中药白芷的活性成分欧前胡素对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

曾丹，范燕燕，袁建晖，汪利群

（江西省妇幼保健院，江西 南昌 330006）

卵巢癌是发生于卵巢的恶性肿瘤疾病，早期无明显特征，不易发现，且卵巢位于盆腔中，体积较小，难以发现，若不及时给予治疗，大多数癌细胞会扩散至盆腹腔器官[1]。而临床治疗主要以手术综合治疗为主，但缺乏有效的治疗药物，且治疗后复发率较高，预后较差，具有较高的病死率，是临床常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌，且以上皮癌最常见，其次是恶性生殖细胞肿瘤，严重威胁女性生命安全[2]。癌症治疗常用药物生长抑素是一种环状多肽类激素，对多种疾病的发展、防治有重要意义，而奥曲肽为生长抑素八肽衍生物，其作用与生长抑素相似，但持续时间更长，主要作用肝癌、胃癌等病症的辅助治疗[3]。本研究采用MTT技术检测欧前胡素对卵巢癌细胞株增殖的影响；采用流式细胞技术检测有效浓度范围的奥曲肽对卵巢癌细胞株凋亡的影响，对中药白芷的活性成分欧前胡素对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019 年1 月至2020 年4 月本院实验室保存的卵巢癌细胞60 例，样本来源均为女性，年龄35～72岁，平均年龄（42.65±3.22）岁，分为实验组和对照组，各30例。实验组根据不同浓度欧前胡素的干预下细胞的增殖及凋亡机制，设置浓度为1.560 mg/L（实验1 组）、3.125 mg/L（实验 2 组）、6.250 mg/L（实验 3 组）、12.550 mg/L（实验 4组）、25.250 mg/L（实验 5 组）、40.500 mg/L（实验 6 组），对照组为空白对照组。

1.2 方法 MTT 法检测细胞增殖：于96 孔板中接种卵巢癌细胞，培养箱中培养，各组分别加入不同浓度的欧前胡素干预（1.560、3.125、6.250、12.550、25.250、40.500 mg/L），并设置空白对照孔。保持温度37 ℃，在体积分数为5%的CO2环境中培养24 h 后，每孔经20 μL MTT 液培养，4 h 后去液，加入二甲基亚砜每孔150 μL，平板离心机10 min。以酶标仪测定490mm波长的吸光度（OD）值，记录相关数据。增殖抑制率=（对照组平均OD 值-实验组平均OD 值）/对照组平均OD值×100%。

流式细胞仪检测细胞凋亡：于6孔板中接种细胞，不同浓度欧前胡素干预24 h后，用0.25%胰酶消化细胞5 min，1 500 rmp离心 3 min 左右，经 PBS 洗涤 3 次，收集细胞于 1.5 mL EP 管中 ，3 500 rpm 离心 5 min 左右 ，加入 200 μL 的 PBS 悬浮细胞。在涡旋震荡时观察组滴加70%乙醇，共1 mL，震荡摇匀后保持于 4 ℃，3 500 rmp 离心 5 min，洗涤 2 次，之后上流式分析仪检测，1、2、3 h 内检测细胞凋亡情况，取平均值，记录相关数据。

1.3 观察指标 观察欧前胡素对卵巢癌细胞的增殖抑制效果及欧前胡素对卵巢癌细胞凋亡效果。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，符合正态分布的计量资料用“”表示，比较采用t检验；计数资料采用率（%）表示，比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 欧前胡素对卵巢癌细胞的增殖抑制效果 MTT检测结果显示，欧前胡素对卵巢癌细胞增殖的作用与剂量相关，且随欧前胡素浓度升高，对卵巢癌细胞增殖抑制效果也随之升高，见表1。

表1 欧前胡素对卵巢癌细胞的增殖抑制效果

2.2 欧前胡素对卵巢癌细胞凋亡效果 流式细胞仪检测结果显示，不同浓度欧前胡素对卵巢癌细胞处理24 h后凋亡比率高于对照组，且随着欧前胡素浓度的增加卵巢癌细胞凋亡率随之升高，见表2。

表2 欧前胡素对卵巢癌细胞凋亡效果

3 讨论

卵巢恶性肿瘤是临床常见的女性生殖器官的恶性肿瘤之一，其发病机制尚不明确，但可能与患者遗传、内分泌等因素有关，其病症分为卵巢上皮癌和卵巢恶性生殖细胞肿瘤，前者最常见，常表现为腹痛、消瘦，后者于早期出现腹部包块、腹胀等[4]。且卵巢恶性肿瘤发生率仅次于宫颈癌与宫体癌，具有较高的病死率，位于各类妇科肿瘤首位，严重威胁女性患者的生命安全。临床常给予患者化疗、手术、药物于一体的综合治疗，但尚未有显著的治疗措施。而近年来随着临床恶性肿瘤的发病率升高，积极寻求抗癌肿瘤活性成分药物至关重要[5]。欧前胡素具有明显是抗肿瘤作用，可诱导肿瘤细胞死亡，继而引起下游凋亡基因级联反应，效果显著。中药白芷中的主要成分为脂溶性香豆素类，主要有氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素，同时，还有白当归素、白当归脑等，各类有效成分对各类病症均有显著作用，如佛手柑内酯、水合氧化前胡素和白当归素被证实具有抗炎镇痛作用；呋喃香豆素被证实有清除氧化自由基的功效；独活醇对枯草杆菌，阿魏酸和白当归素对腊叶芽枝酶有明显的抗菌作用，临床应用效果显著。而欧前胡素，具有抗菌、平喘、抗敏等作用，在多种内分泌、外分泌激素的分泌中有重要作用，可通过靶细胞膜上的生长抑素受体介导，其中亚型2 的作用最重要，且可通过生长抑素受体抑制肿瘤细胞增殖，从而诱导细胞凋亡[6]。而欧前胡素极性小，不溶于水，易溶于极性小的有机溶剂，具有多种生理活性，可作用于患者垂体腺瘤、肝癌等病症，效果显著[7]。

近年来，随临床医学发展，发现肿瘤的发生与发展受多基因调控，与肿瘤细胞的凋亡有密切关系，随着临床对欧前胡素的研究，发现其对肿瘤细胞的凋亡有重要作用[8]。而凋亡细胞的数目的变化与DNA 电泳可在一定范围内反映细胞的凋亡情况。本研究结果显示，欧前胡素对卵巢癌细胞增殖抑制效果显著，可促使癌细胞凋亡，且欧前胡素浓度越高，药物机制作用越显著，同时，还可诱导患者癌细胞凋亡，其浓度与凋亡率成正相关，而欧前胡素对亚型2 有极强的亲和力，是治疗患者癌症的有效治疗药物，可使患者肿瘤明显缩小，抑制肿瘤细胞生长，诱导细胞凋亡。因此，采用该药物治疗，对患者癌细胞控制效果显著。

综上所述，中药白芷的活性成分欧前胡素可有效遏制卵巢癌肿瘤细胞的增殖，并诱导癌细胞凋亡，可针对患者癌细胞进行调控，效果显著，值得临床推广应用。但临床相似研究证明较少，未来应加大临床研究力度，进一步明确中药白芷的活性成分欧前胡素对卵巢癌肿瘤细胞的增殖与凋亡的影响，为临床治疗提供可靠依据。