高效液相色谱法同时测定党参中3 种指标性成分含量*

陈 娟，陈瑞明，孟 雪，杨智峰，王 娣，鲁文静，蒙麦侠，张 红

（陕西省中医药研究院，陕西 西安 710061）

党参为桔梗科植物党参Codonopsispilosula（Franch.）Nannf.、素花党参Codonopsis pilosula Nannf.var. modesta（Nannf.）L.T.Shen 或川党参Codonopsis tangshen Oliv.的干燥根，具有补中益气、健脾益肺功效［1］。现代药理学研究表明，党参可调节血糖及胃肠功能，提高造血机能，抗溃疡，抗炎，抗疲劳，抗肿瘤，延缓衰老，增强机体免疫功能［2-5］。其主要化学成分为甾醇类、多糖类、苷类、萜类、生物碱类等［6-7］。2015年版《中国药典（一部）》仅收载了党参的显微和薄层鉴定方法，未收载指标性成分含量测定项。党参炔苷为党参的指标性成分，对乙醇所致胃黏膜损伤有很好保护作用，与党参补中益气功效相符，是党参保护胃黏膜的活性成分［8］。杨静等［9］比较了不同产地党参中苍术内酯Ⅲ和党参炔苷的成分，发现苍术内酯Ⅲ可代表潞党参的道地性，具有抗炎、调节胃肠道、促进营养物质吸收的作用［10］，与党参的药理作用有相关性，可作为指标性成分。胡春阳等［11］以党参炔苷和紫丁香苷为指标性成分评价和鉴定纹党与白条党，发现紫丁香苷具有抗疲劳、抗脑缺血、增强适应性等功效［12］，也可作为指标性成分。为了进一步提升党参临床用药的有效性和安全性，本研究中拟采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定党参中紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯Ⅲ3 种成分的含量，为其质量评价提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260 型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KH -300D 型数控超声波清洗机（昆山禾创超声仪器有限公司，功率为300 W，频率为40 kHz）；BT25S 型电子天平（精度为十万分之一），BS210S 型电子天平（精度为万分之一），均购自赛多利斯科学仪器＜北京＞有限公司。

1.2 试药

紫丁香苷对照品（批号为CHB180530，纯度≥98%），党参炔苷对照品（批号为CHB180122，纯度≥98%），苍术内酯Ⅲ对照品（批号为CHB180224，纯度≥98%），均购自成都克洛玛生物科技有限公司；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。党参药材（批号分别为202000301，202000302，202000303）采收自陕西省宜君县，经陕西省中医药研究院杨智峰研究员鉴定均为党参Codonopsis pilosula Franch. 的干燥根。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相:乙腈（A）-0.1% 磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0 ～20 min 时10%A，20 ～30 min 时10%A→30%A，30 ～50 min 时30%A→70%A）；检测波长:220 nm；柱温:30 ℃；流速:0.8 mL/min；进样量:10 μL。紫丁香苷、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ的分离度均不低于1.5，理论板数按紫丁香苷峰计均不低于5 000。

2.2 溶液制备

混合对照品溶液:精密称取各对照品适量，加甲醇制成含紫丁香苷0.670 mg/mL、党参炔苷0.231 mg/mL、苍术内酯Ⅲ0.108 mg/mL 的对照品贮备溶液。精密吸取上述对照品贮备溶液各1 mL，置10 mL 容量瓶中，加入75%甲醇溶解，定容，摇匀，即得。

供试品溶液:取党参样品粉末（过40 目筛）1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理45 min，放冷，再称定质量，用75%甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别吸取2.2 项下混合对照品溶液和供试品溶液各10 μL，按2.1 项下色谱条件进样测定。结果供试品溶液色谱中，在与混合对照品溶液色谱紫丁香苷、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ相应位置上有相应色谱峰，且与其他杂质峰分离良好。色谱图见图1。

1. 紫丁香苷 2. 党参炔苷 3. 苍术内酯ⅢA. 混合对照品溶液 B. 供试品溶液图1 高效液相色谱图1.syringin 2.lobetyolin 3. atractylenolide ⅢA.Mixed reference solution B. Test solutionFig.1 HPLC chromatograms

线性关系考察:分别精密吸取对照品贮备溶液0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，置10 mL 容量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，按2.1 项下色谱条件进样10 μL，以溶液质量浓度（X，μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。结果见表1。

表1 各成分线性关系考察结果（n ＝6）Tab.1 The linear relationship of each component（n ＝6）

精密度试验:精密吸取2.2 项下同一混合对照品溶液10 μL，按2.1 项下色谱条件重复进样6 次。结果紫丁香苷、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ峰面积的RSD 分别为0.40%，0.54%，0.08%（n ＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批（批号为202000301）样品6 份，精密称定，依法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样分析。结果紫丁香苷、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ含量的RSD 分别为0.24%，0.16%，0.15%（n ＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，10，12 h 时按2.1 项色谱条件下进样10 μL。结果紫丁香苷、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ峰面积的RSD 分别为0.42%，0.45%，1.44%（n ＝7），表明供试品溶液在12 h 内稳定。

加样回收试验:取各已知成分的党参样品（批号为202000301）0.5 g，精密称定，共6 份，依法制备供试品溶液，分别精密加入各对照品适量，按2.1 项下色谱条件进样测定，并计算紫丁香苷、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ的加样回收率。结果见表2。

表2 各成分加样回收试验结果（n ＝6）Tab.2 Results of recovery tests of each component（n ＝6）

2.4 样品含量测定

取不同批次（批号分别为202000301，202000302，202000303）党参样品各1.0 g，精密称定，依法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算含量。结果见表3。

表3 样品含量测定结果（mg/g，n ＝3）Tab.3 Results of content determination of samples（mg/g，n ＝3）

3 讨论

3.1 检测波长选择

采用紫外检测器在200 ～400 nm 波长范围内对党参3 种指标性成分进行扫描，结果紫丁香苷在220，265 nm 波长处有最大吸收，党参炔苷在220，232，267，283 nm 波长处有最大吸收，苍术内酯Ⅲ在220 nm 波长处有最大吸收。胡涛［13］在不同生长年限与采收期川党参中主要成分含量的比较研究中发现，紫丁香苷、党参苷Ⅰ和党参炔苷的最大吸收峰为267 nm；杨静等［9］研究不同产地党参苍术内酯Ⅲ和党参炔苷含量时发现，苍术内酯Ⅲ在220 nm 波长处有最大吸收，均与本研究结果一致。本研究中，紫丁香苷和党参炔苷在267 nm 波长处也有最大吸收峰，但苍术内酯Ⅲ在267 nm 波长处的吸收峰远小于220 nm 波长处，故选择220 nm 为检测波长。

3.2 流动相选择

考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液等流动相系统，以党参3 个指标性成分的分离度、峰形、基线的平稳情况进行综合考察，结果以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱时色谱峰的基线平稳、峰形好和分离度均好，能满足检测要求。

3.3 提取溶剂和提取方法选择

考察了超声提取和回流提取2 种方法，提取效果差异不明显，故选择便于操作的超声提取法。考察了甲醇和乙醇及不同体积分数的甲醇和乙醇的提取效果，结果75%甲醇提取效果最佳。考察了30，45，60 min 时的提取效果，结果超声提取45 min 的效果最佳。

3.4 方法评价

本研究中建立的同时测定党参中3 种指标性成分的HPLC 法，分离效果和重复性均良好，回收率高，能全面评价党参药材的质量，可为党参的质量控制提供参考。