Lesinurad原料药中7种有机溶剂残留的测定

张相军，邓玉晓，翟 宇，张宪科，赵仁永

（1.山东省药学科学院，山东 济南 250101；2.山东鲁环检测科技有限公司，山东 济南 250101）

Lesinurad{2-[（5-溴-4-（4-环丙基萘-1-基）-4H-1, 2, 4-三唑-3-基）硫代]乙酸}是一种选择性尿酸重吸收抑制剂[1]，能选择性地作用于尿酸盐转运蛋白1（URAT1）[2]和有机阴离子转运蛋白4（OAT4）[3]，从而降低血尿酸浓度。Lesinurad由阿斯利康（AstraZeneca）公司[4]的子公司Ardea生物科技公司[5]研制，2015年12月22日获得FDA批准，商品名：Zurampic[6]，为全球首个URAT1抑制剂，临床联合黄嘌呤氧化酶抑制剂（如别嘌醇，非布司他）治疗高尿酸血症相关痛风[7]。目前《中国药典》2015年版二部、EP9.0、JP17与USP40均未收载该药，尚未见关于Lesinurad原料药中有机溶剂残留量检测的报道。根据Lesinurad的合成工艺[8-9]，生产的后5步中分别使用了二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、四氢呋喃和正己烷等有机溶剂。为确保药品的安全、有效和质量可控，根据《中国药典》2015年版四部的相关规定及人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）指导原则的相关规定，应增加有机溶剂的检查。因此，本文对Lesinurad原料药的残留溶剂进行了考察，建立了气相色谱法（GC）测定Lesinurad原料药中7种残留溶剂的方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器

GC-2010 Plus气相色谱仪（日本岛津）；AOC-20i型自动进样塔（日本岛津）；GC-14A/B型氢火焰离子化检测器（日本岛津）；XS205型天平（梅特勒-托利多）。

1.2 药品与试剂

Lesinurad原料药（山东省药学科学院，批号：121201，121202，121203；纯度：99.8 %，99.8 %，99.7 %），二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯为分析纯，DMF、四氢呋喃、正己烷、N,N-二甲基乙酰胺为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

固定相为Rtx-502.2毛细管柱（30 m×0.32 mm，1.80 µm）；程序升温，初始柱温40 ℃，保持2 min，以每分钟5 ℃的速率升温至200 ℃。进样口温度180 ℃，分流比为20:1；氢火焰离子化检测器，检测器温度为220 ℃。载气：高纯氮气，流速2.0 ml/min。直接进样1 μl。

2.2 溶液配制

2.2.1 空白溶液的制备 以N,N-二甲基乙酰胺作为空白溶液。

2.2.2 对照品贮备液的制备 称取二氯甲烷300 mg、乙酸乙酯2500 mg、丙酮2500 mg、甲苯150 mg、DMF 440 mg、四氢呋喃360 mg、正己烷145 mg，置入有适量N,N-二甲基乙酰胺的100 ml量瓶，充分振摇使溶解，加N,N-二甲基乙酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

2.2.3 对照品溶液的制备 精密量取上述对照品储备液2 ml，置入100 ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺至刻度，摇匀，作为对照品溶液（限度浓度）。

2.2.4 供试品溶液的制备 精密称取Lesinurad 1.0 g，置入10 ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并定容，作为供试品溶液。

2.3 专属性试验

取2.2项下空白溶液、对照品贮备液和对照品溶液，按2.1项下色谱条件检测。结果显示，丙酮、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、DMF的保留时间分别为2.658，3.304，3.721，4.995，5.526，10.326，12.356 min，相邻色谱峰分离度均大于1.5，溶剂峰不干扰各组分的测定，方法专属性良好，色谱图见图1。

图1 GC图谱

2.4 线性关系考察

分别精密量取对照品贮备液0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.2 ml，置入50 ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺稀释至刻度，摇匀。按2.1项下色谱条件分别进样。分别以二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，其线性关系见表1。

表1 二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷的线性关系考察结果

由表1可知，二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷在线性范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

取对照品溶液，按2.1项下色谱条件，连续进样6次，记录色谱图，计算峰面积RSD（n=6），二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷峰面积RSD（n=6）分别为0.95 %，0.81 %，1.14 %，0.89 %，2.08 %，0.78 %，0.64 %，表明精密度符合要求。

2.6 准确度试验

精密称取样品（批号：121201）1.0 g，置入10 ml量瓶，共12份，其中3份分别用N,N-二甲基乙酰胺溶解并定容，作为空白溶液。分别配制低浓度（限度浓度的80 %）、中浓度（限度浓度的100 %）、高浓度（限度浓度的120 %）3种浓度的对照品溶液，取供试品，分别采用上述3种不同浓度的对照品溶液溶解并定容，每个浓度配制3份。以2.2项下的对照品溶液作为对照。按2.1项下色谱条件，分别进样测定。回收率试验结果见表2。

表2 二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷的回收率试验结果

由表2可知，二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷的回收率符合要求。

2.7 定量限与检出限

将对照品溶液逐级稀释，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图，直至信噪比为10:1和3:1，即为定量限和检出限。丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷定量限分别为0.06，0.145，0.06，0.036，0.2，0.173，0.070 ng；二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷检出限分别为0.02，0.048，0.02，0.012，0.070，0.058，0.023 ng。

2.8 重复性试验

取同一批（批号：121201）样品6份，每份约1.0 g，精密称定，分别置入10 ml量瓶，按2.2项方法制备供试品溶液并测定。乙酸乙酯平均含量为0.022 %，RSD=0.87 %。表明方法重复性良好。

2.9 耐用性试验

通过改变初始柱温、进样口温度、检测器温度和载气流速等参数，对照品溶液中各组分分离度均大于1.5。表明该方法的耐用性良好。

2.10 样品测定

取本品3批（批号：121201，121202，121203），按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别进样测定，以外标法计算得3批样品的乙酸乙酯残留量平均值分别为0.029 %，0.021 %和0.019 %，3批样品中均未检出二氯甲烷、丙酮、甲苯、DMF、四氢呋喃与正己烷。

3 讨论

3.1 色谱柱的筛选

前期实验分别选用了安捷伦HP-5色谱柱、Rtx-502.2色谱柱、聚乙二醇2K色谱柱，发现非极性色谱柱HP-5不能有效分离各组分，极性色谱柱聚乙二醇2K有杂峰干扰；采用中等极性的Rtx-502.2色谱柱能很好地分离各组分，且溶剂与供试品均未出现干扰峰，因此选用中等极性的Rtx-502.2色谱柱。

3.2 进样方式的考察

对于进样方式，前期试验考察了顶空进样和直接进样，结果采用顶空进样时，由于各组分的限度差别过大，甲苯和二氯甲烷限度浓度几乎检测不到，灵敏度明显低于直接进样。因此选用直接进样方式。

3.3 溶剂的选择

Lesinurad原料合成路线中用到了DMF，需检测DMF的残留，因此，选择N,N-二甲基乙酰胺为溶剂。