冠心病病人DDAH2基因-449G/C多态性对血浆ADMA水平的影响

苏 锐，白 瑞，边云飞，肖传实

冠心病发病过程复杂，目前研究认为内皮功能不全参与冠心病发生发展。内皮功能障碍的主要原因是一氧化氮(NO)生物利用度降低，NO是血管内皮细胞合成的一种有效的生物血管舒张剂[1-2]。非对称二甲基精氨酸(ADMA)是在甲基化核蛋白水解过程中产生的，通过与L-精氨酸竞争，作为内源性的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂，导致内皮功能障碍和血管疾病[3-4]。ADMA已证明是心血管疾病的独立预测因子。二甲基精氨酸二甲基氨基氢化酶2(DDAH2)可促进ADMA代谢，在调节急性炎症反应中发挥重要作用。本研究分析冠心病病人DDAH2基因-449G/C多态性对血浆ADMA水平的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年12月—2018年12月在我院心内科住院行冠状动脉造影检查的412例病人，年龄31～80岁。根据造影结果将分支中任何1支狭窄≥50%的病人作为冠心病组，共212例，男121例，女91例；无狭窄病人200例作为对照组，其中男114例，女86例。同时将冠心病病人根据年龄分组，即31～40岁组、41～0岁组、51～60岁组、61～70岁组、71～80岁组。各组性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)。所有病人均签署知情同意书。冠心病根据1979年世界卫生组织制定的缺血性心脏病诊断标准，同时行冠状动脉造影，将冠状动脉管腔狭窄程度≥50%确诊为冠心病。

1.2 观察指标

1.2.1 冠状动脉造影 经桡动脉进行两个或两个以上体位投照，结果由两位专业介入医师评定。

1.2.2 DDAH2基因-449G/C多态性分析 通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测两组DDAH2基因-449G/C多态性。详见图1。

图1 DDAH2基因的SNPrs805305位点酶切产物电泳图

1.2.3 ADMA水平测定 抽取所有病人晨起空腹肘静脉血5 mL，将血标本进行离心，取上清血浆，在-20 ℃保存，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆ADMA水平。

2 结 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡吻合度检验 DDAH2基因-449G/C多态性基因频数分布采用χ2 检验，结果符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=2.981，P>0.05)。

2.2 两组DDAH2基因-449G/C多态性位点基因型及等位基因频率 冠心病组CG、GG基因型频率及G等位基因频率高于对照组。详见表1。

表1 两组DDAH2基因-449G/C多态性位点基因型及等位基因频率 单位：例(%)

2.3 两组血浆ADMA水平比较(见表2)

表2 两组血浆ADMA水平比较(±s) 单位：μmol/L

2.4 冠心病病人DDAH2基因多态性对ADMA水平的影响 不同DDAH2基因型之间ADMA呈增加趋势，ADMA在GG型中含量最高(0.517±0.090)μmol/L，在CC型中含量最低(0.316±0.080)μmol/L，CG型为(0.461±0.012)μmol/L。详见图2。

图2 DDAH2基因多态性对冠心病病人ADMA水平的影响

2.5 冠心病病人血浆ADMA水平与年龄的关系 冠心病组血浆ADMA水平与年龄呈正相关(r=0.479，P<0.05)。详见图3。

图3 冠心病病人血浆ADMA水平与年龄的关系

3 讨 论

血管内皮细胞产生的NO是重要的内源性血管舒张因子，而ADMA是精氨酸类似物，是eNOS内源性竞争性抑制剂。DDAH可将ADMA水解为瓜氨酸和二甲胺，是一种具有分解代谢ADMA的胞质蛋白酶，可调节血浆ADMA水平。ADMA水平升高导致血管内皮细胞产生的NO含量降低，进而导致血管内皮功能紊乱、血小板聚集、白细胞和单核细胞在血管壁聚集、血栓形成，促进动脉粥样硬化发生发展[5-6]。血浆ADMA水平升高参与冠状动脉粥样硬化的众多环节[7]，伴有心血管危险因素(包括高血压、高脂血症、吸烟、糖尿病和高同型半胱氨酸血症)病人均表现为NOS生物活性降低，ADMA升高是冠状动脉粥样硬化的危险因素[2-3]。本研究结果显示，冠心病病人血清ADMA水平较对照组增高。

DDAH2主要存在于血管内皮细胞，血管内皮细胞是eNOS表达的部位。DDAH2定位于6p21.3，该区域包含多个参与免疫和炎症反应的基因，与自身免疫性疾病易感性有关。DDAH2在ADMA代谢和心血管疾病中的作用存在争议。相关研究表明，DDAH2基因变异与血清ADMA水平显著相关[8-10]。本研究分析冠心病病人DDAH2基因-449G/C多态性对血浆ADMA水平的影响。结果显示：携带DDAH2基因+GG基因型冠心病病人血浆ADMA水平较高。DDAH2基因-449G/C多态性与多种心脑血管疾病有关，包括2型糖尿病、高血压、脑出血和休克等。DDAH2不仅直接影响血浆ADMA水平，且NO参与细胞分化或在细胞周期调控过程中发挥重要作用。但有研究显示，DDAH2多态性与冠心病风险无关[10-11]。总之，DDAH2基因遗传多态性(-449G/C，rs805305)与冠心病病人血浆ADMA水平有关。随着年龄增长，冠心病发病率增高，且病情加重，尤其是男性50岁或女性60岁之后，冠状动脉粥样硬化发展迅速[12-13]。本研究结果表明，冠心病病人血浆ADMA水平随着年龄增加而逐渐升高，表明血浆ADMA水平可作为冠状动脉粥样硬化的新型标志物。