粪便钙卫蛋白在肠易激综合征和炎症性肠病鉴别诊断中的意义分析

张宪波，刘月皎，陈云峰

（南京中医药大学附属江苏省中医院检验科，南京210029）

肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一种常见的功能性胃肠病症，主要临床表现为间歇性或持续性腹痛、腹胀、排便习惯和（或）大便性状改变，而缺乏胃肠道结构和生化异常，患者以中青年为主，女性多于男性[1-2]。炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）是一种累及回肠、直肠、结肠的一种特发性慢性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎 (ulcerative colitis,UC)以及克罗恩病(Crohn’sdisease,CD)，多年来其在世界范围的发病率持续上升。IBD患者在发病早期容易与IBS发生混淆，两者的鉴别诊断、评估病情、治疗指导以及监测复发需要做结肠镜检查，但检查过程病人痛苦比较大、耗时长并有一定的禁忌症与局限性，所以亟需一种无创、准确反映肠道炎症程度的指标来替代。钙卫蛋白(calprotectin)是S100 家族的一种钙结合蛋白，由轻链MRP8 和重链MRP14组成36KD 的异二聚体，主要位于中性粒细胞内，约占中性粒细胞胞浆蛋白的60%左右，在炎症反应、细胞破裂或死亡时可从细胞中释放并随着粪便排出，并且其浓度与中性粒细胞转运到肠道数量呈正比[3]。由于钙卫蛋白在粪便中稳定存在，并且检测过程无创，病人留取标本方便，因此它可作为反映肠道炎症的一个良好指标[4-5]。本研究旨在比较IBS和IBD 病人的粪便钙卫蛋白（fecalcalprotectin,FC）水平差异，探讨FC在IBS和IBD鉴别诊断中的意义，为临床快速鉴别诊断和诊治、监测提供依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择2018年1月～7月江苏省中医院门诊及病房收治的IBS 患者38例，IBD患者114例。IBS 患者年龄17～35（30±8.2）岁，男性13例，女性25例，均经罗马Ⅳ标准确诊，且结肠镜或结肠造影未见异常。IBD患者年龄14～87（35±10.5）岁，男性69例，女性45例，其中UC 63例，CD 51例，诊断标准为炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2018年，北京）[6]，判断UC活动性采用改良Mayo 评分系统，Mayo 评分≥3分为疾病活动；判断CD 活动性采用克罗恩病活动指数（CDAI），以CDAI 评分≥150 为疾病活动。健康对照组55例，均为本院体检中心健康体检者，无自身免疫性疾病、遗传性疾病家族史，近一个月无腹痛腹泻等症状，同时肝肾功能、大便常规、血细胞检测、红细胞沉降率（ESR）和C反应蛋白（CRP）检测结果均在正常参考区间。

1.2 仪器和试剂 FC 检测采用瑞士Bühlmann 公司酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒，洗板机型号为美国BIO-RAD1575，全自动酶标仪型号为美国Bio-Tek ELx800。ESR 检测采用意大利ALIFAX公司Roller20全自动血沉仪及配套试剂，CRP 检测采用芬兰Orion Diagnostica 公司QuikReadgoCRP 检测仪及配套试剂。所有项目检测时均严格按照试剂说明书操作。

1.3 方法 收集IBS 和IBD患者以及健康对照在做肠镜检查和药物治疗前清晨留取的粪便标本，固体约20g 或稀便约20ml，留取后2h 内送检，用标本提取缓冲液萃取后储存于-20℃待检。IBD患者同时还需静脉抽血检测ESR 和CRP，活动期病人经治疗缓解后重新留取粪便标本检测FC。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0 软件进行统计分析处理。各组数据先采用Kolmogorov-Smirnov检验正态性，正态分布的计量资料用均数±标准差（±s）表示，各组之间FC 水平相互比较采用ANOVA 方差分析和SNKq检验，治疗前后比较采用配对样本t检验。偏态分布的计量资料用四分位数间距表示，各组之间比较采用Mann-WhitneyU检验。相关系数应用Pearson 相关分析计算并检验。应用ROC曲线分析FC 鉴别诊断IBS 和IBD 的敏感度和特异度。

2 结果

2.1 各组FC 水平比较 见表1。经Kolmogorov-Smirnov 检验，各组数据均呈正态分布，IBD患者FC 水平显著高于IBS组与健康对照组，差异均有统计学意义（q=15.897，18.523，均P=0.000），UC组和CD组FC 水平均显著高于IBS组及健康对照组，差异有统计学意义（P=0.000）；UC组FC 水平高于CD组，差异有统计学意义（q=5.204，P=0.000）；IBS组FC 水平和健康组相比，差异无统计学意义（q=0.318，P=0.751）。

表1 各组FC 水平（±s，μg/g）

表1 各组FC 水平（±s，μg/g）

组别 n FC 水平健康对照 55 33.8±13.4 IBS 38 49.2±19.8 IBD 114 778.8±328.9 UC 63 879.9±332.1 CD 51 653.8±280.7

