不同起始血液制备洗涤红细胞的质量比较*

邓 莉，欧阳熊妍，彭 楷，李 娜，汪 娟

重庆市血液中心，重庆 400052

洗涤红细胞由于去除了几乎所有血浆和绝大部分非红细胞成分，广泛应用于临床多种疾病的治疗。按照《血站技术操作规程(2019版)》，洗涤红细胞起始血为合格血液，按照目前红细胞成分分类，悬浮红细胞和去白悬浮红细胞均可应用于制备洗涤红细胞。由于这两种红细胞成分的质量差异，采用同样的制备工艺流程所制备的洗涤红细胞是否有差异？本研究分别选用悬浮红细胞和去白悬浮红细胞作为起始血，制备洗涤红细胞并对其相关的质量指标进行比较。

1 资料与方法

1.1一般资料 随机抽取成品库1 U合格血液60袋(来源于200 mL全血所制备的红细胞为1 U)，悬浮红细胞和去白悬浮红细胞各30袋。入组血液均为采血后7 d以内的血液。

1.2仪器、材料及试剂

1.2.1血液制备 赛默飞3BP+大容量低温离心机(赛默飞3BP)，全自动全血成分血分离机(LMB，德国)，无菌接管机(泰尔茂TSCD-Ⅱ型，日本)，南格尔250 mL×3生理盐水溶液联袋(四川南格尔)，采血袋200 mL(山东威高)。

1.2.2检测仪器及试剂 Sysmex XS 500i全自动血细胞计数仪及配套试剂，北京瑞尔达 photometer 4040 半自动生化仪，游离血红蛋白检测试剂盒(批号：191012)，奥林巴斯AU400全自动生化仪，伊普诺康脑脊液/尿液总蛋白测定试剂盒(批号：20190902)。

1.3方法

1.3.1洗涤红细胞制备 使用无菌接驳机将冷藏的洗涤用生理盐水溶液联袋和待洗涤的红细胞悬液导管进行无菌结合连通。将生理盐水溶液150 mL移至红细胞袋内夹紧导管混匀，混匀后4 669×g离心10 min，离心温度4 ℃，加速9，减速5，离心完成，取出血袋，避免震荡。将血袋置于全自动全血成分血分离机进行分离操作，程序设置：设备运行前所有卡钳闭合，挤压板向前移动，打开A、D卡钳；分离废液由母袋位置到顶部天平位置，分离到M1位置停止，卡钳A、D闭合。继续分离废液，挤压板继续向前移动，启用A卡钳的流速调节器，打开A、D卡钳，分离到E1、E2位置停止，卡钳A、D闭合。分离白膜层，挤压板继续向前位置到顶部天平位置，卡钳A、D闭合，挤压板居中。重复上述操作，洗涤3次。洗涤完成，加入50 mL红细胞保养液，混匀。

1.3.2检测指标 检测过程：制备完成后，质管科按照GB18469-2012的规定进行质量检测，外观、容量、血红蛋白含量、上清蛋白质含量、无菌试验标本在抽检后当天分样检测，溶血率由母袋血液在2～6 ℃冰箱悬挂静置保留至储存期最后1周，取上清液检测。

1.3.2.1血红蛋白含量 采用Sysmex XS 500i全自动血细胞计数仪检测总血红蛋白浓度(CHb)，血红蛋白含量计算公式为Hb=CHb×V，式中Hb为血红蛋白含量，V为全血或成分血体积。

1.3.2.2溶血率 在储存期最后1周，采用邻-甲联苯胺法进行游离血红蛋白检测，溶血率计算公式为P=(1-HCT)×CFHb/CHb×100%[1]，式中P为溶血率，HCT为血细胞比容，CFHb为上清液游离血红蛋白浓度。

1.3.2.3上清蛋白质含量 上清蛋白质含量计算公式为Cpr=A1CV(1-HCT)/A0[1]，式中Cpr为上清蛋白质含量，A1为样品吸光度，A0为标准品吸光度，C为标准品浓度，V为洗涤红细胞容量。

