范冬雨,李可心,赵震宇,贾传文,窦宏强,李长田**
(1.吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心,吉林长春130118;2.吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;3.河西学院厅市共建甘肃省食用菌遗传育种重点实验室,甘肃张掖734000)
玉木耳 [Auricularia cornea(Yumuer)][1]是我国最近驯化栽培成功、稳定性良好且子实体洁白的木耳品种,是毛木耳的一个变种[2]。玉木耳洁白如玉、晶莹剔透,是木耳栽培者追求的最佳品质[3],广受消费者喜爱,李玉院士曾写诗赞叹玉木耳“肤如凝脂肌如雪,吹弹可破润而洁。剔透晶莹瑊玏殿,应是九天梨花谢”[4]。玉木耳营养丰富,含有大量碳水化合物,含粗蛋白7.3%、粗脂肪2.7%、菌类多糖6.56%、不饱和脂肪酸6.22%和可食性膳食纤维35.1%[5]。另外,钙、磷、胡萝卜素、维生素等营养物质含量也很高,更富含赖氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸等多种人体所需的氨基酸,是木耳界名副其实的“白富美”[4]。目前已在吉林、辽宁、山东、浙江、新疆、广西等地栽培成功,是有较大市场潜力的木耳品种[6]。
我国人工林发展迅速,截止到2020年,我国人工林保存面积达6 933万公顷,居世界第一位,在生态功能维护和经济发展中发挥着重要作用。人工林在加工过程中会产生大量的剩余物,是木材采伐后不适于继续加工使用的废弃物,如树皮、木屑等,而传统的废弃物处理方式为焚烧、就地抛弃或掩埋,既造成巨大的资源浪费,又严重破坏环境,若能利用人工林木屑栽培出高品质的食用菌,对保护环境和节约资源均具有重要意义。
由于食用菌在生物链中的地位和具有富集作用的特性,其重金属超标或污染日益受到人们的关注,培养料的选择将影响食用菌产品在生产过程中的重金属含量[7]。目前,关于玉木耳的研究大多集中在栽培基质和栽培技术等方面,而不同培养料对玉木耳营养成分影响和重金属含量的研究较少。基于此,利用木材加工后产生的桉树木屑、杨树木屑和栎树木屑为主培养料栽培玉木耳,比较3种培养料栽培玉木耳后总糖、粗蛋白、粗脂肪和粗纤维等营养成分和重金属铅、镉含量的差异,并与国家标准进行比较,以期为评价3种木屑栽培食用菌的营养价值与质量安全提供参考依据[8],同时为玉木耳的研究与开发提供借鉴。
玉木耳(编号2018091901) 由吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心提供,桉树木屑、杨树木屑、栎树木屑、米糠、豆粕粉、玉米粉、石膏均由吉林省长春市农博园菌菜基地提供。
配方1:桉树木屑80%、米糠15%、豆粕粉2%、米粉2%、石膏1%,pH自然;配方2:杨树木屑80%、米糠15%、豆粕粉2%、玉米粉2%、石膏1%,pH自然;配方3:栎树木屑80%、米糠15%、豆粕粉2%、玉米粉2%、石膏1%;CK:杂木屑80%、米糠15%、豆粕粉2%、玉米粉2%、石膏1%,pH自然[9]。
按照各配方成分准确称取各配方料,分装于直径为90 mm的培养皿中,每个培养皿装料50 g,含水量60%,pH自然,每个配方设定5个重复,于121℃灭菌40 min,冷却至室温后接种,培养皿中央接入直径为5 mm的菌块,置于25℃黑暗培养,采用十字划线法,每隔24 h测量1次菌落半径,并观察菌丝长势,当菌丝生长即将长满平板时结束培养,计算菌丝生长速度,进行差异显著性分析。菌丝生长速度(V,mm·d-1)的计算公式为:
式中:R为菌落半径(mm);T为菌丝生长天数(d)。
1.3.1 制种
使用液体菌种配方:马铃薯300 g、葡萄糖20 g、蛋白胨 2 g、KH2PO42 g、MgSO41 g、VB10.5 g,蒸馏水1 000 mL。1 000 mL三角瓶中装入400 mL液体培养基,121℃灭菌30 min,冷却至室温后接入6块玉木耳菌块(直径为5 mm),后放入150 r·min-1,25℃的恒温震荡培养器中培养7 d左右。
