一株袋栽食用菌的形态和分子鉴定

丛倩倩 孔 怡 安秀荣

（泰安市农业科学研究院，山东泰安 271000）

传统的食用菌分类和鉴定方法主要是基于子实体的形态特征和微观结构。但是这种分类和鉴定方法在鉴定一些较为相似的种时会比较困难，甚至会出现一些错误，同时也阻碍了科学研究的进程和食用菌的进一步开发利用[1]。

笔者在进行灵芝产业调研时，发现了一株袋栽食用菌，其子实体无明显菌柄，菌盖乳白色、扇形，近基部有不明显的瘤状突起，当地称之为“白灵芝”。为了明确该“白灵芝”的种属，采取分子生物学结合形态学方法，对其分类地位进行初步鉴定，以便为其进一步的开发利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料

样品采自于山东省聊城市冠县芝艺缘灵芝专业合作社，为大棚墙式立体栽培的子实体。

1.2 试验方法

1.2.1 子实体的形态鉴定

肉眼观察该菌株的子实体形态，分别用解剖镜、显微镜观察菌管的形状和孢子的形态，然后参照卯晓岚［2］的方法初步分类鉴定。

1.2.2 ITS分子鉴定

子实体组织分离培养长出菌丝后，挑取尖端菌丝置空白PDA培养基上继续培养。重复以上操作3次后即可得到纯培养物（菌丝），保存于4℃冰箱备用。

首先用真菌DNA提取试剂盒（天根生化科技有限公司）提取菌丝DNA，然后用真菌通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增，PCR反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火45 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃后延伸10 min。在凝胶成像系统中观察经琼脂糖凝胶电泳后的PCR产物，选择600~700 bp的条带进行切胶回收，回收产物送上海生工生物工程有限公司测序，测序结果输入Gen⁃Bank数据库进行BLAST比对分析，查找与其同源性最高的序列。

2 结果与分析

2.1 形态学鉴定结果

该菌株子实体中等或大，白色、乳白色或浅灰白色。菌盖（10~18）cm×（8~10）cm，厚1~2 cm，半圆形、扇形或贝形，木栓质，无菌柄，表面有微细绒毛渐变光滑，有小瘤状凸起，边缘钝圆、波状或瓣裂，菌肉白色（图1）。菌管蜂窝状、圆形，每毫米约3个（图2）；孢子无色、光滑，宽椭圆形，（4.5~5）μm×（2.5~3.0）μm（图3）。

查阅文献并从其形态学特征，初步鉴定该菌株为多孔菌科栓孔菌属的乳白栓孔菌。

2.2 ITS序列分析

该菌株的ITS核酸序列见图4，PCR扩增产物长度共611 bp。将测序获得的ITS序列输入GenBank核酸数据库进行BLAST比对，发现该菌株与登录号为MT611189.1的Leiotrametes lactinea同源性为99.84%。综合形态特征和分子生物学鉴定结果，确定该袋栽菌株为乳白栓孔菌（Leiotrameteslactinea）。

图2 菌管的形态

图3 孢子

图4 ITS区域核苷酸序列

3 小结与讨论

食用菌生长易受外界环境条件、分布地域等因素的影响，同一菌株在不同的地区会表现出形态的多样性。笔者分离纯化该乳白栓孔菌菌株后进行栽培，结果发现该菌株形态特征发生了明显的变化，菌盖表面有明显的瘤状凸起和不明显的棱纹，边缘瓣裂，菌肉白色（图5）。此外，即使是不同菌株，有些也拥有相似的形态学和显微学特征。因此单纯依靠形态学特征对菌株进行鉴定和分类往往会出现一定的偏差。

图5 栽培的乳白栓孔菌的子实体形态

“白灵芝”又名“玉芝”，对心血管疾病有特效，具有祛风除湿、止血、化痰、抗癌、提高免疫力及滋补强身等功效。研究从形态学和分子生物学对一株被称之为“白灵芝”的袋栽菌株进行分类鉴定，最终将其鉴定为乳白栓孔菌（Leiotrameteslactinea），还该菌株本来面目，纠正了对该菌株的错误命名。

目前，国内外对乳白栓孔菌的研究较少[3]，研究为进一步开发该菌株奠定了基础。