B族链球菌检测在围生期孕妇感染诊断中的应用价值分析

李文芳 张 志 陈柳玲

（1 东莞市黄江镇社区卫生服务中心，广东 东莞 523750；2 东莞市黄江医院，广东 东莞 523750）

B族链球菌（group B streptococcus，GBS）是临床常见的革兰阳性球菌，属于β溶血链球菌，因为最早从患乳腺炎的牛中分离，也称为无乳链球菌[1]。后续的研究发现，在孕产妇和新生儿体内均可分离到GBS，GBS是导致新生儿和孕妇发生早发和晚发型感染的重要原因。有数据表明，GBS在正常女性中带菌率为15%～35%，而在某些欧美国家，孕妇感染GBS的比例接近1/2。由于对其筛查的不彻底，以及滥用抗生素等原因，感染GBS的孕妇分娩出的新生儿50%可由于感染而死亡[2-3]。《孕前和孕期保健指南（2018）》中已经将GBS作为围生期孕妇的备查项目。为了分析B组链球菌在检测围生期孕妇感染诊断中的应用价值，本社区卫生服务中心与东莞市黄江医院合作进行了本次研究，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选择2019年5月至2019年12月至东莞市黄江医院进行产前检查的待产孕妇40例作为研究对象。待产孕妇年龄22～45岁，平均年龄（28.33±4.18）岁，孕周35～37周，平均（37.22±2.60）周。其中初产妇32例，经产妇8例。本次研究已上报社区卫生服务中心伦理委员会研究并获得批准。纳入标准[4]：①孕周＞35周。②采集样本前1周内未应用抗生素类药物治疗。③采样前没有进行阴道药膏以及消毒液处理，24 h内没有性生活。④单胎孕妇。⑤对本次研究知情同意。排除标准[5]：①患有慢性肾炎、高血压、糖尿病史、急性感染等内、外科合并症及产科并发症患者。②合并心、肝、肺等脏器功能不全的患者。③存在胎位异常、双胎、宫颈功能不全、巨大儿等能导致异常分娩情况的患者。④生殖器官严重畸形的患者。⑤有习惯性流产病史的患者。⑥有滴虫、霉菌、淋球菌等生殖道感染的患者。⑦未在我院分娩，或者病例资料不完善的患者。⑧不同意参与本次研究的患者。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 由妇产科医师对患者的分泌物进行采集，先擦去生殖道内过多的分泌物，将无菌涤纶拭子放置于生殖道1/3处，沿生殖道壁轻轻旋转取得分泌物；再小心将该拭子插入肛门，在肛门括约肌以上2～5 cm处，沿肠壁轻轻旋转取得标本，使该拭子上同时取得生殖道分泌物和直肠分泌物。将该采集好分泌物的拭子放回无菌拭子套管中，密闭送检。标本应尽快用于检测，室温下保存不应超过1 d，在4～8 ℃保存不超过6 d。

1.2.2 QF-PCR检测 PCR试剂盒购自普泰生物科学（中国）有限公司，7300 PLUS型实时荧光定量核酸扩增仪购自美国ABI公司。在无菌涤纶拭子管中加入1 mL清洗液，用震荡器高速震荡2 min制成标本悬浮液，取出全部样本放入1.5 mL离心管中，13 000 r/min离心5 min弃去上清，加入1 mL清洗液震荡重悬，13 000 r/min离心5 min弃去上清。加入50 μL清洗液重悬。样品管中加入1管提取固形物，用强力震荡器高速漩涡震荡5 min。将待检品、阴性、阳性对照瞬时离心后，每管加入10 μL内参照，95 ℃干浴2 min，立即冰浴2～5 min后13 000 r/min离心1 min，取上清液用于PCR扩增。使用普泰生物科学（中国）有限公司提供的DNA试剂盒提取DNA。本试剂盒检测下限1.0×103copies/mL；线性范围1.0×103～1.0×108copies/mL。

1.2.3 细菌培养 将每份标本接种到5%的羊血琼脂平板培养基，置5% CO2中培养约24 h。若血平板上出现灰白色凸起、光滑、湿润、透光的菌落，将其挑取做涂片进行革兰染色镜检。镜下形态：革兰阳性球菌呈链状或短链状排列；生化反应中触酶试验为阴性，然后利用生物梅里埃VITEK2 Compact全自动细菌鉴定仪最终筛选出GBS。