2.2 FC,ESR,CRP 与IBD 活动的相关性分析 判断UC 活动性采用改良Mayo 评分系统，判断CD 活动性采用CDAI 评分,进行Pearson 相关分析，得出UC组FC，ESR 和CRP 与Mayo 评分均呈正相关 性（r=0.851，0.752，0.531，均P＜0.01）。CD组FC，ESR 和CRP 与克罗恩病活动指数（CDAI）评分相关系数均呈正相关性（r=0.796，0.693，0.476，均P＜0.01)。

2.3 FC 鉴别诊断IBS 和IBD 的ROC曲线 作FC鉴别诊断IBS 和IBD 的ROC曲线，见图1。ROC曲线下面积（AUC）为0.961（95% CI：0.934～0.988，P＜0.01），Youden 指数(灵敏度+特异度-1)0.859对应的FC 临界值为159.5μg/g,此时FC 鉴别诊断IBD 与IBS 的敏感度和特异度分别为91.2%和94.7%。

图1 FC 鉴别诊断IBS 和IBD 的ROC曲线

2.4 IBD 治疗前后FC 水平比较 IBD 活动期病人（UC 52例，CD 39例）入院后经过系统治疗达到临床缓解后，重新留取粪便标本检测FC，与治疗前比较，FC 水平显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)，见图2。

图2 IBD 病人治疗前后FC 水平变化

3 讨论

近几十年来，IBD 在全世界范围的发病率均有持续增高的趋势，我国IBD 发病率和住院率也持续升高。典型的IBD 具有慢性和反复发作的临床特点，并且IBD患者在发病早期、缓解期、或仅表现为腹痛及排便习惯的改变时，经常与功能性肠病发生混淆，最常见的功能性肠病为IBS。有报道[7]发现有约38%的缓解期UC患者及35.4%的CD患者符合IBS 诊断标准，因此IBS 与缓解期或轻症IBD 的鉴别，已受到临床越来越多的关注。目前临床主要是通过内镜及其病理组织学进行确诊，但其过程复杂、耗时长，病人痛苦并且费用相对昂贵。

钙卫蛋白来源于中性粒细胞和巨噬细胞，是一种炎性标志物，由于与钙离子的结合，在粪便中极其稳定，优于以往的粪便标志物[8]。D’HAENS 等[9]分别检测了39例 UC，87例 CD和 32例 IBS 的FC 水平，发现UC 和CD 的FC 水平显著高于IBS（P＜0.05）。本文研究结果显示，IBD组FC 水平明显高于IBS组和健康对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），而IBS组FC 水平与健康对照组差异无统计学意义。原因可能是IBD 病人病变的黏膜内的中性粒细胞能够分泌大量的钙卫蛋白，导致FC 显著升高；而肠易激综合症由于不存在器质性和结构上的改变，因此FC 处于正常水平。通过绘制FC 鉴别诊断IBS 和IBD 的ROC曲线，得出曲线下面积（AUC）为0.961（95% CI：0.934～0.988，P＜0.01），对应的FC 临界值为159.5μg/g,FC 鉴别IBD 与IBS 的敏感度和特异度分别为91.2%和94.7%，说明FC 在鉴别诊断IBD 与IBS 时有非常良好的敏感度和特异度。近年来国内有报道[10]抗酿酒酵母细胞抗体（ASCA）和抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA），抗小肠杯状细胞抗体（GAB）和抗胰腺腺泡抗体（PAB）联合检测对于诊断和鉴别诊断IBD 有指导意义，但敏感度和特异度不是太理想，应用价值有待进一步研究。

在判断疾病活动性方面，本文通过Pearson 相关系数分析显示，不论是UC组还是CD组，FC都与疾病活动性正相关，且FC 与疾病活动的相关系数均大于ESR 和CRP 与疾病活动的相关系数，可见FC 在判断IBD 活动性方面要优于ESR 和CRP，这与报道一致[11]。国外也有研究发现FC 是一个良好的指标，与内镜及组织活检结果具有良好的相关性，能用于IBD 活动度的评估[12]。IBD 活动期病人经过系统的治疗达到缓解后，FC 水平相比较治疗前有了显著下降，原因是治疗后肠道内炎症病变程度下降,肠道分泌的钙卫蛋白减少，病情趋于好转。

当然，FC 检测及应用也有局限性：一是当气管-支气管炎症、肿瘤时痰液中的钙卫蛋白可能会升高，如果痰液误吞进入消化道，随粪便排出，就可以引起FC 假阳性；二是钙卫蛋白会受药物的影响，比如非甾体类抗炎药及质子泵抑制剂等能够使钙卫蛋白的含量增加[13]；三是饮酒也会使FC 的含量增加[14]。除此之外，样本留取时间以及留取方式都会对检测结果造成较大影响[15]。因此留取FC 前应告知病人相关注意事项，确保病人无咳嗽等呼吸道症状以及服用相关药物和饮酒等，以避免干扰检测结果。

总之，FC 具有无创、留样方便、病人无痛苦和IBD 炎症相关性好等优点，FC含量检测作为一种非侵入性筛选试验，为临床鉴别IBD和IBS 提供了有效的手段。虽然目前仍有较多医疗机构未将FC 作为IBD 的常规检查，相信未来FC 一定能成为IBD 诊治和监测的一项非常理想的实验室检查指标。