黑果腺肋花楸组培快繁体系研究

彭琳

（山西潞安石圪节智华生物科技有限公司，山西长治 046204）

黑果腺肋花楸（Aronia melanocarpa Elliot）是一种多年生落叶花灌木，属于蔷薇科腺肋花楸属[1]，原产自美国的东北部，欧洲已经对其引种栽培100 年，20 世纪90 年代引入我国[2]。黑果腺肋花楸的果实中含有丰富的营养物质，例如花色苷、多酚类物质、黄酮类化合物等，对心脑血管疾病和糖尿病都具有良好的疗效[3]。因为其具有很好的发展前景，因此国内有很多学者致力于研究黑果腺肋花楸的组培快繁技术、栽培管理技术和果实果酒发酵技术，为其推广种植的推行及生产加工做出铺垫[4-6]。

1 实验材料与方法

1.1 实验材料来源

本实验的材料取自潞安石圪节智华生物科技有限公司温室中，外植体为黑果腺肋花楸的幼嫩茎段。

1.2 实验方法

1.2.1 外植体处理

将带有顶芽和腋芽的幼嫩枝条去掉叶片留下叶柄，将枝条剪切为每两个腋芽为一截，外植体的灭菌处理方式为在超净工作台中先用75%酒精处理30s，无菌水冲洗一遍，20%NaClO 消毒20min，消毒过程中每隔5min 摇晃一次消毒容器，之后无菌水冲洗4～5 次待接种。

1.2.2 快繁过程

在初代培养基中培养7d、14d、21d 后将新生长出来的幼嫩枝条剪下来转入增殖培养基中培养30d，之后转入生根培养基中培养30d 后进行炼苗。

培养温度25℃，每天光照16h，光强2000lx。

1.2.3 培养基制作

（1）初代培养基：MS 培养基。

（2）增殖培养基：MS 培养基+6-BA，6-BA 浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L。

（3）生根培养基：1/2MS 培养基+2.0mg/L 6-BA+NAA，NAA 的浓度分别为0.03mg/L、0.04mg/L、0.05mg/L、0.06mg/L。

1.2.4 炼苗及移栽

将生根瓶苗放在大棚中，在大棚中一周后拧松瓶盖，2d 后将瓶盖反盖，其间瓶中培养基干裂的话适量在瓶内加些水，2d 后打开瓶盖后将小苗从瓶中拿出清洗，在500～800 倍多菌灵中将根部浸10min，移栽入大棚中的不同基质中，移栽前将基质用0.1%的高锰酸钾溶液进行喷淋消毒。

不同基质：珍珠岩:沙:蛭石=1:1:1，珍珠岩:沙:珍珠岩=1:1:1，珍珠岩:沙:草炭土=1:1:1。每种基质中种植300 株，种植初期将大棚覆盖遮阳网，对植株进行适量的喷雾，增加大棚内的湿度。

1.3 数据统计及分析方法

在继代培养30d 统计继代增殖系数，驯化后的组培生根苗移栽进入不同基质中，两个月后统计成活率。

继代增殖系数=增殖周期结束时株数/接种株数

成活率=成活株数/移植株数×100%

2 结果与分析

2.1 不同初代培养时间对组培苗分化的影响

将外植体接种在初代培养基中，分别在7d、14d、21d 后将新生长出来的幼嫩枝条剪下来转入增殖培养基中，实验发现如表1，7d后接种的幼嫩枝条细嫩，继代培养中继代增殖系数为8.4；14d 接种后幼嫩枝条株株高、茎粗和继代增殖系数都明显高于7d 后进行继代培养的；初代培养21d 的枝条已经出现木质化，表皮呈棕色，部分枝条末端已经有须根长出，后期继代培养中增殖能力明显下降，仅为3.5。因此，初代培养14d 是最适宜的继代转接时间，具体数据见表1。

2.2 不同浓度6-BA 对对组培苗分化的影响

将初代培养14d 后新长出来的枝条剪下接种进入含有不同浓度6-BA 的MS 培养基中，当6-BA 浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L，组培苗的继代增殖系数分别为6.9、9.2、12.9、16.1、13.4。当6-BA 浓度在2.0mg/L 范围内，随着6-BA 浓度的升高，组培苗的继代增殖系数越来越高，分化出的植株颜色随着浓度升高由浅绿变为嫩绿；当浓度升到2.5mg/L，组培苗的继代增殖系数反而下降，颜色也成为深绿，说明6-BA 浓度过高不利于组培苗的分化。因此，在分化过程中，2.0mg/L 是MS培养基中6-BA 的最适浓度。

表1 不同初代培养时间对组培苗继代增殖系数的影响

2.3 不同浓度NAA 对组培苗生根的影响

继代培养5 次之后，组培苗的分化能力下降，将组培苗接种进入含有不同浓度NAA 和2.0mg/L 6-BA 的1/2MS 培养基中。NAA 浓度为0.3mg/L 时，组培苗的生根率为89.1%；当NAA 浓度为0.4mg/L、0.5mg/L、0.6mg/L 时，组培苗的生根率都可以达到100%，但是NAA 浓度为0.5mg/L 时，生根条数最多且须根数量多，有利于后期的驯化移栽。因此1/2MS 培养基+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA 是最适宜的生根培养基。

图1 组培苗的继代培养

图2 培养两周后组培苗的生根情况

2.4 不同基质对成活率的影响

生根培养30d 后，株高6～12cm，驯化后的生根组培苗会有少数弱苗不能适应外界环境而死亡。将驯化后的组培苗移入不同基质中生长两个月后发现：移植进入1 号基质（珍珠岩:沙=1:1）的植株成活率只有42.3%，其成活率明显小于2 号基质（珍珠岩:沙:蛭石=1:1:1）和3 号基质（珍珠岩:沙:草炭土=1:1:1）。2 号基质和3 号基质中植株的成活率分别为83.4%和84.1%，两种基质中的植株成活率接近，但是3 号基质植株成活率略高于2 号基质。因此珍珠岩:沙:草炭土=1:1:1 是最适宜的种植基质。

3 结论

对黑果腺肋花楸进行组培快速繁殖，可以大批量生产黑果腺肋花楸植株，还可以大大缩短生产时间。实验证明，初代培养时间会影响后期外植体的分化能力，初代培养14d 进行继代培养是最佳的。不同的生长素浓度对影响组培苗的分化和生根，实验证明，MS 培养基+2.0mg/L 6-BA 是最佳的增殖培养基，而1/2MS 培养基+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA 是最佳的生根培养基。组培生根苗驯化后移植的基质对组培苗的成活率有很大的影响，草炭土和蛭石都可以为植株提供营养，提高其成活率，但是珍珠岩:沙:草炭土=1:1:1 基质中的植株成活率达到84.1%，是驯化后生根组培苗的最佳移植基质。

图3 炼苗驯化后的组培生根苗

图4 在基质中生长的黑果腺肋花楸

在本实验中发现在组培生根苗驯化过程中，一些较弱的茎叶细小的植株不能适应周围环境，叶片会干黄，植株很快死亡，其死亡率为7.2%。如果批量生产，也将是不小的损失，这是本实验遇到的瓶颈，有待解决。

目前，本公司已种植黑果腺肋花楸1000 余亩，单株产量可达30 斤，并已研发出黑果腺肋花楸原浆和干红推向市场。