1.2.4 药物敏感试验 药物敏感试验采用K-B纸片扩散法进行。以抑菌圈的直径作为判断药物敏感性标准。具体判断方法参考《全国临床检验操作规程》实施。

1.2.5 分析指标 以经典的分离培养法结果为标准，比较培养法和实时PCR法检测的灵敏度和特异度差异。根据GBS阴性和GBS阳性将产妇分为两组，比较两组产妇的产后并发症和新生儿并发症的发生率，观察GBS阳性产妇对常用抗生素的药敏结果。

1.3 统计学处理 用SPSS21.0统计学数据处理软件处理研究中所有相关数据，计量资料用（±s）表示，并采用t检验，计数资料采用（n，%）表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检验方法诊断效能比较 以传统的分离培养法为标准，PCR检查GBS灵敏度和特异度为100.00%、93.10%，与培养法81.82%、96.56%相比不具有统计学差异（P＞0.05）。见表1。

2.2 两组产妇并发症比较 GBS阳性组产妇的早产、产后出血、胎膜早破、宫内感染和产褥感染率明显高于GBS阴性组，且具有统计学差异（P＜0.05）。见表2。

表1 两组患者不同检验方法诊断效能比较（±s）

表1 两组患者不同检验方法诊断效能比较（±s）

表2 两组产妇并发症比较[n（%）]

2.3 两组新生儿并发症比较 GBS阳性组新生儿肺炎、新生儿呼吸窘迫综合征发生率明显高于GBS阴性组，且具有统计学差异（P＜0.05），但两组新生儿黄疸发病率无明显差异（P＞0.05）。见表3。

表3 两组新生儿并发症比较[n（%）]

2.4 GBS药敏结果 11例GBS阳性患者对青霉素G、头孢呋辛、头孢吡肟的敏感性最高，均为100%，对庆大霉素耐药率最高，为54.55%，其次为氯霉素、克林霉素，分别为45.45%、36.36%。见表4。

表4 GBS药敏结果分析[n=11，n（%）]

3 讨论

GBS也称为无乳链球菌，最早引起重视是因为其能够引起牛乳房炎，对畜牧业造成研究影响，因此在畜医界研究较多[6-7]。但是在后续的研究中发现，GBS也可使人类感染，其中新生儿是易感人群，进而导致新生儿败血症、新生儿脑膜炎、新生儿肺炎的发生，而且能够累及神经系统，引起相应的后遗症[8-9]。由于该菌已被证实不仅导致牛乳房炎，而且其细胞壁中的多糖物质属于抗原构造中的B族，因此被命名为GBS[10]。GBS是革兰阳性球菌，具有菌落较小、见β溶血环、触酶试验阴性、CAMP试验阳性的特征。

GBS首次于1938年被报道，其导致3例产妇因心内膜炎而发生死亡。后续的研究证实，该菌对产妇和新生儿均会造成严重的影响[11-12]。正常状态下GBS寄居于阴道和直肠，作为条件致病菌，正常健康人群感染后并不致病，因此产妇即使感染也没有特异性症状，未被重视[13-14]。但是分娩过程中，40%～70%带菌的产妇会将其传递给新生儿，这部分新生儿中1%～3%会发生早期侵入性感染，而出现感染的新生儿中有5%会死亡。因此GBS是威胁新生儿生命安全的重要因素。但是在不同文献中对于围生期孕妇的GBS感染率的报道有较大差异。国外有关调查显示，孕妇的阴道带菌率为3.0%～29.1%，而我国北京的一项研究显示为8.0%～15.0%。另一项研究数据显示，新生儿感染GBS发病率美国为61%，英国为28%，芬兰为30%。新生儿感染GBS的病死率瑞典为5.6%，芬兰为13%，英国为22%，赞比亚为42%，美国33%。考虑导致这一差异的原因与区域因素、生活习惯因素以及检测因素均密切相关。为了提高临床对生殖感染检测的准确性，2002年美国疾控预防中心规定妊娠35～37周为GBS检测的时间。

