皂白散治疗足癣的实验研究*

郭蛟，冯捷，谢作哲，解豫苑，赵东科，闫小宁

1.陕西省中医医院，陕西西安710003；2.西安交通大学第二附属医院，陕西西安710004；3.宝鸡市人民医院，陕西宝鸡721001；4.西安市新城区中医医院，陕西西安710005；5.杨凌东科麦迪森制药有限公司，陕西咸阳712100

足癣往往称之为“脚湿气”“臭田螺”［1-2］，由于患者平素生活起居不慎，久居湿热地区、趾缝潮湿、脚汗多而外感湿邪，或脾虚湿蕴下注足部，或因接触患者的用具沾染虫毒导致［3-4］。常见脚趾缝浸渍、糜烂、丘疹水疱或干燥、脱屑，瘙痒明显，臭秽不堪［5-6］。临床上抗真菌药物成分比较单一，长期服用损伤肝肾功能等不良反应大［7-8］，且治疗后病情容易反复，如若治疗不及时甚至继发丹毒［9］。因此，寻求不良反应小、疗效好的治疗药物迫在眉睫。

皂白散由白矾（煅）、皂矾（煅）、皂角、黄精、地骨皮药物组成［10］，具有清热燥湿，杀虫止痒的作用，广泛用于湿热蕴结型手足癣的治疗［11］。中医学认为足癣的基本病机为湿热郁遏肌肤，治疗以清热燥湿止痒为主［12］，但关于皂白散治疗足癣的药理作用及机制尚未完全阐明，为阐明皂白散具有抗炎、毛细血管通透性、抑制真菌、抑制细菌的药理作用，本文对其主要药效学进行了研究。

1 材料

1.1 动物SPF级ICR小鼠，体质量（27±3）g，雌雄各半，由陕西省医学实验动物中心提供，批号：SCXK-（陕）2018-308，实验动物通过陕西省中医院实验动物伦理委员会审批（批号：SZYY2018006），实验温度（22±3）℃，湿度50% ～60%，自由饮水，注意通风换气，保持空气清新。

1.2 药品与试剂皂白散（陕药控股集团天宁制药有限责任公司，批号：091207D1）；巴豆油合剂（2%巴豆油，20%无水乙醇、5%蒸馏水、73%乙醚）；l%醋酸（西安交通大学医学部药理教研室提供）；伊文思兰（晓柚生物，批号：X11103）；醋酸氟轻松软膏（天津太平洋制药有限公司，批号：2009DD4056）；地塞米松磷酸钠注射液（天津金耀药业有限公司，批号：20091011）；莫匹罗星软膏（中美天津史克制药有限公司，批号：2009B00825）。

1.3 菌株实验真菌：青霉菌、黑曲霉、黄曲霉、白色念珠菌、许兰氏毛癣菌、石膏样小孢子菌、犁头菌、放线菌。实验细菌：乙型链球菌、F氏痢疾杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、布氏杆菌、金黄色葡萄球菌及卡他球菌。以上菌株均由西安交通大学医学部细菌室提供。

1.4 仪器722型分光光度计（江西贝诺仪器有限公司）；QY-EFYH253-193型无菌滤纸片（上海乔羽生物科技有限公司）；RPY-564型普通琼脂平板（上海榕柏生物技术有限公司）；R454462型沙保弱氏琼脂平板（上海舜友生物技术有限公司）；cl-191c型培养箱（上海信裕生物科技有限公司）；KL05A型离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）。

2 方法

2.1 皂白散对小鼠耳肿胀影响取ICR小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，即大剂量组（60%皂白散浸液），小剂量组（30%皂白散浸液），对照组（蒸馏水）及阳性对照组（醋酸氟轻松软膏）。用巴豆油合剂（0.1 mL）涂于每只小鼠右耳两面致炎后待用，各组小鼠右耳两面涂药，左耳作为自身对照，不涂试药，药、蒸馏水量均为每只0.1 mL。待药水干4 h后，将小鼠脱臼处死。剪下左、右两耳。用9 mm直径打孔器分别在每耳的同一部位取样。用左右两耳片质量作为肿胀度，用扭力天平称量。

2.2 皂白散对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

取ICR小鼠40只，雌雄各半。随机分为大剂量组（60%皂白散浸液）、小剂量组（30%皂白散浸液）、对照组（蒸馏水）及阳性对照组（地塞米松磷酸钠注射液）。于给药后1 h，每只静注伊文思兰生理盐水。每只腹腔注射1%醋酸0.2 mL。30 min后处死动物。用5 mL生理盐水洗涤腹腔。收集腹腔洗涤液，加生理盐水至6 mL，离心后用722型分光光度计，在波长590 nm处比色法测定其中伊文思兰的光密度。

