灵芝杂交育种优势亲本筛选试验

李希政 白中文 朱 琳 夏宏志

（吉林省生物研究所，吉林长春130012）

灵芝是我国从古至今常用的中药材，在我国已有两千多年的药用历史，被视为能治百病的“仙草”[1]。吉林省长白山区的红灵芝誉满海内外[2]。自20世纪90年代开始，灵芝棚栽技术发展迅速。虽然灵芝栽培技术不断进步，但栽培菌株较杂[3]，并随着转代次数的增加，使用时间过长，出现了老化、退化、抗杂能力弱等问题[4]。杂交育种是新菌株选育的重要手段，而杂交亲本性状优选试验是杂交选育的关键。

1 材料与方法

1.1 供试灵芝菌株

试验灵芝菌株共计10个，均来自长白山菌株资源库，其中包括采集的野生灵芝（编号为CJ12）（表1）。所有菌株均通过分离、提纯、复壮，恢复至其最好性状。试验过程均采用菌龄相同的菌株且保证菌种管无污染。

1.2 供试培养基（料）配方

（1）母种培养基：马铃薯200 g，五维葡萄糖20 g，琼脂25 g，磷酸二氢钾3.5 g，硫酸镁1.5 g，蛋白胨 5 g，加水 1 000 mL，pH 自然。（2）原种培养料：杂木屑78%，麸皮15%，玉米粉5%，稻壳粉1%，石膏1%。（3）栽培灵芝木段：栽培木段选用新鲜枝条（经济林可砍伐硬木），将其截成同一长度段，捆成直径25 cm、高22 cm 的圆木段状，外包聚丙烯膜，常压灭菌12 h后备用。

表1 供试灵芝亲本菌株名称及来源

1.3 试验方法

1.3.1 母种菌丝比较试验

母种培养基按配方制作后装入试管，灭菌后，将其摆成长度为7 cm的斜面。每一菌株10支试管，每支试管接种0.5 cm2菌块。培养条件为27 ℃恒温。培养24 h 后观察各试管中菌丝的萌发情况和生长状态。当菌丝进入快速生长阶段时，每两天测一次长度，取平均值。同时，观察菌丝色泽、长势等，记录满管时间。

1.3.2 原种菌丝生长比较试验

将原种培养料按配方称好，先拌主料，再加辅料，主料、辅料混匀后，加水拌匀，控制料含水量为65%。将料装入750 mL 玻璃瓶中压实，然后封口、灭菌。每一菌株10 瓶。接入2 cm 长菌种块后，27 ℃恒温暗培养，培养至菌丝封盖时，划线记录生长线。当菌丝长至距离瓶底2 cm 时，划终止线（总长度为10 cm），记录菌丝生长时间，计算菌丝平均生长速度。观察菌丝色泽和长势，记录菌丝满瓶时间。

1.3.3 出芝培养和生育期比较试验

将原种转接至1.2 制备的木段中，每瓶原种接6段，每段接种量一致。每个菌株3次重复，每次重复20段，共计60段。每段木段干重2.4 kg。

记录木段中菌种萌发时间、菌丝封顶及长满木段时间。

木段长满菌丝后，移至阴凉干燥处后熟10～15 d（需覆膜防尘），然后移入棚覆土，同一天覆土、喷水。出芝管理条件同常规。

记录子实体现蕾时间、子实体形态、菌盖颜色，统计产量，按照常规方法计算生物学效率，并用新复极差法进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 供试灵芝菌株菌丝生长情况

供试灵芝菌株菌丝生长情况见表2。

由表2可知，供试灵芝菌株的母种菌丝、原种菌丝生长速度有差异，菌丝的色泽和长势也存在差异。SW6、SW9、CJ12菌株菌丝色泽好，萌发能力强，生长势好，母种菌丝平均长速分别为1.000 cm/d、1.000 cm/d、1.167 cm/d，原种菌丝平均长速分别为0.284 cm/d、0.309 cm/d、0.356 cm/d，其中 CJ12 菌株菌丝生长最快。

接种后，SW6、SW9、CJ12 菌株母种 6～7 d 均可长满试管，其原种 30～32 d 长满瓶。SW11、SW1、SW5、SW4、SW2 菌株菌丝生长速度、颜色、长势、萌发能力较SW6、SW9、CJ12菌株稍差，但比SW8、SW7表现好。SW8、SW7 菌株表现最差，生长速度最慢，萌发最晚，长势最弱，其母种经过11 d 才长满试管，原种48～49 d才长满瓶。

表2 供试灵芝菌株母种、原种菌丝生长对比

2.2 供试灵芝菌株生育期

由表 3 可知，供试 10 个灵芝菌株中，SW7、SW8菌株萌发能力最弱，接入木段后第3天才萌发菌丝，其他菌株均在接种后第2 天萌发。在木段上，菌丝生长最快的是CJ12 菌株，接种7 d 菌丝封面，37.3 d后菌丝长满木段；SW9、SW6 菌株菌丝生长很快，接种 7 d 封面，38.7～39.3 d 后菌丝长满木段；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株菌丝生长速度较快，接种8～9 d 后菌丝封面，42～43.7 d 均能长满木段；SW8、SW7菌株菌丝生长速度最慢。

CJ12、SW9、SW6菌株生育期为114～115 d，三者间差异不显著，与其他菌株呈显著差异；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株生育期为 122～123 d，相互之间生育期无显著差异，与其他菌株呈显著差异；SW7、SW8菌株生育期为131、133 d，两者间无显著差异，但与其他菌株呈显著差异。从出现原基开始，CJ12 菌株菌丝吸收木段营养最快，仅用36 d 灵芝子实体就已经成熟并弹射孢子；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株子实体成熟时间仅次于CJ12菌株；SW7、SW8 菌株子实体成熟最晚，因此管理投入人力物力也最多。

表3 供试灵芝菌株生育期比较

2.3 供试灵芝菌株产量

图1 部分试验灵芝菌株子实体

由表 4 可知，CJ12、SW9、SW6 菌株平均产量较高，与其他菌株达显著性差异；其次是SW11、SW5、SW1、SW4、SW2菌株，产量和生物学效率表现次之；最差的是SW7、SW8两个菌株。

2.4 供试灵芝菌株生物性状比较

供试灵芝菌株的生物性状见表4、表5。

试验发现CJ12、SW9、SW6菌株原基长势强，原基粗壮，菌柄较短或中等，原基至子实体成熟天数为36.0～36.7 d，时间较短，菌丝抗杂能力强，子实体褐色，外形各异，产量高。SW11菌株的生物性状表现次之，再后是SW4、SW1、SW2、SW5菌株，生物性状表现较好，原基长势较强，菌柄朵形有差异，原基至子实体成熟天数为39.3～40.0 d，产量一般。生物性状最差的是SW7、SW8菌株，产量低，抗杂能力最弱，原基至子实体成熟天数最长，原基长势最弱，子实体外形一般。

表4 供试灵芝菌株平均产量

表5 供试灵芝菌株的生物性状比较

3 小结

菌丝培养试验结果表明，CJ12、SW9、SW6 菌株表现较优，其母种、原种、木段培养的菌丝生长表现较佳。出芝试验结果，CJ12、SW9、SW6 菌株表现较优，生育期适中，产量较高，子实体性状较好，可以作为灵芝新品种杂交的亲本材料。