鸡菌菌丝体固体培养基配方的优化

张明星 李 洁 张玄妮 李欢欢 谢 娟 徐学锋

（华南农业大学食品学院，广东广州 510642）

1 材料与方法

1.1 试验材料

（2）培养基原材料与仪器

培养基原材料：牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、麦芽浸提物、可溶性淀粉，广东环凯微生物科技有限公司生产；硝酸铵、磷酸二氢钾和硫酸镁，广东光华化学厂有限公司生产；葡萄糖、硫酸铜、氢氧化钠、氯化钾，天津福晨化学试剂厂生产；麦芽糖、乳糖、蔗糖，天津福宇精细化工有限公司生产；颗粒直径为0.075 mm的膨化豆粕，益海（连云港）粮油工业有限公司生产；颗粒直径为0.075 mm的小麦麸皮，益海嘉里（郑州）食品工业有限公司生产。

仪器：HVE-50型全自动高压灭菌锅，日本Hi⁃rayama公司；雷磁pHs-25型数显pH计，上海伟业仪器厂；SW-CJ-1F超净工作台，江苏苏州安泰空气技术有限公司；TG-16W台式高速离心机，长沙湘智离心机仪器有限公司；FSH-2A可调高速均质机，常州市国旺仪器制造有限公司；101AS-3电热鼓风干燥箱，上海浦东跃东欣科学仪器厂；LRH-250A型生化培养箱，广东省医疗器械厂；SPH-2102C立式恒温培养振荡器，上海四平试验设备有限公司。

（3）供试培养基及制备方法

基础培养基：200.0 g土豆熬汁过滤后加葡萄糖20.0 g，琼脂20.0 g，蒸馏水定容至1 L，自然pH。

改良PD（Potato Dextrose）培养基：于1 L的PD培养基中加入硫酸镁1.0 g，磷酸二氢钾1.0 g，自然pH。改良PDA培养基：于改良PD培养基中加入琼脂20.0 g。

图1 鸡菌的生长特性（鸡菌菌丝的镜检观察均在40倍物镜下）

1.2 试验方法

1.2.1 单因素试验

培养温度试验：向改良PDA平板（直径9 mm）培养基接入直径2 mm鸡菌菌丝块，于22℃、25℃、28℃、31℃、34℃暗培养。观察不同培养温度鸡菌菌丝生长情况。每个处理设3个重复。

初始pH试验：以改良PDA平板培养基为pH试验的基础培养基，用1%NaOH和1%HCl调节培养基pH为4、5、6、7、8、9。其他操作同温度试验，培养温度28℃。观察不同pH条件下的鸡菌菌丝生长情况。每个处理设3个重复。

氮源试验：以20 g葡萄糖，20 g琼脂为基础分别加入供试氮源。氮源添加量（g/L）分别为酵母浸膏3.0、蛋白胨3.0、硝酸铵3.0、牛肉膏3.0、膨化豆粕5.0、麦芽浸汁2.0。其他操作同温度试验，培养温度28℃。观察不同氮源对鸡菌菌丝生长的影响。每个处理设3个重复。

碳源试验：以20 g琼脂为基础分别加入质量浓度为2 g/L的供试碳源。碳源分别为葡萄糖、乳糖、麸皮、淀粉、蔗糖，麦芽糖。其他操作同温度试验，培养温度28℃。观察不同碳源对鸡菌菌丝生长的影响。每个处理设3个重复。

矿物质试验：向基础培养基PDA中分别加入 硫 酸 镁 0、0.5 g/L、1.0 g/L、1.5 g/L、2.0 g/L、2.5 g/L、3.0 g/L、3.5 g/L；磷 酸 二 氢 钾0、0.5 g/L、1.0 g/L、1.5 g/L、2.0 g/L、2.5 g/L、3.0 g/L、3.5 g/L；硫酸铜 0、0.015 g/L、0.030 g/L、0.045 g/L、0.060 g/L、0.075 g/L（硫酸铜溶液要单独灭菌后加入）。其他操作同温度试验，培养温度28℃。每个处理设3个重复。

1.2.2 最优组合筛选

从接种第5天开始采用十字交叉法测量菌丝生长量，每隔5 d测一次，计算菌丝生长速度，连续测量30 d。计算菌丝平均生长速度，并观察记录菌丝长势。

1.3 数据分析

试验数据采用新复极差法对各试验处理进行差异显著性检验。

2 结果与分析

2.1 培养温度对鸡菌菌丝生长的影响

表1 培养温度对鸡菌菌丝生长的影响

表1 培养温度对鸡菌菌丝生长的影响

注：数据为三次重复平均值。相同字母表示差异不显著（P＞0.05）。下同。

菌丝平均长速/（mm·d-1）1.09 1.24 1.37 1.23 0.00菌丝长势菌丝稀菌丝较密菌丝较密较稀不长温度/℃22 25 28 31 34差异显著性b c d c a

