Ki⁃67、CARLo⁃5及Rictor蛋白在子宫内膜癌中的表达及预后价值

杨海霞 路易玲 黄骏

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，原癌基因激活、抑癌基因失活或突变、抗凋亡基因过度表达在本症的发生和发展中起着重要作用［1］。与其相关的原癌基因细胞增殖核抗原Ki⁃67（nuclcar⁃associated antigen Ki⁃67，Ki⁃67）、肿 瘤相关长链非编码RNA 5（cancer⁃associated re⁃gion long non⁃coding RNA 5，CARLo⁃5）及雷帕霉素不敏感的mTOR 伴侣蛋白（Rapamycin Insensi⁃tive Companion of mTOR，Rictor）在肿瘤增殖、转移和侵袭等过程中发挥重要作用［2］。本研究Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋 白在子 宫 内膜癌 中的表达及对远期预后生存的影响进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月至2015年1月本院收治的63例子宫内膜癌患者临床资料，平均年龄（41.53±3.61）岁；根据国际妇产科联盟修订的手术病理分期［3］分为Ⅰ期10 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期21 例和Ⅳ期13 例。纳入标准：①所有患者均病理学检查确诊［4］；②术前未开展化疗、放疗或性激素类治疗；③B 超及CT 等影像学资料未见明显的转移灶；④临床资料完整且真实。排除标准：①手术禁忌症者；②子宫内膜转移性癌；③既往有恶性肿瘤病史。收集子宫内膜肿瘤组织及肿瘤旁（距离癌组织5 cm 以上）的正常组织，分别作为子宫内膜癌组和癌旁组织组。本研究已获得本院伦理委员会批准，所有患者均签订知情同意书。

1.2 观察指标

1.2.1 主要试剂与仪器

兔抗人DK2 抗体、兔抗人CDKN1A 抗体购自美国Proteintech 公司；羊抗兔荧光二抗购自美国ROCKLAND 公司；野生型Ki⁃67 抗体购自美国ab⁃cam 公司；鼠抗人Ritor 单克隆抗体购自美国Abeam 公司；免疫组化检测试剂盒、山羊抗小鼠二抗、DAB 显色试剂盒购自北京中衫金桥生物技术有限公司；光学显微镜（BX41 型）购自日本PLYM⁃PUS 公司。所有组织标本均为常规石蜡包埋组织，制成厚4 μm 的病理切片，行免疫组织化学染色，操作步骤严格按试剂盒说明进行［5］。

1.2.2 结果判定

免疫组化结果由2 位病理科主任医师评估，光学显微镜下每张切片随机观察5 个高倍（×200）视野，每个视野计数200 个肿瘤细胞，Ki⁃67、CARLo⁃5染色均定位于细胞核，Rictor 染色定位于细胞质或细胞膜，阳性表达均为棕黄色颗粒。依据切片中细胞染色强度和阳性细胞染色范围判定染色结果显微镜下双盲法阅片［6］，染色分为0 分、1 分、2 分、3 分、4 分。染色强度评分：0 分（基本不着色），1 分（浅黄色），2 分（棕黄色），3 分（棕褐色）；两者相乘最终得分：0 分为阴性，1～2 分为弱表达，3～4 分为中度表达，5～6 分为强表达，大于2 分都认定为阳性表达。

1.3 随访方法

随访从患者术后开始，直至患者死亡或本研究的随访结束，为期5年，截止于2019年12月。患者的随访时间分布在20 至60 个月，平均随访时间为（46.71±5.93）个月。对患者随访的方式主要采用电话随访、微信随访及患者来院复查为主。在本研究中，总生存时间（Overall Survival，OS）表示患者从手术治死亡的时长。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0 软件进行统计分析，计量资料采用（）表示，采用t检验；计数资料以n（%）表示，行χ2检验；以Kaplan⁃Meier 生存曲线分析Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白对患者预后的影响，并采用多元Logistic 回归分析影响子宫内膜癌患者预后生存的危险因素，以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白在子宫内膜癌及癌旁组织的表达

Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白在子宫内膜癌组织中阳性表达率均高于癌旁组织组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1、图1。

表1 Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白在子宫内膜癌及癌旁组织的表达情况比较［n（%）］Table 1 Comparison of the expression of KI⁃67，CARLo⁃5 and Rictor proteins in endometrial carcinoma and para⁃carcinoma tissues［n（%）］

图1 Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白在子宫内膜癌组织的表达（SP，×400）Figure 1 Ki⁃67，CARLo⁃5 and Rictor protein expression in endometrial cancer tissues（SP，×400）

