神效散外用对急性软组织损伤后肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β的影响

王爱国，谷福顺，郑昆仑，陆 军，赵 允，王晓辉

急性软组织损伤是指各种外来暴力直接或间接作用于机体，包括皮肤、筋膜、肌肉韧带、滑膜、肌腱等软组织损伤，造成受创部位疼痛、肿胀、肤色青紫或有瘀斑、肢体活动障碍等，病理本质以局部急性炎症和组织修复为主，是运动系统常见疾病，发病率近年来呈逐渐增高趋势[1-2]。神效散长期应用于急性软组织损伤的治疗中，收到了满意的疗效。但其治疗机制尚需进一步探究，为此进行本项实验研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 实验组：三个梯度浓度的神效散散剂，贮存条件：按产品要求贮存于4℃。对照组：阴性空白对照；扶他林（山德士制药有限公司生产，批号：VP0981），用作阳性对照。

1.1.2 设备 BSA224S CW型电子分析天平（德国赛多利斯公司），Z92-BD 多功能搅拌器（天津利华仪器厂）。

1.2 造模方法 50只SPF级180～220 g雄性SD大鼠。采用10 %硫化钠溶液脱除大鼠小腿部鼠毛，用自制撞击器（160 g重量，固定高度，撞击接触面直径0.8 cm）在大鼠小腿中部外侧连续打击7次，造成局部软组织挫伤模型。

1.3 实验步骤 将大鼠随机分为5组，即阴性空白对照组、阳性扶他林对照组和神效散高、中、低剂量组，每组10只，标识大鼠并称量体重。将药物涂布在纱布上并固定到已备皮的大鼠损伤皮肤，过夜，连续给药7 d，1次/d。涂布面积以超过受损区面积1/2以上为度。

1.4 观察指标

1.4.1 血清IL-1β和TNF-α含量 造模后4 d、7 d，于眼眶取血，3 500 r/min离心15 min取血清，采用ELISA试剂盒测定血清中IL-1β和TNF-α含量。

1.4.2 肌肉组织IL-1β和TNF-α含量 取造模后4 d，各组处死5只大鼠，造模后7 d，各组处死5只大鼠，用手术刀切开大鼠受打击部位皮肤，分离皮下组织，切取受打击部位中心呈青紫色的肌肉组织，用生理盐水漂洗1 min，滤纸吸干，分析天平称取(100±5) mg组织，每10 mg组织加入生理盐水0.5 mL，于匀浆器中缓慢而均匀地研磨15 min，至匀浆液呈均匀一致悬浊液，倒入试管中在高速冷冻离心机以2 500 r/min离心15 min，收集上清液，用ELISA试剂盒测定IL-1β和TNF-α含量。

2 结果

2.1 TNF-α含量 第4天时，每组血清中含量与阴性对照组均有统计学差异（P＜0.05）；第4天时，高剂量组与中剂量组肌肉组织中含量与阴性对照组有统计学差异（P＜0.05）；第7天时，中剂量组和低剂量组血清含量与阴性对照组有统计学差异（P＜0.05）；第7天时，中剂量组肌肉组织中含量与阴性对照组有统计学差异（P＜0.05）。提示神效散可使急性软组织损伤后血清和肌肉组织中的TNF-α含量减低，见表1。

表1 各组大鼠血清及肌肉TNF-α含量比较

2.2 IL-1β含量 第4天时，每组血清中含量与阴性对照组均有统计学差异（P＜0.05）；第4天时，高剂量组与中剂量组肌肉组织中含量与阴性对照组有统计学差异（P＜0.05）；第7天时，中剂量组和低剂量组血清含量与阴性对照组有统计学差异（P＜0.05）；第7天时，中剂量组肌肉组织中含量与阴性对照组有统计学差异（P＜0.05）。提示神效散可使急性软组织损伤后血清和肌肉组织中的IL-1β含量减低，见表2。

表2 各组大鼠血清及肌肉IL-1β含量比较

3 讨论

急性软组织损伤属中医筋伤范畴，是一种以骨骼肌组织损伤为主要病理表现的无菌性炎症反应性疾病[3-4]。局部组织坏死、毛细血管扩张、炎性细胞膨胀、炎症介质释放、组织水肿等是其主要病理过程[5]。病理反应进程中，主要为无菌性炎症反应所引发的各种炎性介质和多种致炎细胞因子的分泌与释放[6]。TNF-α是TNF家族的重要成员，亦是一类拥有多种生物效能的炎性介质，是炎症反应过程中出现最早、最重要的炎性介质，能激活中性粒细胞和淋巴细胞，使血管内皮细胞通透性增加，调节其他组织代谢活性并促使其他细胞因子的合成和释放[7-8]。研究表明，TNF-α可诱导引发炎症反应与诱导形成IL-1、IL-6等各类炎性因子，诱发和扩大炎症反应，通过刺激、生成超氧化物，释放出溶酶体而损伤组织细胞，使炎性介质聚集，故TNF含量水平与损伤严重程度呈正相关[5]。IL-1β是炎性反应过程中一个重要介质，组织受损后，炎症部位及脊髓水平的浓度都会升高，而且还能诱导其他促炎因子释放，促进、维持炎症反应，引发炎性疼痛，在炎症反应中起重要作用[9-10]。

本次实验中，第4天时，各神效散组血清TNF-α、IL-1β含量与阴性对照组，都有所减少，均有统计学意义，以中剂量组最明显；而肌肉组织TNF-α、IL-1β含量中剂量组与高剂量组低于阴性对照组，且中剂量组更明显。在第7天时，低剂量和中剂量组血清TNF-α、IL-1β含量与阴性对照组，都有所减少，均有统计学意义，以中剂量组最明显；而肌肉组织TNF-α、IL-1β含量只有中剂量组低于阴性对照组。提示急性软组织损伤后中剂量组神效散外用可使TNF-α、IL-1β的含量明显降低，利于损伤后的恢复。

神效散为使用10余年的制剂，在中医外治治疗急性软组织损伤方面疗效显著[11-13]。方中栀子、大黄、泽兰、侧柏叶、赤芍、天花粉清热泻下通经、利水消肿，桂枝、羌活、白芷辛温散寒、消肿止痛，沉香降气止痛，血竭、三七、乳香、没药、紫荆皮活血化瘀、疏通经络，同时辅以骨碎补、续断接骨续筋[14]。通过本次实验，进一步证实了神效散外用的临床疗效，同时证实临床外用神效散外用不是越多越好，达到中等剂量即可达到临床较好的疗效，其机制可能与减少损伤组织中炎性与促炎介质分泌和释放，促进炎性因子代谢有关[15]。