1.3.2.4容量 血袋称重，分别计算洗涤前后红细胞容量。

1.3.2.5细菌培养 进行需氧菌和厌氧菌培养。

2 结 果

2.1洗涤前后容量比较 悬浮红细胞组洗涤过程损耗的血液明显多于去白悬浮红细胞组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 洗涤前后容量比较

2.2两组制备的洗涤红细胞相关质量指标的比较 采用悬浮红细胞制备的洗涤红细胞的血红蛋白含量、上清蛋白含量、储存期末溶血率与采用去白悬浮红细胞制备的洗涤红细胞相比，差异均无统计学意义(P>0.05)。所有入组血液细菌培养均无细菌生长。见表2。

表2 洗涤后各项质量指标比较

3 讨 论

洗涤红细胞为临床常用血液制品之一，推荐用于血浆蛋白过敏患者、非同型造血干细胞移植患者、IgA缺乏患者、高钾血症及肝肾功能不全等贫血患者。洗涤红细胞是采用特定的方法将保存期内的全血、悬浮红细胞用大量等渗溶液洗涤，去除几乎所有血浆成分和大部分非红细胞成分，并将红细胞悬浮在氯化钠注射液或红细胞添加剂中所制成的红细胞成分血[1]，可降低过敏、非溶血性发热等输血反应。在血液制备过程中，离不开“人、机、料、法、环”的质量控制要素，需建立标准化操作流程，而洗涤红细胞起始血液选择的固定化，利于制备血液的过程控制及质量稳定。传统观念中，洗涤红细胞起始血应选择去白悬浮红细胞，因为这样的起始血液其白细胞经过白细胞过滤器清除后残留更少，同时白细胞具有免疫活性,在储存期间会释放多种炎症因子,导致红细胞的破坏[2-3],但是按照目前国标对于洗涤红细胞的定义和质量检测，取消了检测白细胞残留量指标。同时在本研究中，全部选用采集后7 d以内的血液，通过离心后洗涤去除掉血液中的大部分白细胞，也能达到去除白细胞、减少输血不良反应的目的[4]，两组的储存期末溶血率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

采用全自动全血成分血分离机分离制备洗涤红细胞，两组均采用同一分离制备程序，利用分离机光学探测器准确探测血液中白膜层，控制流速以及掌控分离效果，避免人工分离过程差异，在白细胞去除和红细胞回收环节上所造成的波动较大[5]。本研究中所分离制备的洗涤红细胞，悬浮红细胞组和去白悬浮红细胞组的血红蛋白含量比较，差异无统计学意义(P>0.05)，所有数据均在国标范围以内；悬浮红细胞组和去白悬浮红细胞组的上清蛋白质含量比较，差异无统计学意义(P>0.05)；说明选用合格的悬浮红细胞和去白悬浮红细胞作为起始血，均能制备符合国标要求的洗涤红细胞，二者质量指标无明显差异。

由于红细胞容量受献血者个体影响较大[6]，因为来源于HCT高的血液经离心分离去除血浆后，所获得的红细胞悬液容量较高，而来源于HCT低的献血者所捐献的血液，所分离制备的红细胞悬液容量也相对较低。因此本研究中仅对比同一袋血液洗涤前后容量差，悬浮红细胞组容量损耗较去白悬浮红细胞组损耗量大，差异有统计学意义(P<0.05)。分析原因，红细胞在反复洗涤过程中，要去除其中几乎所有血浆和绝大部分白细胞，按照洗涤红细胞的制备要求，灌注生理盐水后离心，去除上清液和白膜层，由于去白悬浮红细胞前期在制备过程中，已经通过白细胞过滤器去除了绝大部分白细胞，损失了部分血液，因此在洗涤环节中，对于白膜层的洗涤和去除，比悬浮红细胞白膜层的洗涤，损耗的血量更少。随着无菌接管技术的发展，本研究中，采用无菌接管技术连接洗涤用生理盐水和血液，整个过程可视为密闭系统，可以在常规血液制备操作环境中进行，减少二次污染机会[7]。