CYP2B6基因多态性与成年人急性髓系白血病易感性的相关性

陈宗云，叶晓艺，王若涛，郭建峰

福建医科大学附属闽东医院:1.检验科;2.肾内科，福建宁德 355000

急性髓系白血病(AML)是成年人最常见的急性白血病类型，是急性白血病中发病最多且患者生存率最低的异质性疾病[1-2]。有研究显示，AML在全球范围的发病率为1.62/10万，我国AML的发病率呈上升趋势[3]。AML发病机制目前还不清楚，可能的原因是环境暴露和遗传易感性之间的相互作用。参与药物吸收、分布、代谢、排泄(ADME)的基因存在显著的个体及地域差异，与许多疾病的易感性有关[4]。大多数ADME基因属于细胞色素P450(CYP450)家族，编码最重要的代谢同工酶，这些同工酶负责大多数异生物质的生物转化。CYP2B6是CYP450家族中重要的药物代谢酶，CYP2B6的基因多态性导致对毒性物质处理的个体差异可能是白血病易感性的影响因素之一[5]。己发现CYP2B6单核苷酸多态性(SNP)不同位点，如G516T、C65T、C777A、A785G、C1459T、T983C[6-7]。YUAN等[8]的研究显示，北方人群急性AML患者CYP2B6 516G>T(rs3745274)位点具有更高的GT基因型频率，这可能是导致急性白血病易感性的重要遗传因素。而对于南方人群，并没有详细的研究数据，而且未见国内学者对CYP2B6 785A>G(rs2279343)位点的研究。本研究旨在探讨南方人群CYP2B6 516G>T、CYP2B6 785A>G两个SNP位点与AML易感性的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2016—2019年在福建医科大学附属闽东医院血液科确诊的87例AML患者作为AML组，其中女41例、男46例，年龄(62.3±13.6)岁；另外，选取同期于本院体检的健康体检者191例作为对照组，其中女93例、男98例，年龄(62.4±11.8)岁；以上所选研究对象均无血缘关系。AML组与对照组间性别构成、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会批准，并在研究开始前获得患者或家属的书面同意。

1.2仪器与试剂 TD5A-WS型台式低速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)、ETC811型基因扩增仪、QT-1型漩涡混合器(上海琪特分析仪器有限公司)、Mini-4lc型微型离心机(珠海黑马医学仪器有限公司)、凝胶成像仪(上海培清科技有限公司)、FR-250型电泳仪(上海复日科技有限公司)；ABI3730XL型全自动DNA测序仪(赛默飞世尔公司)；全血基因组DNA提取试剂盒(亚能生物公司)；PCR扩增试剂、引物由福州尚亚生物技术有限公司合成。

1.3方法

1.3.1基因组DNA提取 在无菌条件下抽取研究对象外周静脉血或骨髓液2 mL，待血液与抗凝剂充分混匀，采用全血基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。

1.3.2引物设计与合成 用在线软件Primer3设计用于CYP2B6 785A>G、CYP2B6 516G>T两个位点检测的引物。见表1。

表1 SNP位点的引物序列

1.3.3PCR扩增目的基因片段 PCR扩增体系为50.0 μL，含2×PCR Mix 25.0 μL，上游、下游引物各1.0 μL，模板DNA 4.0 μL。PCR循环条件：94 min；94 ℃ 45 s、58 ℃ 45 s、68 ℃ 55 s，30个循环；68 ℃ 5 min；取PCR产物5.0 μL，用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。

1.3.4PCR产物直接测序 取1.0 μL纯化后的产物，与0.5 μL GeneScanTM120 LIZ标准品，8.5 μL Hi-DiTM甲酰胺混匀，95 ℃变性5 min后于测序仪进行检测。测序仪上收集的原始数据用chromas软件读取测序图谱并进行分析。

2 结 果

2.1AML组与对照组部分常规血液检测指标的比较 AML组外周血白细胞计数(WBC)水平高于对照组(P<0.05)；AML组外周血血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)水平低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组常规血液检测指标的比较

2.2CYP2B6 785A>G、CYP2B6 516G>T两个位点基因型 利用Sanger测序对CYP2B6 785A>G、516G>T位点进行基因分型，结果显示785A>G位点有3种基因型：AA、AG、GG，516G>T位点有3种基因型：GG、GT、TT。