传统检查GBS是通过分离培养的方法进行检测，虽然检测准确率较高，但是耗时长，成本高，临床医师无法在短时间内得到结果。PCR是近年来应用于临床检测GBS的方法，能够让医师更快的得到检测结果。以传统的分离培养法为标准，PCR检查GBS灵敏度和特异度为100.00%、93.10%，与培养法81.82%、96.56%相比不具有统计学差异（P＞0.05），说明PCR检测GBS具有良好的诊断效能。

从本次研究中看，GBS阳性组产妇的早产、产后出血、胎膜早破、宫内感染和产褥感染率明显高于对照组，说明GBS是导致上述情况发生的重要因素。GBS对绒毛膜具有较强的吸附能力和穿透能力，感染2 h后就能够吸附母体组织，然后侵入绒毛膜。在炎性细胞的吞噬作用下，以及细菌产生的蛋白水解酶的直接侵袭作用下，降低了胎膜局部的张力，增加了胎膜早破产妇的发生率。一项针对2 745例产妇的研究显示，在尿中感染B族链球菌的产妇中35%发生了胎膜早破。该研究中GBS阳性组产妇22.22%发生胎膜早破，低于35%，考虑与样本量以及医疗条件等因素有关。此外，有研究认为，感染B族链球菌的孕妇中21%会发生绒毛膜羊膜炎以及产后子宫内膜炎，同时也是造成产褥感染的主要致病菌。而本次研究中GBS阳性组产妇宫内感染发生率为36.36%，产褥感染发生率为27.27%，均高于21%水平。考虑受到本次研究中样本量较小的制约结果有所差异。B族链球菌感染导致早产的原因可能与感染引起磷脂酶A、前列腺素以及IL-1等细胞因子的释放，刺激子宫，而发生早产。感染B族链球菌后会损伤子宫内膜，产妇宫缩乏力，则增加了产后出血的发病率。

B族链球菌对新生儿的也有明显影响。B族链球菌的主要传播途径是分娩时的垂直传播，新生儿可以通过出生吸入的被感染的羊水或者通过产道时与细菌的接触而被传播，而且研究发现剖宫产不能避免新生儿被感染[15-16]。在早期感染，新生儿以败血症为主要临床表现，美国新哈芬地区10年调查研究发现，新生儿败血症发病率为2.7‰，其中50%是由B族链球菌感染所导致。其纳入研究的300例产妇无新生儿败血症的发生，但是新生儿肺炎GBS阳性组发病率为8.64%，高于阴性组1.83%，而新生儿呼吸窘迫综合征GBS阳性组发生率为13.58%，高于阴性组3.20%。

我国长期以来对B族链球菌的感染情况重视不够，但是近年来有越来越多的文献关注B族链球菌对围生期孕妇的影响。何青青[17]对长沙地区2 183例围生期孕妇检查中发现带菌率为7.4%。此外，相关研究发现因肺炎死亡新生儿中，65%患儿的肺部标本中检出B族链球菌，说明GBS是导致新生儿肺炎患儿死亡的首要致病菌。此外，由于国内抗生素滥用情况比较严重，对围生期GBS筛检方面几乎空白，因此我国近年来出台政策，加大了B族链球菌筛查力度。

从药敏情况来看，11例GBS阳性患者对青霉素G、头孢呋辛、头孢吡肟的敏感性最高，均为100%，对庆大霉素耐药率最高，为54.55%，其次为氯霉素、克林霉素，分别为45.45%、36.36%。在头孢类药物中，头孢西丁出现了1例耐药，需要引起重视。抗生素滥用等导致人群整体耐药性增加以及细菌菌株变异等。上述结果说明青霉素仍然能够作为预防GBS感染和治疗的首选药物。但是我国不同地区对围生期孕妇B组链球菌的药敏情况研究结果有所不同，有报道显示GBS对青霉素G的中介率为19.7%，说明我国也出现了对青霉素敏感性下降的菌株，这一情况值得临床医师的注意。因此对于GBS阳性的围生期孕妇应该进行药敏试验，有针对性的使用抗生素，进而减少药物对产妇的影响[18-20]。

综上所述，GBS检测在围生期孕妇感染诊断中具有重要的应用价值，对于预防产妇和新生儿并发症的发生，选择敏感性抗生素的应用具有重要的意义。应该注意对围生期孕妇进行GBS感染的常规检测，对于合并感染的孕妇应该给予及时干预。