2.3 皂白散的抗真菌实验将无菌滤纸片（Ф6 mm）分别浸泡于大剂量组（60%皂白散浸液）、小剂量组（30%皂白散浸液）、对照组（蒸馏水）及阳性对照组（注射用两性霉素B）中，将待测真菌均匀涂于沙保弱氏平板，以无菌镊夹取无菌滤纸片粘贴于平板表面，标记，室温放置20 min，移入28℃培养箱培养48 h，用卡尺测量各样品及对照的抑菌环直径，抑菌实验判断标准：小于6 mm，不敏感（无抑菌作用）；7～10 mm，低度敏感（轻度抑制）；11～20 mm，中度敏感（中度抑制）；20 mm以上，高度敏感（重度抑制）。

2.4 皂白散的抗细菌实验将无菌滤纸片（Ф6 mm）分别浸泡于大剂量组（60%皂白散浸液）、小剂量组（30%皂白散浸液）、对照组（蒸馏水）及阳性对照组（莫匹罗星软膏）中，室温放置备用，将待测细菌均匀涂于普通琼脂平板，以无菌镊夹取无菌滤纸片粘贴于平板表面，标记，室温放置20 min，移入37℃培养箱培养24 h。用卡尺测量各样品的抑菌环，抑菌实验判断标准：小于6 mm，不敏感（无抑菌作用）；7～10 mm，低度敏感（轻度抑制）；11～20 mm，中度敏感（中度抑制）；20 mm以上，高度敏感（重度抑制）。

2.5 皂白散全身致敏实验取ICR小鼠20只，体质量（27±3）g，雌雄各半，隔日皮下注射60%皂白散浸液（0.4 mL·kg-1），每日2次，连续14 d。观察ICR小鼠全身症状，包括皮肤潮红、丘疹、蜷缩、呛咳、呼吸困难、死亡等。

2.6 皂白散的毒性实验取ICR小鼠20只，雌雄各半，禁食12 h后，灌胃给予皂白散大剂量组（60%皂白散浸液），每日3次，1日内累加剂量达40.2 g·kg-1，灌胃给药后，给予固体饲料和水，观察1周内小鼠死亡数及其中毒现象。

2.7 统计学方法采用SPSS 25软件进行分析，所有数据均以均数±标准差（±s）表示，两组计量资料比较用t检验，三组及以上计量资料比较用方差分析，以P＜0.05差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 皂白散对巴豆油合剂小鼠耳部肿胀反应的影响与对照组比较，大、小剂量皂白散组小鼠的耳部肿胀度明显降低（P＜0.05），大、小剂量组与阳性对照组无统计学意义（P＞0.05）。提示皂白散具有明确疗效。见表1。

表1 皂白散对巴豆油合剂小鼠耳部肿胀反应的影响（±s）

表1 皂白散对巴豆油合剂小鼠耳部肿胀反应的影响（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05

肿胀度对照组组别n 左耳质量（m／mg） 右耳质量（m／mg）10 17.83±2.32 26.25±2.56 8.04±4.60阳性对照组10 16.36±2.33 28.27±0.90 2.09±2.02小剂量皂白散组 10 15.75±1.62 20.25±2.86 4.50±3.00*大剂量皂白散组 10 14.40±3.62 18.70±1.83 3.50±2.12*

3.2 皂白散对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

与对照组比较，大、小剂量皂白散均能显著降低1%醋酸对小鼠腹腔毛细血管的通透性（P＜0.05）。见表2。

表2 皂白散对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（±s）

表2 皂白散对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05

通透性对照组组别n 10 0.472±0.133阳性对照组10 0.390±0.114小剂量皂白散组10 0.279±0.149*大剂量皂白散组10 0.255±0.221*

3.3 皂白散对常见真菌的抑菌环直径大小的影响

与对照组比较，大、小剂量皂白散对青霉菌、黑曲霉、黄曲霉具有轻度抑制作用，对白色念珠菌、许兰氏毛癣菌、石膏样小孢子菌、犁头菌、放线菌有中度抑制作用；小剂量组对白色念珠菌有轻度抑制作用，对放线菌有中度抑制作用。见表3。

表3 皂白散对常见真菌的抑菌环直径大小（±s，mm）

表3 皂白散对常见真菌的抑菌环直径大小（±s，mm）

注：与对照组比较，*P＜0.05

组别青霉菌黑曲霉黄曲霉白色念珠菌许兰氏毛癣菌 石膏样小孢子菌犁头菌放线菌对照组0.0±0.1 0.0±0.0 0.0±0.1 0.0±0.4 0.0±0.2 0.0±0.2 0.0±0.3 0.0±0.1阳性对照组15.0±1.4 17.0±1.4 15.0±12.0 23.0±1.6 15.0±1.4 13.0±1.2 20.0±1.3 23.0±15.0小剂量皂白散组0.0±0.3*0.0±0.1*0.0±0.2*6.0±1.1*0.0±0.3*0.0±0.0*0.0±0.0*12.0±1.5*大剂量皂白散组8.0±1.3*7.0±1.6*7.0±1.5*10.0±1.2*10.0±1.3*10.0±1.4*10.0±1.2*15.0±1.3*

