葡萄皮中白藜芦醇浸膏的提取工艺优化

（西北民族大学化工学院 甘肃 730106）

葡萄（拉丁学名：Vitis vinifera）为葡萄科葡萄属的木质藤本植物，果实球形或椭圆[1]。根据特性来看，葡萄介于热性和凉性之间，属于平性水果，所以这一类的水果更加的适合多数人食用。有开胃健脾、补虚强肾、补气益血、强健筋骨等作用。葡萄皮中白藜芦醇的含量高于葡萄的其他部位。白藜芦醇现在已经被研究发现具有非常高的药用价值且已经成为了世界上不可或缺的营养和药用的商品等。

白藜芦醇的化学名称是3,4',5-三羟基-1,2-二苯基乙烯（3,4',5-芪三酚）。它是在植物被外界不明因素的影响下为保护自己所产生的一种抗菌素[2]。

白藜芦醇于1940年首次从毛叶藜芦（veratrum guandiforum）的根部分离得到。经查询文献得知，白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度[3-7]，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通[8]，具有抗动脉粥样硬化和冠心病[9]，缺血性心脏病、高血脂的防治作用，对认知障碍也有一定的改善作用[10-12]，还可以预防癌症的发生及发展[13-17]。

1.材料仪器与设备

(1)实验材料

夏黑葡萄皮、无水乙醇（分析纯）（中国食品药品检定研究院）、白藜芦醇对照品（中国食品药品检定研究院）（分析纯）、氢氧化钠溶液、盐酸溶液、蒸馏水、滤纸、硫酸铝滤纸、容量瓶、烧杯、长颈漏斗、玻璃棒、铁架台、移液管、吸耳球、磨口锥形瓶、温度计。

(2)实验仪器与设备

紫外分光光度计（722E型-上海光谱仪器有限公司）、恒温水浴锅（HWS28型-电热恒温水浴锅上海一恒科学仪器有限公司）、分析天平（FA1204型-天津天马衡基仪器有限公司）、电子天平（FAZ204B型-上海精密科学仪器有限公司）、分子筛(天津华星金辉制药机械有限公司、鼓风干燥箱（DHG-9055A-上海齐欣科学仪器有限公司）、旋转蒸发仪（上海绪航科学仪器有限公司）。

2.实验方法与结果

(1)检测波长的确定

精密称取白藜芦醇对照品5mg于50ml的棕色容量瓶中，用乙醇（分析纯）溶解并定容至刻度线，以乙醇溶液作空白对照，对白藜芦醇对照品溶液进行全波长紫外扫描，结果表明白藜芦醇的乙醇溶液在326nm处有最大吸收，而空白样品在此处无吸收，对波长测定无干扰，故选择326nm为检测波长。

(2)标准曲线的建立

将上述配制的0.1mg/ml的白藜芦醇标准溶液，之后通过梯度稀释，配制成0.004mg/ml、0.005mg/ml、0.006mg/ml、0.007mg/ml、0.008mg/ml的白藜芦醇的标准对照品溶液，以乙醇溶液作空白对照，在最大吸收波长326nm下测定吸光度，再以吸光度（A）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程A=117.32x+0.00782（R2=0.9994）。

图1

(3)材料的前处理

首先将葡萄皮去肉洗净，置于干燥箱中，在65℃下干燥8小时至干脆，然后将其粉碎全部通过2号筛，95%通过2号筛。用托盘天平称取葡萄皮粉末5g，置于蒸馏烧瓶中，加入35ml95%乙醇，60℃下水浴浸提60min后，常压下长颈漏斗过滤。所得滤液按照紫外光谱条件检测。按照水浴温度为50℃、60℃、70℃；水浴时间为40min、60min、80min；乙醇浓度为50%、60%、70%；料液比为1:6、1:7、1:8，进行四因素三水平的正交优化。

(4)葡萄皮中白藜芦醇的提取率的测定

根据白藜芦醇的标准曲线计算样品中白藜芦醇的质量浓度，由下式计算提取率。

式中：C-葡萄皮中的白藜芦醇的质量浓度，mg/ml；V-样品液体积，ml；D-稀释倍数；M-样品质量，g。

(5)正交实验设计

以浸提液中白藜芦醇的浸提液为指标，按照2.3的步骤操作，分别考察不同浸提温度（50℃、60℃、70℃）、不同浸提时间（40min、60min、80min）、不同乙醇浓度（50%、60%、70%）、不同料液比（1:6、1:7、1:8）的浸提效果。正交试验因素与水平见表1，正交试验设计及结果见表2。

表1 正交试验因素与水平

表2 浸提条件及指标检测结果

(6)数据分析与结果

由表2参数可知，对葡萄皮中白藜芦醇提取率的影响，由大到小依次为料液比＞乙醇浓度＞浸提时间＞浸提温度。白藜芦醇的最佳提取工艺组合为A2B2C3D1，即浸提时间为60min，浸提温度为60℃，料液比为1:8，乙醇浓度为50%，在上述条件同时满足的情况下对葡萄皮中白藜芦醇提取的效率可达到最大。计算所得其白藜芦醇的提取率为2.079%。

3.讨论

葡萄皮中的白藜芦醇含量测定的方法有超声萃取法、碱提酸沉法、加热回流法等[18-19]，查询相关文献得知，加热回流法更有利于白藜芦醇的浸出。因为该方法在提取过程中，可以避免溶剂的挥发，而且溶剂可以回收循环利用，同时也避免了水溶性成分的干扰，具有操作简便、提取效率高的特点。