王 玲,王 健,赵寅生,黄其峰,吴黎黎
(中国人民解放军联勤保障部队第901 医院a.检验科;b.病理科,合肥230001)
近年来,甲状腺癌的发病率在全世界范围内增长迅速,是最常见的头颈部肿瘤之一,而甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是其中最常见的病理类型,约占甲状腺癌的80%以上[1]。促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)是由垂体分泌的一种糖蛋白激素,其与位于甲状腺滤泡上皮细胞胞膜上的促甲状腺激素受体(thyrotropin recepter,TSHR)结合,促进甲状腺细胞的生长和甲状腺激素的合成和分泌,提高甲状腺的摄碘能力。血清TSH 水平可以用于甲状腺疾病的诊断和疗效观察;同样,TSHR 在甲状腺细胞上的表达和分布异常,也会导致甲状腺相关疾病的发生。本实验通过了解PTC患者血清TSH 水平和甲状腺组织中TSHR 的表达和分布,旨在探索TSH,TSHR 与PTC 的关系,为PTC 的早期诊断、个体化治疗和疗效预测提供理论参考。
1.1 研究对象 选取病例来自我院2017年9月~2019年10月进行甲状腺外科手术治疗并经病理证实的87例患者。符合下列标准者纳入:初次治疗,通过术后病理确诊,术前一周内检测血清TSH,没有并发其他恶性肿瘤、没有接受过甲状腺方面创伤治疗和1年内没有服用过影响甲状腺激素的药物,且临床资料完整,石蜡切片保存完整者。本研究经我院伦理委员会批准,所有患者均知情同意。87例病患中,甲状腺乳头状癌55例,结节性甲状腺肿32例。另外,留取10例甲状腺结节周围正常的甲状腺组织作对照。
1.2 仪器与试剂
1.2.1 TSH 的检测:患者晨起空腹采集静脉血3~5ml,3 000r/min 离心5min 后,分离血清上机检测。使用德国西门子公司的ADVIA Centaur 全自动化学发光分析仪检测,配套采用西门子促甲状腺素测定试剂盒(直接化学发光法)检测TSH。
1.2.2 TSHR 的检查:石蜡切片厚度均为4μm,HE 染色,并由病理科临床医师阅片确认。免疫组化采用SABC 法,按照常规步骤进行。兔抗人TSHR 单克隆抗体(1:50)来源于CUSABIO,即用型SABC-兔IgG试剂盒购于武汉博士德生物,抗原修复液购于碧云天,DAB 显色试剂盒购于北京中杉金桥。
1.3 方法 参照文献[2]进行免疫组化的结果判定:与背景染色相同或无染色计0分,淡黄色计1分,黄色或棕黄色计2分,黄褐色计3分;随机选取5个高倍镜视野(×400),计数100个细胞中阳性细胞的比例,<5%为0分,5%~25%为1分,26%~50%为2分,>50%为3 分。上述两者得分相乘,0 分为阴性(-),1~2 分为弱阳(+)性,3~4 分为阳性(++),≥5 分为强阳性(+++)。免疫组化结果判定由两名资深病理医生独立实施,并取平均值。
1.4 统计学分析 应用SPSS23.0 软件对数据进行统计分析。计量资料(正态分布)用均数±标准差(±s)表示,组间比较采用两独立样本t检验分析;计量资料(非正态分布)用中位数和四分位间距表示,组间比较采用Wilcoxon符号秩检验分析;计数资料用率表示,结果用卡方检验进行分析;等级资料比较采用Wilcoxon 符号秩检验分析。统计均以P<0.05 为差异有统计学意义。
2.1 PTC 及结节性甲状腺肿患者的临床资料、TSH及TSHR 的表达情况 55例PTC患者(男性13例,女性42例,年龄48.36±11.17岁)及32例结节性甲状腺肿患者(男性7例,女性25例,年龄50.16±10.10岁)年龄和性别分布差异均无统计学意义(χ2=0.747,0.035,均P>0.05)。PTC患者血清TSH 水平2.28(1.59,2.99)mIU/L 显著高于结节性甲状腺肿1.56(1.18,2.61)mIU/L,差异具有统计学意义(χ2=-2.163,P<0.05)。PTC患者中TSHR阳性率为80.00%,平均秩次为36.21;结节性甲状腺肿患者中TSHR表达阳性率为96.88%,平均秩次为57.39,两组TSHR表达阳性率差异具有统计学意义(χ2=4.845,P<0.05)。PTC患者血清TSH水平高于结节性甲状腺肿患者,而结节性甲状腺肿患者甲状腺组织的TSHR表达水平高于PTC组织。
2.2 TSHR 在不同甲状腺组织中的阳性表达 在正常的甲状腺组织中,TSHR 主要表达于甲状腺滤泡上皮细胞膜上;在PTC 和结节性甲状腺中,TSHR在细胞质和细胞膜上均有表达,且PTC 中着色较结节性甲状腺组织浅(见图1)。
