云南省某规模化猪场三种主要病毒抗体检测与分析

马振乾，王辉之，王宗升，梁俊超，王小龙，夏小静，王新平

(1.吉林大学 动物医学学院,吉林 长春 130062； 2. 河南科技学院 动物科技学院，河南 新乡 453003；3.青岛易邦生物工程有限公司 动物基因工程疫苗国家重点实验室，山东 青岛 266000)

疫苗免疫是猪场采用的主要手段，为猪场稳定生产起着至关重要的作用[1]。定期对猪群进行疫苗免疫抗体水平监测，是衡量免疫效果的主要方法[2]。2019年5月云南某规模猪场母猪存栏450头，生产较为稳定，疫苗免疫齐全。本试验对猪场危害较为严重的3种病毒性疾病(猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病病毒)进行抗体检测，及时了解猪群的总体免疫水平，并发现潜在风险，对猪场的疫苗选择、免疫程序调整和免疫效果提高提供重要依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清 2019年5月份在云南省某规模场采集92份血液样品，在公猪、后备母猪、怀孕母猪、哺乳母猪、断奶母猪猪群中各随机采集10份血液样品，4周龄、7周龄、10周龄、13周龄、16周龄、20周龄和26周龄猪群中各随机采集6份血液样品，采血后自然凝固，分离血清，置-20 ℃冰箱保存待测。

1.1.2 检测试剂盒及主要仪器 猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病野毒gpI(PRV-gE)抗体检测使用美国IDEXX ELISA抗体检测试剂盒。酶标仪(型号TECAN)，购自瑞士帝肯公司；离心机(型号TGL-16)，购自湘仪公司。

1.2 方法

1.2.1 检测方法及结果判定 按照各病毒的试剂盒检测说明书进行操作，其操作过程大体如下：被检样品加入与感作→洗涤→酶标二抗的感作→洗涤→加入底物→加入终止液终止→OD值测定与分析。3种病毒抗体检测结果判定标准按说明书标注见表1。阻断率=(阴性对照OD450值-被检样品OD450值)/阴性对照OD450值；S/P=(样本OD(650)-阴性对照OD(650)平均值) /(阳性对照OD(650)平均值-阴性对照OD(650)平均值)；S/N = 样本OD(650)/阴性对照OD(650)平均值。

表1 不同病毒抗体检测结果的判定标准Table 1 The standard of criterion for determination of different virus antibodies

1.2.2 数据处理 样品检测结果应用Excel 2013进行统计学分析处理。

2 结果与分析

2.1 猪场三种病毒性疾病抗体检测结果

该猪场92份血清样品中，CSFV抗体平均阻断率为74.76%，阳性率为94.57%，达到国家免疫抗体合格率；PRRSV抗体平均S/P值为1.71，抗体阳性率为86.96%；PRV-gE抗体平均S/N值为0.9，全部为阴性，离散度较低(见表2)。

表2 三种病毒性疾病血清抗体检测结果Table 2 Results of serum antibody levels about three viral diseases

2.2 不同生产阶段猪群的抗体检测结果

2.2.1 不同生产阶段猪群的CSFV抗体检测结果 由表3可见，在4周龄时，猪群抗体水平最差，阳性率仅为50%，平均阻断率仅为37%；其次是7周龄猪群，抗体阳性率为66.67%，平均阻断率为43.44%。其他生产阶段猪群CSFV抗体阳性率均为100%，抗体平均阻断率均在60%以上。

表3 不同生产阶段猪群CSFV抗体检测结果Table 3 Results of CSFV antibody levels in pigs on different production stages %

2.2.2 不同生产阶段猪群PRRSV抗体检测 由表4可见，4周龄猪群抗体全部为阴性，平均S/P值最低；其次为7周龄猪群，抗体阳性率为66.67%，平均S/P值为1.7；哺乳母猪群抗体阳性率为80%，平均S/P值为0.55，低于其他种猪群(公猪、后备猪、怀孕母猪和断奶母猪)抗体水平。

表4 不同生产阶段猪群PRRSV抗体检测结果Table 4 Results of PRRSV antibody levels in pigs on different production stages %

2.2.3 不同生长阶段猪PRV-gE抗体检测结果 由表5可见，整体猪群抗体全部为阴性，平均S/N值在0.82～0.94之间，抗体离散度较低，均在9%以下，整齐度好。

表5 不同生产阶段猪群PRV-gE抗体检测结果Table 5 Results of PRV-gE antibody levels in pigs on different production stages %

3 讨 论

猪瘟免疫是猪场重要的基础免疫之一，猪瘟控制的好坏直接关系到整个猪群的健康状况。目前来说，猪瘟普免已经是猪场常用的一种免疫方式[1]，对母猪的分娩率、 产仔数和产仔质量无显著影响。王世玉等[2]对红河州和楚雄州部分地区进行猪瘟抗体监测发现，各地猪瘟病毒抗体阳性率均在92%以上，多数地方猪瘟病毒抗体阳性率已达到100%，抗体水平的整齐度较高，免疫效果较好。本猪场猪瘟抗体阳性率为94.57%，离散度为24.71%，总体猪瘟免疫较为理想，保育阶段猪群水平较差，可能与部分母猪或仔猪感染免疫抑制性疾病，干扰猪群免疫反应有关[3]，因此，猪场应加强常见免疫抑制性疾病的免疫，如猪蓝耳病、猪伪狂犬等，同时，在猪瘟疫苗免疫时可配合免疫增强剂提高疫苗抗体水平，如转移因子等。

蓝耳病对猪场危害较为严重，可造成母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状，是猪场重点防控的疾病之一。王钊哲等[4]在2010-2014年期间对云南省部分规模化猪场高致病性猪蓝耳病发病情况进行调查发现，其阳性率从2010-2013年逐年递减，2014年又呈现升高趋势；每年6～8月发病率最高，多个地区均有发病。叶淑均等[5]对重庆市渝北区某种猪场调查发现，猪繁殖与呼吸综合征病毒的感染程度较高，且在不同猪群普遍存在。虽然目前猪场对于蓝耳病免疫争议较大，但总体来看，蓝耳病免疫猪场生产相对更稳定。沈燕等[6]对安徽省对319份猪血清样本和319份猪扁桃体样本进行检测，发现免疫猪群的HP-PRRS抗体阳性率明显偏高，且病毒核酸阳性率低于未免疫猪群，说明疫苗免疫具有一定的保护作用，保育猪群及育肥猪群感染率相对较高，是该病防控的短板。本试验中，保育猪群感染压力也较大，抗体平均S/P值仅为0.14，且哺乳阶段母猪抗体水平也较低，因此，猪场应加强蓝耳病免疫，建议母猪每年增加一次免疫，仔猪间隔3～4周后加强一次免疫，后期再跟踪观察抗体水平及生产状况。

猪伪狂犬病近些年发生较为频繁，是猪场重点关注的疾病。李春芬等[7]通过对2013-2017年安徽省猪群中猪伪狂犬病病毒(PRV)的感染情况与流行趋势调查发现，安徽省猪群中PRV-gE抗体阳性率基本呈逐年上升趋势，各生长阶段均有PRV感染，猪伪狂犬病(PR)在安徽省猪群中持续流行。但是，随着猪场对此病的重视，很多猪场可以保持阴性[8-9]，稳定生产。本试验猪场PPV防控较好，PRV-gE呈阴性。