化痰解郁汤对CUMS 抑郁症模型大鼠HPA 轴的影响

李 庆，张 慧，冯卫星，杨东东

（1.陕西中医药大学附属医院，陕西 咸阳 712000；2.成都中医药大学附属医院，成都 610072）

抑郁症又称之为抑郁障碍（depressive disease，DD），是临床中常见的心理疾病，为多因素致病，主要表现为持久而显著的心境低落[1]。大部分患者表现为低落的情绪与其处环境不相符，终日闷闷不乐，心情低落消极，中重度患者可有悲痛欲绝，自卑自闭，部分患者有自杀的想法和行动；部分患者同时合并有焦虑和冲动等异常行为；严重的抑郁障碍患者会出现视听幻觉以及被害妄想等精神症状。因其高发病率、高复发率、高疾病负担及高自杀率而备受关注[2]。我国每年因抑郁障碍产生的经济担负高达数百亿元人民币。目前，我国因精神障碍类疾病和自杀导致的疾病负担已经占到疾病总负担的第一位[3]。

近年来，中医药治疗抑郁症的疗效与机制研究取得了可喜的成就[4]。化痰解郁汤是杨东东教授治疗痰热郁结型郁证的经验方[5-6]，具有清热化痰，行气解郁的作用。本实验采用目前学术界公认的CUMS 抑郁症模型大鼠，从ACTH and CORT 进一步探究化痰解郁汤治疗抑郁症的可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料 从成都达硕实验动物养殖有限公司购买成年健康SD 大鼠40 只，体质量（190±20）g。许可证号：SCXK（川）2013.24，合格证书号：0015979。化痰解郁汤(药物购买于成都中医药大学附属医院中药房)由黄连3 g，夜交藤、酸枣仁各20 g，陈皮、茯苓、积实、竹茹、白芍、石菖蒲、柏子仁各15 g，生甘草5 g 组成。熬制浓缩为中药药液，放置在4 ℃冰箱中储存。盐酸氟西汀胶囊（百优解）由PatheOn France 生产，批号：J20130010。大鼠CORT、ACTH 酶联免疫分析ELISA 试剂盒，上海广锐生物科技有限公司，批号分别为20151023、2015021。

1.2 实验方法

1.2.1 分组及造模 大鼠适应性饲养1 周后，5%苦味酸溶液标记，采用SPSS 19.0 将40 只大鼠随机分为:A对照组、B模型组、C盐酸氟西汀组、D化痰解郁汤组。根据有关文献[7]报道的CUMS 方法造模。对照组正常饲养，其他各组均接受长达21 d 的慢性不可预见温和刺激。第1 周：前3 d 每天游泳20 min，后3 d 每天游泳40 min；第2 周：接受包括足底部电击（40 V 电压，每次10 s，每间隔50 s 刺激1 次，电击30 次）、热应激（45 ℃，15 min）、夹尾（距大鼠尾根1 cm 处，止血钳持续1 min）、冰水游泳（4 ℃，5 min）等环境刺激；第3 周：通过禁饮、禁食、拥挤、灯光的明暗交替（黑暗1 h，照明1 h，进行12 h）、昼夜颠倒等刺激组成的慢性中等不可预见的温和刺激，直至造模结束。

1.2.2 药物干预 对照组可自由进食、摄水，避免刺激；模型组予以氯化钠注射液（0.9%）3 mL/d；化痰解郁汤组及氟西汀组予以16 g/（kg·d）；各组分别给予生理盐水或相应药物16 g/（kg·d），连续灌胃21 d。根据《药理实验方法学》[8]中的公式计算大鼠给药剂量，人与大鼠的有效剂量换算系数为6.3，人的标准体质量按60 kg 计算。化痰解郁汤（生药）：成人每日用药剂量：153 g÷60 kg=2.55 g/kg，大鼠每日用药剂量＝2.55 g/kg×6.3 ≈16 g/kg。

1.2.3 体质量称量 药物干预期实验第4 周、第5 周、第6 周用电子称称取大鼠的体质量。

1.2.4 行为学观察 旷箱试验（Open-f ieldTest）：实验大鼠分别放入体积为800 mm×800 mm×400 mm 的旷箱内，且旷箱四周均为黑色不能透光，旷箱底面用白色线条区分为25 个160 mm×160 mm 的正方形。将各组每只实验大鼠分别置于旷箱正中央格子后开始测定，以大鼠3 min 总共穿越箱底部方块的数量作为水平运动得分，活动时出现的前脚抬离箱底站立的次数作为垂直活动得分，每只大鼠测评完毕后将大鼠排泄物清理干净并除味后，方可再进行下一只的测评，实验过程录像。蔗糖溶液（1 %）消耗量：实验前各组大鼠均禁食禁饮24 h，给予蔗糖溶液（1 %）自由摄取1 h 后撤去，大鼠1 h 饮用1 %蔗糖溶液的量为计算前后水瓶的重量的差值得到。最后计算大鼠饮入1 %蔗糖溶液的量为：消耗1 %蔗糖溶液的量（mg）/动物体质量（g）。

1.2.5 血清 ACTH 及 CORT 含量测定 在实验第42天，大鼠股动脉留取血液5 mL，置于含有10 %EDTA.NA230 μL和抑肽酶40 μL的试管中，设置离心机为4 ℃，转速设定为3 000 r/min，共离心10 min，分离出血浆，储存在-20 ℃冰箱中，使用Elisa 试剂盒，根据说明书按步骤操作以测定标本中ACTH 和CORT 的含量。