2.2 63 例子宫内膜癌患者5年内预后生存情况

5年随访后，63 例子宫内膜患者生存35 例，死亡28 例，生存率为55.56%，死亡率为44.44%。

2.3 Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白表达与子宫内膜癌远期预后生存的关系

Ki⁃67、ARLo⁃5 和Rictor 蛋白阴性组中位生存时间均较阳性组长，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图2。

2.4 影响子宫内膜癌患者预后的单因素分析

临床分期、组织分化程度、预后评分、Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白表达子宫内膜癌患者是影响子宫内膜癌患者预后的单因素（P＜0.05）。见表2。

2.5 影响子宫内膜癌患者预后的多因素分析

经非条件多因素Logistic 回归模型分析可知，低分化组织、预后评分≥7 分、存在脉管瘤栓、肌层浸润≥1/2 及Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白高表达为影响子宫内膜癌患者预后死亡的独立危险因素（P＜0.05），见表3。

图2 Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白不同表达情况下Keplan⁃meier 生存曲线图Figure 2 Keplan⁃meier survival curve under different expressions of Ki⁃67，CARLo⁃5 and Rictor protein

表2 影响子宫内膜癌患者预后的单因素分析［n（%）］Table 2 Single factor analysis of prognosis of patients with endometrial cancer［n（%）］

表3 影响子宫内膜癌患者预后死亡的多因素分析Table 3 Multivariate analysis of prognostic factors in patients with endometrial cancer

3 讨论

多种原癌基因及抑癌基因在子宫内膜癌的发生发展中起着非常重要的作用，寻求可确切反应子宫内膜癌进展的动态生物学指标成为临床关注的焦点［7］。

Ki⁃67 是一种核增殖标志基因，主要反应细胞的增殖状态，是目前检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标［8］。Ki⁃67 在细胞增殖的各期（G1，S，G2 和M）中均有表达，但在细胞静止期G0 期不表达，故在病理报告中的指数高低与许多肿瘤分化程度、浸润、转移及预后密切相关［9］。Sarah 等［10］发现Ki⁃67 评分与临床病理变量和肿瘤特异性生存率有关。这与本研究结果相似，证实Ki⁃67 在子宫内膜癌中的表达与患者预后存在明显相关性，检测Ki⁃67 的表达对判断子宫内膜癌疾病进展及评估预后有重要价值。

CARLo⁃5 是目前非编码RNA 研究的热点，由于其在转录调控、转录后调控和表观遗传调控中的不同功能，使其正在成为肿瘤发生研究的新目标［11］。关于其在子宫内膜癌中的表达及影响的相关报道较少，本文通过对子宫内膜癌组织积癌旁正常组织进行检测，发现CARLo⁃5 在子宫内膜癌组织中阳性表达率均高于癌旁组织组，推测CARLo⁃5在子宫内膜癌发生发展过程中发挥重要作用［12］。并且在非条件多因素Logistic 回归模型分析中亦显示，CARLo⁃5 高表达为影响子宫内膜癌患者预后死亡的独立危险因素，均表明CARLo⁃5 蛋白可能作用于肿瘤的进展与患者的不良预后相关，提示其有望成为子宫内膜癌治疗的新的靶标。

Rictor 蛋白是mTORC2 的特征性支架蛋白，何春锋等［13］的鼠研究发现，Rictor 高表达状态可促进肿瘤细胞增殖、转移和侵袭，抑制Rictor 基因表达能显著抑制T24 细胞增殖，促进肿瘤细胞死亡，诱使细胞停滞在G1 期，并能有效抑制裸鼠移植瘤的生长，本研究结果提示Rictor 蛋白可作为评价子宫内膜癌患者预后的潜在分子标志物之一。

国内外已有较多文献报道了子宫内膜癌预后的相关因素，认为子宫内膜癌的预后可能与年龄、生育史、病理类型、组织学分级、手术⁃病理分期、宫颈受累、肌层浸润、淋巴转移等多种因素有关，但文献报道的结果不一［14⁃15］。这与本研究经非条件多因素Logistic 回归模型分析结果相似，提示临床需重视合并高危因素者临床的干预。

综上所述，Ki⁃67、CARLo⁃5 及Rictor 蛋白在子宫内膜癌中表达水平的异常与患者预后生存关系密切，可作为预测子宫内膜癌患者远期预后的分子标志物和肿瘤治疗的潜在的靶点；对合并高危因素者临床需采取有效措施进行干预，以提高远期生存率。