检测。本试验采用顶空气相色谱法对盐酸奥布卡因原料药中可能存在的6种有机溶剂的残留量进行检测，结果表明，方法操作简单，灵敏度及准确度高，可同时检测盐酸奥布卡因中6种溶剂残留量，可用于盐酸奥布卡因原料药的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890B气相色谱仪（配备FID检测器，7697A顶空进样器，美国安捷伦）；AG系列空气发生器（济南格润实验仪器有限公司）；LM系列氢气发生器（济南格润实验仪器有限公司）；十万分之一电子天平（瑞士梅特勒）。

1.2 试药

二氯甲烷，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，甲基叔丁基醚，二甲基甲酰胺（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；水（超纯水）。盐酸奥布卡因原料药（山东海佑福瑞达制药有限公司，批号：F06-1808001，F06-1808002，F06-1808003）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent DB-624毛细管柱（30.0 m×0.53 mm，3.00 μm）；进样口温度200 ℃；检测器温度200 ℃；载气：氮气；载气流速：1.5 ml/min；分流比：10:1；程序升温：40 ℃保持3 min，10 ℃/min升至120 ℃，保持8 min。顶空条件：平衡温度88 ℃，平衡时间20 min，定量环温度110 ℃，传输线温度120 ℃，自动顶空进样，进样量1 ml。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的制备 取二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚、二甲基甲酰胺适量，分别置10 ml加有适量水的量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为6，50，30，50，50，8.8 mg/ml的对照品储备液，分别精密量取上述储备液各1 ml，置同一100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取上述对照品溶液2.0 ml，置20 ml顶空进样瓶中，密封。

2.2.2 专属性溶液的制备 取盐酸奥布卡因100 mg，精密称定，置20 ml顶空进样瓶中，精密加入对照品溶液2 ml，密封后摇匀。

2.3 专属性实验

取上述空白溶剂（2 ml水）、专属性溶液分别顶空进样，记录色谱图，见图1。结果，空白溶剂对各待测组分的测定无干扰，甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺主峰的理论塔板数分别为6189，17 019，43 034，48 022，118 903，120 278，相邻峰的分离度分别是4.45，6.48，2.01，9.48，42.12，说明该方法对盐酸奥布卡因原料中残留溶剂的测定具有良好专属性。

图1 专属性实验谱图

2.4 精密度试验

精密量取对照品溶液2 ml，置20 ml顶空进样瓶中，密封后摇匀，平行配制6份，进行测定，记录色谱图，并计算各溶剂峰面积和保留时间的RSD，结果见表1。由表1可见，甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺峰面积与保留时间的RSD均不大于10.0 %，说明方法的精密度良好。

表1 精密度试验结果

2.5 检测限和定量限

2.5.1 定量限的确定 分别精密量取甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺适量，用稀释剂（水）逐步稀释，直至信噪比（S/N）约为10，以确定定量限（LOQ），结果见表2。

表2 定量限试验结果

2.5.2 检测限的确定 将定量限浓度用稀释剂逐步稀释，直至S/N约为3时，即为检测限（LOD），其结果见表3。

表3 检测限试验结果

2.6 线性试验

精密量取甲醇对照品储备液0.1，0.2，0.5，1.0，1.5 ml，分别置于100 ml容量瓶中，用稀释剂（水）稀释制成浓度分别为0.06，0.12，0.24，0.3，0.45 mg/ml的溶液，分别进样，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性回归方程。乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯和二甲基甲酰胺同样按照以上方法得到线性方程，见表4。

表4 线性试验结果

2.7 准确度试验

分别精密量取对照品储备液0.5，1.0，1.5 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为溶液1～3。取盐酸奥布卡因100 mg，精密称定，分别置20 ml顶空进样瓶中，精密加入溶液1～3各2 ml，各3份，密封后摇匀，作为回收率溶液。分别进样测定，按外标法计算，结果甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯和二甲基甲酰胺的回收率分别为100.05 %，99.21 %，99.65 %，99.34 %，98.79 %，98.99 %，RSD分别为0.51 %，1.1 %，0.89 %，0.75 %，0.99 %，1.1 %。

2.8 样品的测定

3批盐酸奥布卡因原料药残留溶剂测定结果见表5。

表5 盐酸奥布卡因原料药中残留溶剂的测定结果

盐酸奥布卡因原料残留溶剂的限度参考2015年版《中国药典》，甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺残留量限度分别为3000，5000，600，5000，5000，880 ppm。由表5可见，3批样品中的甲醇、乙醇、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯均未检出，甲基叔丁基醚残留量未超过限度。

3 讨论

《中国药典》2015 年版四部通则 0861 规定，二氯甲烷、甲醇、二甲基甲酰胺为第二类残留溶剂，乙醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯为第三类残留溶剂，这6种残留溶剂对人体有一定的危害，应限量使用。

基于DB624毛细管柱对残留溶剂检测的良好分离效能，我们使用该色谱柱通过对顶空进样、程序升温、流速等色谱条件的调整，确定了本文的检测方法，盐酸奥布卡因样品中6种残留溶剂在该方法条件下均得到良好分离，且峰形良好。

本试验通过专属性、精密度、检测限与定量限等项目的验证，表明该顶空气相色谱法分离度好、灵敏度高，适用于实际生产中盐酸奥布卡因原料残留溶剂（甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺）的测定。