1.3.2 菌包制作
准确称取3种木屑,提前预湿24 h后加入米糠、豆粕粉、玉米粉和石膏混合均匀,含水量60%,使用33 cm×17 cm×0.05 cm的聚丙烯袋进行装袋,每袋装湿料1.25 kg,高压蒸汽灭菌柜121℃灭菌120 min后移入冷却间至室温后每袋接入15 mL液体菌种。
1.3.3 养菌
在养菌前将菇房清理干净,使用二氧化氯消毒剂熏蒸菇房12 h,熏蒸结束后通风,使药品味道散尽。将菌包用塑料筐装好放入养菌架培养。维持室温25℃~28℃,(30±5)d菌丝满袋,及时将污染的菌袋移出菇房。
1.3.4 打孔
菌丝满袋后继续在原条件后熟5 d左右即可打孔,使用木耳专用开口机对菌包打孔,打孔前用75%酒精对开口机消毒,每个菌袋打孔100个小三角孔,孔深8 mm,打孔后将菌袋挂在长2 m、宽0.6 m、高2 m的架子上,每隔0.3 m左右挂1串,每串5包,菌包距地面大于50 cm。
1.3.5 出耳及采收
控制菇房的环境条件,温度20℃~24℃,湿度90%~95%,二氧化碳浓度不高于0.5%,每天450 lx散射光照射12 h[9]。待耳片直径长至3 cm左右即可采收。采收前2 h停止加湿,采收后及时晾干,留取不同配方的干耳片备用。
1.4.1 常规营养成分
分别依据GB/T 15672-2009食用菌中总糖含量的测定、GB/T 5009.6-2016食品安全国家标准食品中脂肪的测定、GB 5009.5-2016食用菌中粗蛋白含量的测定、GB/T 5009.10-2003植物类食品中粗纤维的测定,检测供试菌株干燥子实体中总糖、粗脂肪、粗蛋白、粗纤维的含量。
1.4.2 氨基酸种类和含量
使用高效液相色谱仪测定供试菌株干燥子实体中17种氨基酸含量。
1.4.3 重金属含量
依据 GB 5009.268-2016食品中多元素的测定检测供试菌株干燥子实体中重金属铅、镉的含量。
使用WPS 2019进行数据整理和图形绘制,利用SPSS 24软件进行统计分析。
不同配方对玉木耳菌丝生长的影响见图1。
图1 不同配方的菌丝生长速度Fig.1 Mycelial growth of different formulations
由图1所示,3个配方的菌丝生长速度具有显著性差异(P<0.05),菌丝生长速度大小为配方2>配方3>CK>配方1,配方2的菌丝生长速度最快,为7.50 mm·d-1,高于CK的菌丝生长速度6.85 mm·d-1。配方1的菌丝生长速度最慢,为5.93 mm·d-1,且低于CK。由此可见,80%杨树木屑作主料对玉木耳的菌丝生长具有促进作用。
2.2.1 常规营养成分
4种配方培养料栽培玉木耳的总糖、粗脂肪、粗蛋白和粗纤维测定结果见表1。
表1 不同配方干耳营养成分含量Tab.1 Main nutrient contents of different formulations
由表1可以看出,3种不同的木屑对玉木耳的营养成分含量的影响具有一定的差异性,栎树木屑(配方3) 栽培玉木耳的总糖含量最高,明显高于CK,杨树木屑和CK无明显差异,桉树木屑配方对总糖含量的效果最差。杨树和栎树木屑栽培玉木耳的粗脂肪含量与CK无明显差异,只有桉树木屑栽培玉木耳的粗脂肪含量稍高,说明在促进玉木耳粗脂肪含量方面,3种木屑与传统的杂木屑栽培基质效果相当。在粗蛋白含量方面,杨树木屑栽培玉木耳的粗蛋白含量最高,为73.59%,比CK高1.18%,桉树和栎树木屑栽培玉木耳的粗蛋白含量较低,且均低于CK,说明杨树木屑作为培养基能够栽培出高蛋白质含量的玉木耳。杨树木屑栽培玉木耳的粗纤维含量与CK无明显差异,其中,桉树木屑栽培玉木耳的粗纤维含量最低,仅为29.32%。从以上4种常规营养成分分析结果可以看出,玉木耳主要营养成分除总糖含量外,配方2即杨树木屑作培养料栽培玉木耳时,各项营养成分含量均最高,说明培养料的正确选择对玉木耳干耳片营养价值的具有很大的影响。
2.2.2 氨基酸种类和含量
