七星茶颗粒的薄层色谱鉴别研究

刘春蓉，刘 佳，王亚芳，周艳飞，钟昆芮，巩 浩，杨彦平

(1西安雨田农业科技有限公司，西安710075；2北京市兽药监察所，北京102629)

七星茶颗粒是由薏苡仁、稻芽、山楂、淡竹叶、钩藤、蝉蜕、甘草组方制成的中药颗粒剂，具有开胃消滞、清热定惊的功效[1]，为 “小儿七星茶颗粒”[2]人转兽产品，原方收载于《中国药典》用于治疗小儿积滞化热，消化不良，不思饮食。研究表明其用于治疗积滞化热症仔猪的治疗具有可行性，临床应用安全性好。经临床扩大试验，证明在推荐剂量“每公斤饲料加入4.0 g七星茶颗粒，连续用药3天”下可有效防治仔猪积滞化热证。按新兽药注册完成技术评审(药学部分)并取得新兽药证书，质量标准发布于中华人民共和国农业农村部公告第253号。

《中国药典》中“小儿七星茶颗粒”鉴别方法包含山楂、甘草两味药材的薄层鉴别，本实验参考文献方法[2～5]增加了薏苡仁、钩藤的薄层鉴别，优化了山楂、甘草薄层鉴别条件，方法更简便，控制更全面，是产品质量控制方法的有益补充。

1 材 料

1.1 实验仪器及试剂 HZY-A100 电光分析天平(福州华志科学仪器有限公司)；AUW220D双量程电子天平(日本岛津)；2F-2三用紫外仪(上海安亭电子仪器厂)；KQ2200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；甲醇、乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷、石油醚、甲酸、醋酸、冰醋酸、氨水等均为分析纯、试验用水为纯化水；硅胶板自制。

1.2 对照药材 山楂对照药材(批号﹕121626-201402)、甘草对照药材(批号﹕120904-201212)；薏苡仁对照药材(批号﹕12154-2013)、钩藤对照药材(批号﹕121254-201301)均购自中国食品药品检定研究院。

1.3 样品 七星茶颗粒，每1 g相当于原生药3.461 g；河北地邦动物保健科技有限公司中试生产，批号分别为20140609、20140610、20140611。

2 鉴别方法及结果

2.1 山楂的鉴别

2.1.1 供试品溶液制备 取七星茶颗粒7 g，研细，置锥形瓶中，加2%盐酸乙醇溶液20 mL，浸渍30分钟，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5 mL溶解，转移至离心管中，离心，取上清液，挥散至1 mL，作为供试品溶液。

2.1.2 对照药材溶液制备 取山楂对照药材1 g，加2%盐酸乙醇溶液20 mL，超声30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5 mL使溶解，转移至离心管中，离心，取上清液，挥散至1 mL，作为对照药材溶液。

2.1.3 阴性对照溶液制备 取缺山楂的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。

2.1.4 薄层条件及结果 吸取以上三种溶液各6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-三氯甲烷-甲酸(5∶5∶1)为展开剂，展开，展距8～10 cm，取出，晾干，在105 ℃加热15 min，趁热喷以溴酚蓝指示液。日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显两个相同的浅黄色斑点。阴性对照无干扰，结果见图1。

1-山楂对照药材；2-供试品20140609；3-供试品20140610；4-供试品20140611；5-阴性对照

2.1.5 重复性试验 吸取对照品溶液和供试品溶液各6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-三氯甲烷-甲酸(5∶5∶1)为展开剂，展开，三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显两个相同的浅黄色斑点，结果见图2展距8～10 cm，取出，晾干，在105 ℃加热15 min，趁热喷以溴酚蓝指示液。日光下检视。

1-山楂对照药材；2-供试品20140609；3-供试品20140610；4-供试品20140611

2.2 甘草的鉴别

2.2.1 供试品溶液制备 取七星茶颗粒7 g，研细，加水20 mL，温热使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照药材溶液制备 取甘草对照药材0.2 g，加乙醚20 mL，超声处理30 min，滤过，弃去滤液，药渣加甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