图1 TSHR 在不同甲状腺组织的表达
2.3 PTC 中血清TSH 的水平与临床指标的关系见表1。进一步对TSHR表达水平与PCT 患者年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤大小和TNM 分期的关系进行了分析。PTC患者血清TSH 水平与年龄、性别、淋巴结转移和肿瘤大小,差异均无统计学意义(均P>0.05)。根据TNM 分期对PTC患者进行分组,Ⅰ/Ⅱ期患者血清TSH 水平明显低于Ⅲ/Ⅳ期的患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.4 PTC 中TSHR表达水平与临床指标的关系 见表2。对TSHR表达水平与PCT 患者年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤大小和TNM 分期的关系进行了分析。PTC患者TSHR 的表达水平与年龄、性别和肿瘤大小差异均无统计学意义(均P>0.05)。根据TNM 分期对PTC患者进行分组,Ⅰ/Ⅱ期患者PTC表达阳性率(88.89%)明显高于比Ⅲ/Ⅳ期的表达阳性率(63.16%),差异具有统计学意义(P<0.05);同时,淋巴结转移PTC患者组TSHR表达阳性率(75.86%)明显低于淋巴结未转移组(84.62%),两组TSHR表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)。
表1 PTC患者血清TSH 水平与临床指标的关系[M(P25,P75)]
表2 PTC患者TSHR表达水平与临床指标的关系
PTC 是恶性程度最低的甲状腺癌病理类型[1],其发生隐匿,淋巴结转移较早,早期缺乏特异性体征和临床表现,早期诊断较为困难。PTC患者如能早期诊断,及时手术治疗,并辅助内分泌治疗和放射性131I 治疗[3],可明显降低PTC患者的复发率和转移率,提高患者的生活质量。TSH 为垂体分泌的一种糖蛋白激素,TSHR 是一种位于甲状腺滤泡上皮细胞膜上的G 蛋白偶联受体,TSH 与TSHR 结合后除了发挥正常的生理作用外,还可刺激甲状腺细胞分泌生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子,而这些因子能刺激肿瘤细胞的生长[4]。有研究表明[5]在PTC 中,TSHR 基因和NIS 基因启动子的高度甲基化,抑制了TSHR mRNA表达,PTC 癌细胞表面的TSHR表达下降,促进了肿瘤的发生发展。也有研究[6]表明 BRAF T1799A 突变,导致TSHR 和NIS 蛋白表达不正常,肿瘤细胞的分化程度降低,摄碘能力下降。PTC 内分泌治疗的理论依据[7]是:给予PTC患者一定剂量的左旋甲状腺素钠片,使体内的甲状腺激素升到正常高限,负反馈作用于下丘脑-垂体-甲状腺轴,合成分泌的TSH 量下降,从而减缓了细胞的增殖,抑制了肿瘤的生长、浸润和转移。部分PTC患者,TSHR表达异常,肿瘤将不依赖TSH,这类患者的内分泌治疗效果将不理想;PTC 中放射性131I 治疗[8]是基于甲状腺细胞内的钠碘转运体,使甲状腺细胞具有较高摄碘能力,使放射性131I 聚集于甲状腺细胞内,辐射集中在靶器官,对其他组织和器官影响较小。PTC 中,如TSHR表达异常,会影响NIS,进而肿瘤细胞的摄碘率会下降,影响放射性131I 的效果。TSHR 的调控与PCT 的内分泌治疗和放射性131I 均有关联[9]。
本研究中PTC患者血清TSH 水平显著高于结节性甲状腺肿(P<0.05);PTC患者中,Ⅲ/Ⅳ期患者血清TSH水平显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05),这一结论说明了血清TSH 与PTC 发病之间有着密切关系,且随着TSH 水平升高,PTC 的病情越严重。本研究通过免疫组化的方法对结节性甲状腺肿和PTC 进行比对发现:TSHR 在PTC组织中的细胞膜和细胞质均有表达,且表达强度低于结节性甲状腺肿;PTC 中,TSHR 在Ⅰ/Ⅱ期的表达阳性率高于Ⅲ/Ⅳ期,在淋巴结未转移组中的阳性率高于淋巴结转移组,可以认为TSHR 减少与PTC 的临床分期和淋巴结转移有相关性,呈负性相关;PTC中TSHR 的表达差异性,会影响到PTC 内分泌治疗和放射性131I 治疗的效果[6]。
综上所述,血清TSH 水平和甲状腺组织TSHR的表达与PTC 的发生有关系,其可以作为PTC 发病的影响因素、辅助诊断指标、病情评估及预后判断。将两者结合起来可以帮助我们提高早期诊断率、预测疗效、探索个体化治疗。