胃腺癌组织PTEN 表达及病理意义

阮正英 范广民 蔡小波 曹学全 陈崇阳

10 号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）是迄今首个被发现的具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，目前被认为是评价肿瘤预后的重要生物学行为指标[1]，PTEN 的突变或缺失与消化道、前列腺、脑组织等多种肿瘤的增殖、存活、基因稳定性、侵袭和转移等密切相关[2-3]。PTEN 作用机制的研究，对肿瘤的诊断、预后评估及基因治疗有着重大意义，成为目前的研究热点之一[4]。研究发现，PTEN 去甲基化和再表达，可抑制胃癌细胞生长和转移[5]。因此，以PTEN 为靶点可能是今后治疗胃癌的新方法。本研究通过观察胃癌组织PTEN 的表达，分析其与胃癌生物学的关系，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集浙江省台州市中西医结合医院和台州市中心医院2013 年1 月—2018 年12 月收治的胃腺癌患者（胃癌组）80 例。其中伴有淋巴结转移38 例，TNM 分期为Ⅰ～Ⅱ及Ⅲ～Ⅳ各40 例，浆膜层及浆膜内浸润44 例，浆膜外浸润36 例，高-中分化41 例，低分化39 例，合并有幽门螺旋杆菌（HP）感染45 例。取同期慢性胃炎组织（对照组）80 例。本研究获得台州市中西医结合医院医学伦理委员会批准（伦理批件号：2015-007），并取得患者知情同意。

1.2 纳入、排除标准 胃癌组纳入标准：（1）符合《食管癌和胃癌治疗指南》中胃癌诊断标准[6]，均行手术治疗，并在术后经病理确诊为胃腺癌；（2）术前均未接受放疗或化疗；（3）所有标本来自医院组织库，临床资料全面。

对照组纳入标准：（1）符合慢性胃炎的诊断标准[7]，病理表现为萎缩性胃炎伴（或不伴）肠化，不包括病理表现为异型增生（上皮内瘤变）；（2）胃镜检查前均未接受糖皮质激素、免疫抑制剂、放疗或化疗。

排除标准：（1）有其他系统恶性肿瘤，如食管癌、肝癌等；（2）有严重的自身免疫性疾病，如甲状腺功能亢进、糖尿病等；（3）术前用过免疫抑制剂。

1.3 主要试剂 兔抗人PTEN IgG 抗体购自英国biorbyt 公司（生产批号GR168302-1），二抗即用型DAB 染色免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司（生产批号19021910）。免疫组化SP 法测定PTEN 的表达（工作浓度为1：100）。

1.4 免疫组化法测定PTEN 表达 SP 两步法染色测定PTEN 的表达，胃组织石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O2灭活内原性过氧化物酶，微波抗原，滴加PTEN 抗体，4℃冰箱过夜，室温滴加二抗，二甲基联苯胺（DAB）显色，苏木素复染。

1.5 PTEN 阳性结果判定标准[8]阳性细胞呈棕黄色表达，在200 倍光镜下随机选择5 个视野观察细胞着色情况，计数阳性例数及阳性率。阳性细胞数＜5%为阴性（-），≥5%为阳性（+），阳性率=阳性例数/总例数×100%。并对阳性细胞进行灰度扫描，采用免疫组化图像分析系统，得出细胞染色的阳性强度，计算光密度（OD）值。

1.6 统计学方法 应用SPSS 16.0 统计软件，计量资料以均数±标准差（）表示，两组间比较采用成组资料t 检验，计数资料以例（率）表示，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 胃癌组男47 例，女33 例，年龄41～78（62.76±8.02）岁。对照组男42 例，女38例，年龄45～76（62.85±7.55）岁。两组患者性别、年龄比较，差异无统计学意义（P 均＞0.05）。