食用菌中含有多种氨基酸,约占干品重量的0.2%~3.6%[10]。通过高效液相色谱仪对3种培养料栽培的玉木耳干耳片进行氨基酸的检测结果见表2。
由表2可知,共检测出17种氨基酸含量,包括8种必须氨基酸和9种非必须氨基酸。在4个配方中,配方1的谷氨酸和半光氨酸的含量最高,丙氨酸、丝氨酸和精氨酸的酸含量最低;配方2中除了丝氨酸、谷氨酸和半胱氨酸3种氨基酸外,其余14种氨基酸在4个配方中含量均高于其他3个配方,且氨基酸总含量显著高于其他配方,说明杨树木屑对玉木耳的氨基酸含量的增加具有一定的促进作用。配方3除了脯氨酸、丙氨酸、丝氨酸和精氨酸之外,其余10种氨基酸含量在4个配方中均最低,且低于CK,说明栎树木屑不利于玉木耳氨基酸含量的增加。4个配方的氨基酸总含量为配方2>CK>配方1>配方3,其中必须氨基酸总含量为配方2>配方1>CK>配方3,非必须氨基酸总含量为配方2>CK>配方1>配方3,说明杨树木屑代替CK栽培玉木耳能够提高其氨基酸含量。
表2 不同配方干耳氨基酸含量Tab.2 Contents of amino acid of different formulations
根据GB 2762-2017食品安全国家标准食品中污染物限量中的规定,食品中铅的限量为1.0 mg·kg-1,镉的限量为0.5 mg·kg-1[11];根据 NY 749-2012绿色食品食用菌的规定,绿色食用菌的铅限量值为1.0 mg·kg-1,镉的限量为 0.5 mg·kg-1[12]。3 种木屑栽培玉木耳的重金属铅、镉含量的检测结果见表3。
由表3可知,用3种木屑栽培玉木耳的铅、镉含量符合国家食品安全标准,3种培养料栽培玉木耳的铅含量排序为桉树木屑>栎树木屑>CK>杨树木屑,镉含量排序为桉树木屑>杨树木屑>栎树木屑>CK,虽然3种培养料中均检测出铅、镉的存在,但含量均低,都符合国家限量的标准,符合绿色食品(食用菌)的要求。
表3 不同培养料栽培玉木耳的重金属含量比较Tab.3 Comparative analysis on heavy metal content of Auricularia cornea(Yumuer)cultured with different mediums
栽培原料是食用菌栽培过程中的重要部分,原料的正确选择影响着食用菌生产的安全和质量。以目前食用菌传统栽培原料紧缺和废弃木屑污染环境为前提,用木材加工后产生的桉树木屑、杨树木屑和栎树木屑为主栽培料,传统杂木屑培养料为对照,分析栽培玉木耳的总糖、粗脂肪、粗蛋白、粗纤维和氨基酸营养成分的差异。结果表明,不同木屑培养料栽培玉木耳的营养成分存在明显差异,杨树木屑栽培玉木耳时,除了总糖含量略低于栎树木屑,粗脂肪、粗蛋白和粗纤维含量在4个配方中均最高,氨基酸总含量、必需氨基酸总含量和非必需氨基酸总含量均显著高于其他配方,说明杨树木屑对促进玉木耳的营养品质方面效果最佳;栎树木屑栽培玉木耳除了总糖含量高于杨树木屑,粗脂肪、粗蛋白和粗纤维含量均低于杨树木屑,高于桉树木屑,与CK配方存在明显差异,氨基酸含量在4个配方中最低;桉树木屑栽培玉木耳的总糖粗脂肪、粗蛋白和粗纤维含量显著低于其他配方,但氨基酸含量高于配方3,可能的原因是桉树木屑的成分以木质素为主,本身氮含量不高[13],全氮含量仅为0.143%[14],且材质疏松,营养不足[15]。
随着人们对健康和食品安全问题的日益重视,在使用废弃木屑作为基质原料栽培食用菌时,除对其利用的可行性进行研究外,还需注意其栽培食用菌的安全问题。栽培原料的来源是引起重金属污染的重要因素之一,以桉树木屑、杨树木屑和栎树木屑栽培玉木耳,其干耳片含有的铅、镉含量均未超出绿色食品食用菌的规定,符合食用菌中污染物限量的标准,说明3种木屑作为基质原料栽培的玉木耳安全可食用。
通过利用3种木屑为基质原料栽培玉木耳,并对其营养成分和重金属铅、镉含量的分析表明,不同木屑对营养成分和重金属含量影响不同,需要以实际生产目的为前提,选择合理的栽培原料,并有针对性地改善栽培食用菌的营养品质,生产出符合实际需要且质量安全的食用菌产品。