3.4 皂白散对常见细菌的抑菌环直径大小的影响

与对照组比较，大剂量皂白散对乙型链球菌、F氏痢疾杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、布氏杆菌、金黄色葡萄球菌及卡他球菌均有中度抑制作用；小剂量对乙型链球菌、F氏痢疾杆菌、变形杆菌和布氏杆菌有中度抑制作用，但对枯草杆菌、卡他球菌无抑制作用。见表4。

表4 皂白散对常见细菌的抑菌环直径大小（±s，mm）

表4 皂白散对常见细菌的抑菌环直径大小（±s，mm）

注：与对照组比较，*P＜0.05

氏痢疾杆菌枯草杆菌大肠杆菌变形杆菌 金黄色葡萄球菌 卡他球菌布氏杆菌对照组1.0±0.8 0.0±0.0 1.0±0.3 1.0±0.4 0.0±0.2 0.0±组别乙型链球菌 F 0.7 0.0±0.5 0.0±0.6阳性对照组15.0±1.8 17.0±17.0 20.0±1.6 16.0±1.5 13.0±1.4 13.0±1.4 14.0±1.5 13.6±1.4小剂量皂白散组 10.0±1.2 10.0±1.0 0.0±0.1 8.0±1.1 12.3±1.1*8.0±1.3 0.0±0.2 12.5±0.8*大剂量皂白散组 12.0±1.4* 13.0±1.6* 12.0±1.3* 15.0±1.4* 14.0±1.2* 12.0±1.6* 13.0±1.5* 12.0±1.4*

3.5 皂白散全身致敏实验结果致敏作用连续观察隔日皮下注射大剂量皂白散药液，未发现小鼠皮肤潮红、丘疹、蜷缩、呛咳、呼吸困难等症状，亦未见小鼠死亡现象，说明皂白散无明显全身致敏作用。

3.6 皂白散毒性实验结果1周内20只小鼠均无死亡，毛发、活动、体态及饮食、粪便等未见明显异常，证明皂白散口服时的LD50＞40.2 g·kg-1，属比较安全的药物。

4 讨论

足癣在中医经典《外科正宗》记载：“臭田螺，乃足阳明胃，经湿火攻注而成。此患者多生足趾脚丫，随之白斑作烂，先痒后痛，破流臭水，形似螺靥［13］”。皂白散由白矾（煅）、皂矾（煅）、皂角、黄精、地骨皮药物组成。其中白矾煅后为枯矾，具有解毒杀虫、燥湿止痒作用为君药［14］，《本草纲目》云：“矾石之用有四……酸苦涌泄……酸涩而收……收而燥湿……解毒也”；皂矾为硫酸盐类矿物水绿矾的矿石，具有解毒燥湿，杀虫补血的功效，煅后增强了燥湿止痒的功效［15-16］。皂角祛风杀虫、散结消肿［17-18］，《本草纲目》云：“治民疠疥癣……杀虫……涂之则散肿消毒，搜风治疮。”此二药为臣药；地骨皮清热养阴［19］，有辅佐前3味药物过燥之弊，因而为佐药；近期研究地骨皮有抑菌抗炎的作用［20］，黄精具有健脾养阴之功效，归脾经［21］，一方面制约白矾（煅）、皂矾（煅）、皂角燥性，另一方面起到引经报使之目的为使药。全方共奏清热燥湿，杀虫止痒之功用而达到了治疗脚湿气之目的［22］。结果表明大、小剂量皂白散组与对照组比较，有明显差异，皂白散对巴豆油合剂小鼠耳部肿胀反应，侧面表明皂白散有抗炎的作用；且大、小剂量皂白散均能显著降低l%醋酸对小鼠腹腔毛细血管的通透性，进一步说明皂白散具有止痒的作用。西医认为足癣多由毛癣菌属、小孢子菌属、表皮癣菌属感染引起［23-24］，居浅部真菌病的首位［25］。本研究表明大剂量皂白散组对许兰氏毛癣菌、石膏样小孢子菌、犁头菌、放线菌、白色念珠菌有中度抑制作用；小剂量组对白色念珠菌有轻度抑制作用，对放线菌有中度抑制作用；而不同类型的足癣患者皮肤屏障容易被真菌破坏［26］，易使皮肤菌群失调，局部炎症进一步加重，患者自身的瘙痒、疼痛症状更加明显；皂白散大剂量对乙型链球菌、F氏痢疾杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、布氏杆菌、金黄色葡萄球菌及卡他球菌均有中度抑制作用，表明皂白散有抑制真菌、抑制细菌的作用。

中药治疗足癣主要有中药熏洗、中药涂敷法、浸泡法等［27］，有醋制剂、水制剂、气雾剂、膏剂等制剂［28］，皂白散属于水制剂浸泡法。实验表明，皂白散具有抗炎、降低毛细血管通透性、抑制真菌、抑制细菌的作用，无明显全身致敏性，比较安全，且具有组方简单、工艺简便、安全有效、成本低廉等优点，值得在临床推广应用。