2 结果

2.1 大鼠体质量变化 见表1。

2.2 大鼠行为学变化 旷场试验（Open-f ieldTest ）见表2、表3。

表1 各组大鼠干预阶段体质量的比较（） g

表1 各组大鼠干预阶段体质量的比较（） g

注：与对照组的比较，# P ＜0.05；与模型组的比较，△P ＜0.05

表2 各组大鼠干预阶段水平活动比较（） 次/3 min

表2 各组大鼠干预阶段水平活动比较（） 次/3 min

注：与对照组比较，# P ＜0.05；与模型组比较，△P ＜0.05

表3 各组大鼠干预阶段垂直活动比较（） 次/3 min

表3 各组大鼠干预阶段垂直活动比较（） 次/3 min

注：与对照组比较，# P ＜0.05；与模型组比较，△P ＜0.05

2.3 蔗糖水消耗量 见表4。

表4 各组大鼠干预阶段糖水消耗量比较（） mg/g

表4 各组大鼠干预阶段糖水消耗量比较（） mg/g

注：与对照组比较，# P ＜0.05；与模型组比较，△P ＜0.05

2.4 各组大鼠血清ACTH、CORT 含量变化 见表5。

表5 各组大鼠血清ACTH、CORT 的比较（） ng/L

表5 各组大鼠血清ACTH、CORT 的比较（） ng/L

注：与对照组比较，# P ＜0.05；与模型组比较，△P ＜0.05

3 讨论

抑郁症模型大鼠大约20 余种，根据不同的建模方法，可将其分为应激化模型、孤养和隔离动物模型、基因敲除改造动物模型、神经生化功能转化模型等[9]。在这些不同方法中与临床抑郁症患者病因相比较相似的是应激抑郁模型。20 世纪90 年代Willner[10]在Katz[11-12]提出的慢性不可预见性的应激模型（CUS）基础上发展了CUMS 抑郁症模型，其对造模方案的优化主要体现在明显降低了应激因子的强度，减少了造模过程大鼠的死亡率。其在模型的评价上以大鼠快感缺乏与否作为标准。CUMS 抑郁症模型建造需要花费较多的时间，工作繁琐，给研究者带来较大的压力[13]。但因为该抑郁症模型能更好的模拟人类在抑郁中的快感缺失等核心症状，同时能够很好的模拟重型抑郁障碍患者的社会交际能力下降、探索行为能力减少、性功能障碍等临床表现。通过代谢组学、大鼠海马形态学及神经元糖皮质激素受体的表达也已证实[14-16]CUMS抑郁模型较其他抑郁大鼠模型具有更好的成效，造模成功后大鼠所表现出的抑郁症状可持续数月之久，符合抑郁模型的要求，可以作为研究抑郁障碍的理想动物模型，同样此模型被国内外文献广泛采用[17]。

中医典籍中没有抑郁症病名的明确记载，根据抑郁症临床症状判断，与中医情志疾病“郁证 ”相似。总结归纳本病病因为脏腑功能失调[18]，与先天禀赋，饮食不节，生活创伤等相关，主要病机可归纳为气机郁滞，情志不畅。脾胃归属于中焦，升清依赖于脾，降浊则主要为胃所主，二者共主气机之升降。气机失司，可进一步导致了肝之疏泄功能障碍，脾不能运化水谷，化生精血，心失所养，脏腑功能失去平衡。病位在肝，但与脾、胃、心、肾等脏器密切关联，五脏皆参与情绪的调节[19]。郁证初起病理属性多为实，病久则可见虚或虚实兼夹。郁证初始，主要为气机郁滞，但常兼瘀邪，易化火夹杂痰及食滞等，即属实证。病久则可由实转虚，治疗上实证当以疏肝解郁，健脾清热，化痰解郁，行气安神为法。化痰解郁汤可清热化痰，行气安神。

抑郁症的发生发展中，神经递质释放异常、氧化应激反应和炎症[20-21]及脑神经元突触结构与功能障碍均参与其中[22]。近年来关于脑源性神经生长因子（BDNF）能同时调控多条与抑郁症发生相关的信号通路[23]也得到了高度重视。同时抑郁症与认知功能障碍相关，有学者就其内在机制做了探究[24]。有研究证实[25]在抑郁症患者的血浆中皮质醇水平较正常人群增高明显，反应出抑郁症患者的HPA 轴功能亢奋。本研究中通过对大鼠 HPA 轴激素水平变化的探究，发现模型组较对照组血清中ACTH、CORT 含量显著增高，证实了抑郁症模型大鼠存在HPA 轴功能亢进。在与模型组比较中，化痰解郁汤组大鼠血清中 ACTH、CORT含量显著降低。这也可以说明，化痰解郁汤可能通过矫正功能亢进的HPA 轴发挥其抗抑郁疗效。对于郁证应做到未病先防，已发早治，防止传变，采取情志疏导、针药结合等方法综合治疗，预防病情反复发作，迁延不愈[26-27]。中医药对于疾病的治疗具有多途径、多部位、多靶点的作用。化痰解郁汤能治疗抑郁症除能纠正HPA 轴亢进外，是否还存在其他干预机制，尚需进一步研究。