甲状腺癌组织中CXC趋化因子受体4表达意义及对老年分化型甲状腺癌预后的预测价值

游庆华，叶慧英，王佳，徐冬香

1.上海市浦东医院病理科，上海201399；2.上海市浦东医院内分泌科，上海201399

甲状腺癌是头颈部最常见的恶性肿瘤，居恶性肿瘤发病率的第六位[1]。相关研究表明[2-3]，我国甲状腺癌发病率约为7.56/10 万，是增长最快的恶性肿瘤之一，其主要包括分化型、未分化型等，其中分化型甲状腺癌预后相对较好，但仍有部分患者预后较差。目前临床中尚缺乏针对老年分化型甲状腺癌（differentiated thyroid carcinoma，DTC）简单高效的预测预后的生物标志物。趋化因子受体是调节肿瘤细胞分泌的重要因子，并参与肿瘤血管生成及免疫相关细胞的调控。相关研究表明[4-6]，CXC 趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4，CXCR4）与乳腺癌、胃癌等多种恶性肿瘤的预后密切相关。分化型甲状腺癌患者预后较好，但老年患者由于年龄较大、手术耐受性较低，与中青年患者相比，预后相对较差。CXCR4能够对老年DTC 患者预后进行有效预测尚不可知，鉴于此，本研究通过对老年DTC 患者CXCR4 甲状腺癌组织及配对癌旁组织表达进行比较，并对比分析预后及存活老年DTC 患者的临床资料，探讨甲状腺癌组织中CXCR4 mRNA 相对表达量的意义，以及该指标对老年DTC 患者预后预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2017年3月-2019年3月上海市浦东医院收治的60 例老年DTC患者的临床资料，其中男性13 例、女性47 例，年龄61～78 岁，平均年龄（70.0±6.8）岁，临床分期：Ⅰ期10 例、Ⅱ期22 例、Ⅲ期24 例、Ⅳ期4 例，分化程度：高分化19例、中分化28 例、低分化13 例，病理类型：乳头状癌48 例、滤泡状癌12 例；病变部位：右侧叶39 例、左侧叶21 例。

纳入标准：（1）符合甲状腺癌诊断标准[7]，并经组织活检或手术病理确诊者；（2）年龄>60 岁；（3）均进行甲状腺全切手术治疗；（4）患者对本研究知情同意并签字。符合以上全部标准的患者纳入本研究。排除标准：（1）伴有其它恶性肿瘤者；（2）合并甲状腺功能亢进、结节性甲状腺肿等其它甲状腺良性疾病者；（3）术前行放化疗或其它治疗者；（4）合并严重心脑血管、造血系统等疾病者。具有上述任1 标准的患者不纳入本研究。本研究经医院伦理委员会批准同意。

1.2 观察指标与方法

1.2.1 甲状腺癌组织及癌旁组织CXCR4 mRNA 相对表达量采用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）[8]测定CXCR4 mRNA 相对表达量：收集患者在根治术治疗中切除的甲状腺癌组织及配对癌旁组织，利用Trizol提取试剂盒（北京天漠科技开发有限公司）提取组织总RNA，使用紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司，型号：UV-1800）检测其纯度及浓度，反转录合成cDNA，CXCR4 及内参-actin 序列：CXCR4上游引物为：5'-ATCATGCATTCGACTTGAACG-3'，下游引物为5'-GACCTACAAGCTAGGCATGCA-3'； -actin 上游引物为：5'-GCAATACGTTCGATCGGACT-3'；下游引物为5'-GCCCATGGACTTCCGAATTC-3'。反应体系为20L，每样品3 个重复，反应程序：95℃预变性3 min，95℃变性10 s、60 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，36 个循环，72℃再延伸5 min，在实时荧光定量PCR 仪（苏州雅睿生物技术有限公司，型号：MA-6000）上进行反应，以-actin 作为内参按照2-Ct 算法分析CXCR4 相对表达量。

1.2.2 患者临床资料统计和患者临床病理特征 主要包括性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、分化程度、病理类型、淋巴结转移、多病灶、甲状腺球蛋白、促甲状腺素及CXCR4 mRNA 相对表达量水平。

1.2.3 预后情况资料 术后随访18 个月，通过电话、门诊等方式进行随访，随访日期截止2020年9月，将发生远处转移及死亡均记为预后不良，其中远处转移判定标准依据甲状腺癌肿瘤、淋巴结、远处转移分期标准[9]，并结合影像学检查及病理结果进行综合判断。统计老年DTC 患者预后不良发生情况，并依据预后情况分为预后不良组和预后良好组。收集并归纳可能影响老年DTC 患者预后的相关因素并将其作为自变量（X），进行赋值，将预后情况作为因变量（Y），预后不良记为1，预后良好记为0，分析影响老年DTC患者预后的影响因素。

1.3 统计学分析 使用SPSS20.0 统计软件进行统计分析。以均数±标准差（±s）表示计量资料，经正态性检验与方差齐性检验后，正态分布且方差齐性的计量资料，2 组间比较行独立样本 检验，组内比较用配对样本 检验；偏态分布的资料采取秩和检验。采用Logistic回归分析探讨影响老年DTC患者预后的相关因素。绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC），以曲线下面积（Area under curve，AUC）评价CXCR4 对老年DTC 患者预后不良的预测价值。＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 甲状腺癌组织及癌旁组织CXCR4 mRNA 相对表达量 甲状腺癌组织CXCR4 mRNA 相对表达量水平显著高于癌旁组织（＜0.05）。见表1。