2.3CYP2B6 785A>G、516G>T基因多态性与AML患病风险的分析 本研究中CYP2B6 785A>G位点的3种基因型AA、AG、GG的分布频率在对照组中分别为69.3%、28.4%、2.3%，在AML组中分别为53.2%、35.4%、13.4%。CYP2B6 516G>T位点3种基因型GG、GT、TT的分布频率在对照组中分别为57.1%、38.7%、4.2%，在AML组中分别为65.7%、32.2%、2.3%。CYB2B6 785A>G、516G>T位点基因型在对照组人群中的分布符合哈迪-温伯格平衡定律(P>0.05)，表明所选研究人群具有群体代表性。若CYP2B6 785A>G位点的基因型为显性模型(携带G的基因型)会增加AML的患病风险(AG+GGvs.AA，P<0.05，OR=5.34，95%CI：4.05～7.04)，等位基因G会增加AML患病风险(Gvs.A，P<0.05，OR=2.22，95%CI：1.46～3.37)。CYP2B6 516G>T位点的基因型是否为显性模型(携带T的基因型)与AML患病风险无关(GT+TTvs.GG，P>0.05，OR=0.70，95%CI：0.41～1.19)，等位基因类型与AML风险无关(Gvs.T，P>0.05，OR=0.73，95%CI：0.47～1.15)。见表3。

表3 CYP2B6 785A>G、516G>T基因多态性与AML的相关性分析

3 讨 论

CYP450又称肝微粒体混合功能氧化酶，主要参与药物体内Ⅰ相代谢反应，负责许多药物的生物转化。CYP450广泛存在于肝、肠、皮肤、鼻上皮、肺、肾等部位[9]。CYP450超家族基因多态性对于包括药物、毒物和致癌物在内的许多物质的生物转化有非常重要的影响[10]。CYP2B6是CYP450家族中重要的药物代谢酶，参与多种内源性和外源性物质的合成和代谢[11]。CYP2B6基因定位在19q1—13.2，全长28 kb，包含9个外显子，编码的蛋白质由491个氨基酸组成。CYP2B6基因有高度多态性，有38个已知的变异等位基因和多个亚等位基因。其中，CYP2B6 516G>T、785A>G遗传多态性在中国汉族人群中较为常见，其突变率为18.4%[12]。致癌物代谢酶的多态性可能影响酶活性，进而导致原癌基因激活或失活。已知CYP1A1、CYP2D6、CYP2E1的几种SNP位点基因型是急性白血病的危险因素[13-14]。近年来CYP2B6多态性的研究主要集中在对抗肿瘤药物环磷酰胺、止痛药物美沙酮、抗反转录病毒药物依法韦仑等的药物动力学影响方面[15-18]。CYP2B6多态性与急性白血病易感性的关系尚未得到充分的研究。

CYP2B6 785A>G是第5外显子中的单核苷酸被替换，会导致在第262位的氨基酸(精氨酸)发生赖氨酸替换，并通过改变底物结合位点或选择性剪接来影响代谢活动[19]。JUSTENHOVEN等[20]研究提示，CYP2B6 785A>G在显性模型下会增加乳腺癌患病患病风险。KUROSAKI等[21]研究提示，CYP2B6 785A>G位点的等位基因G会增加前列腺癌风险。这些研究说明CYP2B6基因多态性与肿瘤易感性有关。DARAKI等[22]的研究提示，CYP2B6 785A>G位点的等位基因G会增加AML的患病风险。本研究的结果与上述研究相似。

CYP2B6 516G>T是第4外显子的单核苷酸被替换，进而导致在第172位的氨基酸(谷氨酰胺)发生组氨酸替换,从而使CYP2B6活性显著降低，并通过异常剪接影响代谢活性，导致正常mRNA转录物的水平降低，因此降低了功能性蛋白质的水平[23]。BERKOZ等[24]研究表明，CYP2B6 516G>T在显性模型下会增加AML的患病风险，等位基因T会增加AML的患病风险。DARAKI等[25]的研究也提示，CYP2B6 516G>T位点的等位基因T会增加AML患病风险。本研究的结果显示，CYP2B6 516G>T位点的T等位基因与AML发病风险无关，与上述报道不一致，可能与研究的样本量较小以及研究对象的遗传背景不同有关。

综上所述，CYP2B6 785A>G位点在显性模型下及等位基因G均会增加AML患病风险。CYP2B6 516G>T位点在显性模型下及等位基因T均与AML风险无关。