2.2 PTEN 在胃组织表达水平 免疫组化结果显示，阳性细胞多见表达于细胞的胞核中，少量表达于胞浆中。胃癌组PTEN 阳性率和阳性表达强度显著低于对照组（P 均＜0.01），见表1、图1。

表1 胃腺癌和慢性胃炎组织PTEN 表达水平比较

图1 免疫组化法检测胃组织PTEN 的表达（DAB 染色×200）

2.3 胃腺癌组织PTEN 表达水平与临床病理特征的关系 胃癌组PTEN 阳性率和阳性表达强度在低分化、伴有淋巴结转移的胃腺癌组织均分别显著低于高-中分化、不伴有淋巴结转移的胃腺癌组织（P＜0.05 或＜0.01）；浆膜外浸润胃癌组织PTEN 的阳性表达强度显著低于浆膜层及浆膜内浸润（P＜0.01），两组阳性率表达差异无统计学意义（P＞0.05）；TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ组胃癌组织的PTEN 阳性率显著低于TNM 分期为Ⅰ～Ⅱ组（P＜0.05），两组阳性表达强度差异无统计学意义（P＞0.05）；不同性别、年龄胃腺癌组织PTEN 阳性率和阳性表达强度比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 胃癌组织PTEN 表达水平与临床病理特征的关系

2.4 HP 感染胃癌组PTEN 表达水平 HP 阳性感染胃癌组PTEN 阳性率及阳性表达强度低于HP 阴性感染胃癌组（P＜0.05 或P＜0.01），见表3。

3 讨论

PTEN 是1997 年分离鉴定的一种新颖的抑癌基因，基因位于染色体10q23.3，全长200kb，具有与酪氨酸磷酸酯酶相似的功能，在肿瘤的发生、发展中起重要作用。与抑癌功能相关的结构域主要是氨基端的磷酸酶结构域、脂质结合c2 结构域和羧基端结构域，部分机制可能是通过PI3K/PTEN/Akt/mTOR 信号通路，参与胃癌细胞增殖、凋亡、血管生成、侵袭与转移等过程[9]。过表达转录因子EYA1 可促进胃癌细胞株SGC-7901 PTEN 的表达、抑制PI3K/Akt 通路的激活，抑制细胞胃癌细胞株的增殖、迁移和侵袭能力，抑制细胞凋亡[10]。通过改变miR-590-5p 的表达水平可以上调或下调PTEN 的表达，从而提高胃腺癌细胞对顺铂的敏感性，起到治疗胃癌的作用[11]。

表3 HP 感染胃腺癌组织PTEN 表达水平

本研究发现，阳性细胞多见表达于细胞的胞核中，少量表达于细胞的胞浆中。提示PTEN 可通过细胞质及细胞核部位发挥其病理生理功能[12]。研究还发现，胃癌组织PTEN 的表达强度低于慢性胃炎组织，提示可能由于PTEN 的表达下降，其抑癌作用减弱，降低了对癌细胞生长的抑制作用，从而间接促进癌细胞的生长[13]。

本研究分析了PTEN 与胃癌患者性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移、浸润程度、TNM 分期的相关性，结果显示，在低分化的胃癌组织中PTEN 的表达强度低于高-中分化的胃癌组织，提示随着胃癌细胞的分化程度降低PTEN 的表达水平也随之降低；同时也发现，在伴有淋巴结转移的胃癌组织PTEN表达强度也降低，提示PTEN 与不良预后有关，与杨铭等[14]研究相似。本研究结果还显示，有浆膜外浸润时PTEN 的阳性表达强度降低，而在TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ时PTEN 的阳性率下降。表明在有浆膜外浸润或TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ时，PTEN 呈现低表达，提示随着疾病生物学恶性程度增加，PTEN 水平下降，其抑癌作用下降。但也有研究认为，PTEN 表达水平与胃癌分化程度和浸润深度无关，而与脏器转移相关[15]，支持PTEN 与肿瘤的不良预后有关。本研究发现，HP感染胃癌组织PTEN 表达水平低于无HP 感染组，表明HP 感染后可能与PTEN 的表达水平降低有关，推测HP 感染诱发胃癌发生可能部分通过降低PTEN抑癌的机制[16]。年龄≥60 岁与＜60 岁胃癌患者PTEN表达水平无差异，男性与女性PTEN 表达水平也无差异，提示胃癌患者PTEN 表达水平不受患者性别、年龄影响，与庹敏和童仕伦[17]研究结果相似。

综上所述，胃腺癌组织PTEN 表达降低，与胃癌组织低分化、伴淋巴结转移、浆膜外浸润、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期及HP 感染阳性等生物学特性有关，预示胃癌不良预后。