2.2.3 阴性对照溶液制备 取缺甘草药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。

2.2.4 薄层条件及结果 吸取以上三种溶液各4 μL，分别点于同一1%氢氧化钠硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶1)为展开剂，展开，展距16～20 cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。三批供试品在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰，结果见图3。

1-甘草对照药材；2-供试品20140609；3-供试品20140610；4-供试品20140611；5-阴性对照

2.2.5 重复性试验 吸取对照品溶液和供试品溶液各4 μL，分别点于同一1%氢氧化钠硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶1)为展开剂，展开，展距16～20 cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。三批供试品在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点，结果见图4。

1-甘草对照药材；2-供试品20140609；3-供试品20140610；4-供试品20140611

2.3 钩藤的鉴别

2.3.1 供试品溶液制备 取七星茶颗粒10 g，研细，加水30 mL，温热使溶解，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取3次，每次25 mL，合并三氯甲烷液，挥干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.3.2 对照药材溶液制备 取钩藤对照药材1 g，加浓氨试液1 mL润湿，加三氯甲烷20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液用3%硫酸溶液振摇提取3次，每次20 mL，合并酸液，用浓氨试液调节pH值至9～10，再用三氯甲烷振摇提取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

2.3.3 阴性对照溶液制备 取缺钩藤药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。

2.3.4 薄层条件及结果 吸取以上三种溶液各15 μL，分别点于同一GF254薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-丙酮(6∶4)为展开剂，展开，展距8～10 cm。取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图5。

1-钩藤对照药材；2-供试品20140609；3-供试品20140610；4-供试品20140611；5-阴性对照

2.3.5 重复性试验 吸取对照品溶液和供试品溶液各15 μL，分别点于同一GF254薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-丙酮(6∶4)为展开剂，展开，展距8～10 cm。取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图6。

1-钩藤对照药材；2-供试品20140609；3-供试品20140610；4-供试品20140611

2.4 薏苡仁的鉴别

2.4.1 供试品溶液制备 取七星茶颗粒5 g，研细，置分液漏斗中，加水20 mL，摇匀，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次15 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.4.2 对照药材溶液制备 取薏苡仁对照药材1 g，加乙酸乙酯30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

2.4.3 阴性对照溶液制备 取缺薏苡仁药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。

2.4.4 薄层条件及结果 吸取以上三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙醚-冰醋酸(83∶17∶0.5)为展开剂，展开，展距8～10 cm，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，在紫外光灯(365 nm)下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图7。

1-薏苡仁对照药材；2-供试品20140609；3-供试品20140610；4-供试品20140611；5-阴性样品

2.1.5 重复性试验 吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙醚-冰醋酸(83∶17∶0.5)为展开剂，展开，展距8～10 cm，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰在紫外灯(365 nm)下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图8。

1-薏苡仁对照药材；2-供试品20140609；3-供试品20140610；4-供试品20140611

3 讨论与结论

七星茶颗粒处方来源于人药《中国药典》中“小儿七星茶颗粒”，是由薏苡仁、稻芽、山楂、淡竹叶、钩藤、蝉蜕、甘草七味药材提取精制制成的中药颗粒剂。《中国药典》 “小儿七星茶颗粒”对山楂和甘草进行了薄层色谱鉴别。

本研究增加了钩藤的薄层鉴别方法。对展开剂进行了优化研究，参照《中国药典》2010增补版“小儿七星茶口服液”方法展开剂为石油醚(60～90 ℃)-三氯甲烷(3∶7)，其中的三氯甲烷有蓄积毒性，对人体危害较大，研究中将其更换为丙酮，调整为石油醚(60～90 ℃)-丙酮(6∶4)，结果显示钩藤对照药材及供试品色谱中各对应斑点分离度好，斑点圆整、无拖尾，达到了满意的分析效果。

研究通过薄层色谱法对山楂、甘草、钩藤、薏苡仁四味药材进行了定性鉴别，结果表明，所拟定的TLC色谱条件，分离效果佳，稳定性和重现性良好，专属性强，阴性无干扰，可用于产品的质量控制。