2.2 老年DTC 患者预后不良发生情况 随访18 个月，60 例老年DTC 患者中有8 例发生预后不良（其中双肺转移4 例、腹部转移2 例，全身多处转移1 例，死亡1 例），预后不良发生率为13.33%。

表1 甲状腺癌组织及癌旁组织CXCR4 mRNA 相对表达量（±s）

表1 甲状腺癌组织及癌旁组织CXCR4 mRNA 相对表达量（±s）

组织 CXCR4癌旁组织（ =60）甲状腺癌组织（ =60）images/BZ_128_259_799_284_823.png0.49±0.07 0.88±0.13 20.460＜0.001

2.3 预后不良组和预后良好组老年DTC患者临床资料比较 预后不良组临床分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移构成比及甲状腺球蛋白、促甲状腺素与CXCR4 mRNA 相对表达量显著高于预后良好组（＜0.05）。见表2。

2.4 影响老年DTC 患者预后因素的多因素Logistic 回归分析 以临床分期、分化程度、淋巴结转移、甲状腺球蛋白、促甲状腺素、CXCR4 mRNA 相对表达量为自变量进行Logistic 回归分析，多因素分析结果显示甲状腺球蛋白和CXCR4 是影响老年DTC 患者预后的影响因素（＜0.05）。见表3 和表4。

表2 预后不良组和预后良好组老年DTC 患者临床资料比较

表3 自变量赋值

表4 影响老年DTC 患者预后因素的多因素Logistic 回归分析

2.5 CXCR4 对老年DTC 患者预后的预测价值 ROC分析显示，CXCR4 评估老年DTC 患者预后的最佳截断点为1.05，灵敏度为75.00%，特异度为88.46%，AUC 值为0.815。见图1 和表5。

图1 CXCR4 ROC 图

3 讨论

甲状腺癌是近年来发病率增长最快的恶性肿瘤之一，且其死亡率在我国呈逐年上升的趋势[10]。目前主要通过手术切除病变组织、清扫颈部淋巴结等方法进行治疗，但其术后复发率仍高达10%左右[11]。DTC相比其它甲状腺癌类型预后较好，但仍有部分患者预后较差，尚缺乏对其进行预测的生物学标志物。有研究表明[12]，CXCR4 与恶性肿瘤的发生发展，以及患者的预后密切相关。探讨甲状腺癌组织中CXCR4 mRNA 相对表达量的意义，以及对老年DTC 患者预后预测价值具有十分重要的意义，可用于指导老年DTC 患者的治疗。

本研究结果显示，甲状腺癌组织CXCR4 mRNA相对表达量水平明显高于癌旁组织，提示老年甲状腺癌组织中CXCR4 水平呈高表达。CXCR4 是癌细胞中重要的趋化因子受体之一，相关研究表明[13]，CXCR4水平在甲状腺癌组织中表达水平偏高，与本研究结果相符，进一步证实甲状腺癌组织CXCR4 mRNA 相对表达量水平异常偏高。Mahkamova K 等[14]研究也表明，CXCR4 在甲状腺癌细胞中呈高表达，且在未分化、存在淋巴结转移的甲状腺癌患者中表达更高。本研究中，老年DTC 患者预后不良发生率为13.33%，既往有研究报道[15]，DTC 患者预后不良发生率为2.12%，本研究结果与其研究结果相比，发生率偏高，可能与本研究所选入组病例为非连续患者，及研究对象患者，年龄、基本病情等因素偏差较大有关。本研究结果表明，预后不良组临床分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移构成比及甲状腺球蛋白、促甲状腺素、CXCR4 mRNA相对表达量水平明显高于预后良好组，并经Logistic 多因素回归分析表明，甲状腺球蛋白、CXCR4 均为影响老年DTC 患者预后的影响因素，在临床中需引起医护人员的注意，加强调节、防控，以降低老年DTC 患者预后不良的发生率。相关研究表明[16]，CXCR4 在甲状腺癌细胞的迁移中发挥着重要作用，与患者病情进展及预后密切相关。任浩棠等人[17]研究表明，CXCR4 在甲状腺癌患者中呈高表达，且CXCR4 表达水平与预后密切相关，本研究与其共同之处在于与均证实CXCR4 高表达为甲状腺癌患者预后不良的影响因素，不同之处在于所选择的研究对象及所研究的侧重点不同，本研究对象为老年DTC 患者，侧重研究CXCR4 对该类患者预后的预测价值，更具有针对性。ROC 分析显示，CXCR4 评估老年DTC 患者预后不良的最佳截断点为1.05，灵敏度为75.00%，特异度为88.46%，AUC 值为0.815，提示CXCR4 预测老年DTC 患者预后的评估效能较高，可作为早期预测预后不良的评估指标。

表5 CXCR4 对老年DTC 患者预后预测的ROC 分析

综上所述，CXCR4 在老年DTC 患者甲状腺癌组织中呈高表达，其在对老年DTC 患者预后方面的评估效能较高，可能对老年DTC 患者预后的预测工作起到帮助。本研究的不足之处在于所选样本容量较小，还需联合多家医院医疗机构，扩大样本容量，进行深入研究。