2.2 p H对鸡菌菌丝生长的影响

表2 初始p H对鸡菌菌丝生长的影响

表2 初始p H对鸡菌菌丝生长的影响

pH 4 5 6 7 8 9菌丝平均长速/（mm·d-1）1.31 1.21 1.20 1.17 1.14 1.07差异显著性b ab ab ab ab a菌丝长势菌丝较密菌丝稀较稀较稀较稀较稀

2.3 硫酸镁对鸡菌菌丝生长的影响

2.4 磷酸二氢钾对鸡菌菌丝生长的影响

表3 硫酸镁对鸡菌菌丝生长的影响

表3 硫酸镁对鸡菌菌丝生长的影响

硫酸镁/（g·L-1）0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5菌丝平均长速/（mm·d-1）1.11 1.09 1.23 1.26 1.38 1.52 1.24 1.09差异显著性a a b b c d b a菌丝长势较稀菌丝稀菌丝稀较稀菌丝稀菌丝稀菌丝较密较稀

表4 磷酸二氢钾对鸡菌菌丝生长的影响

表4 磷酸二氢钾对鸡菌菌丝生长的影响

磷酸二氢钾/（g·L-1）0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5菌丝平均长速/（mm·d-1）1.14 1.22 1.23 1.26 1.29 1.36 1.34 1.37差异显著性a ab ab ab ab b b b菌丝长势较稀菌丝稀菌丝较密菌丝稀菌丝茂密菌丝较密菌丝较密菌丝较密

2.5 硫酸铜对鸡菌菌丝生长的影响

表5 硫酸铜对鸡菌菌丝生长的影响

表5 硫酸铜对鸡菌菌丝生长的影响

硫酸铜/（g·L-1）0 0.015 0.030 0.045 0.060 0.075菌丝平均长速/（mm·d-1）1.23 1.06 0.96 0.90 0.82 0.85差异显著性c b a b a a a菌丝长势菌丝较密菌丝稀菌丝稀较稀较稀较稀

2.6 供试碳源对鸡菌菌丝生长的影响

表6 供试碳源对鸡菌菌丝生长的影响

表6 供试碳源对鸡菌菌丝生长的影响

碳源乳糖麸皮蔗糖麦芽糖葡萄糖淀粉菌丝平均长速/（mm·d-1）0.33 0.70 1.23 1.42 1.24 1.66差异显著性a b c d c e菌丝长势向上堆积较稀菌丝稀菌丝较密菌丝较密菌丝较密

2.7 供试氮源对鸡菌菌丝生长的影响

表7 供试氮源对鸡菌菌丝生长的影响

表7 供试氮源对鸡菌菌丝生长的影响

氮源硝酸铵蛋白胨牛肉膏酵母浸膏麦芽浸汁膨化豆粕菌丝平均长速/（mm·d-1）1.08 1.33 1.24 1.46 1.22 1.18差异显著性a cd bc d bc ab菌丝长势较稀菌丝较密菌丝较密菌丝茂密菌丝稀菌丝较密

2.8 组合试验结果

3 小结

真菌菌丝的生长速度受到培养方式及培养基质的影响，借鉴前人的研究方法对鸡菌菌丝固体培养基进行优化。优化后的培养基培养鸡菌菌丝，菌丝平均长速达1.41 mm/d。笔者在试验过程中发现，鸡菌菌株活性受保存温度及培养基影响较大，因此对该菌种保藏要额外注意，保存方法可参考马涛等[13]的研究结果。

表8 鸡菌菌丝生长的固体基质最优组合

表8 鸡菌菌丝生长的固体基质最优组合

试验号1 2 3 4 5 6 7 8 9氮源酵母膏酵母膏酵母膏蛋白胨蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏牛肉膏碳源淀粉麦芽糖葡萄糖淀粉麦芽糖葡萄糖淀粉麦芽糖葡萄糖硫酸镁/（g·L-1）2.0 2.5 3.0 2.5 3.0 2.0 3.0 2.0 2.5菌丝平均长速/（mm·d-1）1.13b 1.31 bcd 1.28 bcd 0.86 a 1.18 bc 1.41 d 1.14 b 1.24 bcd 1.38 cd