Naa10p、TSGF及RUNx2在口腔黏膜癌前病变、口腔鳞癌中的应用

刘春丽 王国杰 郑朝辉 曹瑞

口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcino⁃ma，OSCC）是指发生于口腔内，以鳞状细胞为主的恶性肿瘤［1］。目前OSCC 的死亡率仍居高不下，寻求有效的肿瘤标志物以提高该病诊出率并对预后进行有效评估有重要意义［2］。近年来研究发现N 端α 位乙酰基转移酶10 蛋白（N⁃α⁃acetyl⁃transferase 10 protein，Naa10p）在多种恶性肿瘤中高表达，其分泌与口腔颌面部肿瘤关系密切［3］。而肿瘤特异性生长因子（Tumor Supplied Group of Factors，TSGF）是数种国际公认的与恶性肿瘤生长相关的糖类物质和代谢物的统称，人侏儒相关转录因子2（Runt⁃related Transcription Factor 2，RUNx2）作为表观遗传学上驱动上皮⁃间叶细胞转化的异质性关键转录因子，临床试验证明均两者是肿瘤的早期发现、术后及放、化疗、转移、复发的重要指标［4］。本研究探讨Naa10p、TSGF 及RUNx2 三者联合检测在口腔黏膜癌前病变、OSCC 诊断及鉴别诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年4月至2020年4月本院口腔科收治的65 例OSCC 患者，所有患者均经病理学检查确诊。纳入标准：①所有患者有明确的病理学诊断依据，均确诊为OSCC［5］；②入组前未接受放疗及化疗；③临床资料完整且真实；排除标准：①合并血液疾病者；②严重精神疾患或痴呆等无法配合本研究者；③存在除OSCC 以外其他原发性恶性肿瘤者；④合并风湿免疫及结缔组织病变者。最终62例满足纳入标准，作为0SCC 组。男性32 例，女性30 例，平均年龄（60.53±5.76）岁。

选取同期收治的50 例诊断为癌前病变（扁平苔藓、白斑、红斑、慢性溃疡长期不愈）者为癌前病变组，所有患者均经临床体征或活检确诊［6］。男性26例，女性24 例，平均年龄（60.47±5.74）岁。同时选取同期体检的40 例正常者为正常对照组，均经口腔检查确诊无牙周粘膜疾病和全身检查确诊无系统性疾病。男性22 例，女18 例，平均年龄（60.39±5.84）岁。3 组资料在性别、年龄比较差异无统计学意义，具有可比性（P>0.05）。本研究已获得本院医学伦理委员会批准，所有受试者知情且签订相关协议。

1.2 观察指标

1.2.1 检测方法

采集受试者空腹静脉血8 mL，离心（3 000 r/min，5 min）取血清。检测Naa10：采用酶联免疫吸附法检测，将血清标本置于酶标板标准孔、样品孔中，封板孵育；每孔加入100 μL 检测溶液A，封板；每孔加入100 μL 检测溶液B，封板孵育，洗板5次；每孔加入90 μL 酶标试剂，更换封板膜，孵育；每孔加50 μL 终止液，于波长450 nm 读取光密度（OD）值，根据标准曲线计算标本Naa10p 浓度值。

检测TSGF：TSGF 试剂盒购自福建新大陆生物技术有限公司，严格按照说明书进行操作。用上海分析仪总厂722 s 分光光度计测定。以＞71 U/mL为阳性［7］。

收集所有研究对象病理检查时获取的口腔粘膜，检测Runx2：采用免疫组化法进行检测，鼠抗人Runx2 单克隆抗体购自美国Abnova 公司，免疫组化采用链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶连接法（strept avidin⁃perosidase，SP），SP 试剂盒购自北京中山生物科技有限公司。用已知阳性的人类胎盘组织做阳性对照；用PBS 代替一抗做阴性对照。染色结果判定标准［8］：按阳性细胞数比例分为0 分、1 分、2 分、3 分、4 分；同时根据细胞染色强度加以评分，无着色计0 分，浅黄色计1分，棕黄色计2 分，棕褐色计3 分。两种计分的乘积为每例的加权分数，加权分数为0 为阴性，其余均为阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0 软件进行统计分析，计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；计量资料采用（）描述，两组间采用t检验，多组间采用F检验；采用ROC 曲线分析Naa10p、TSGF、RUNx2 单项及联合检测水平对OSCC 的预测价值；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 OSCC 组、癌前病变组及正常对照组Naa10p、TSGF 表达比较

3 组Naa10p、TSGF 水平及RUNx2 阳性率比较：OSCC 组＞癌前病变组＞正常对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。RUNX2 染色图见图1。

表1 3 组Naa10p、TSGF 表达比较［n（%），（±s）］Table 1 The expression of Naa10p and TSGF in the 3 groups［n（%），（±s）］

表1 3 组Naa10p、TSGF 表达比较［n（%），（±s）］Table 1 The expression of Naa10p and TSGF in the 3 groups［n（%），（±s）］

注：与OSCC 组比较，aP＜0.05；与癌前病变组比较，bP＜0.05。

组别OSCC 组癌前病变组正常对照组F/χ2值P 值n 62 50 40阳性51（82.26）32（62.00）a 5（12.50）ab--Naa10p（pg/mL）225.43±97.85 98.07±32.51a 68.59±30.14ab 82.534＜0.001 TSGF（U/mL）79.59±5.71 66.16±4.97a 57.81±4.12ab 238.013＜0.001 RUNx2阴性11（17.74）19（38.00）a 35（87.50）ab 49.276＜0.001

图1 OSCC 患者Runx2 阴、阳性表达免疫化图（SP，×400）Figure 1 Runx2 negative and positive expression immunohistostaining image of OSCC patients（SP，×400）

2.2 Naa10p、TSGF 及RUNx2 单独及联合检测诊断OSCC 的诊断价值

Naa10p、TSGF 及RUNx2 联合检测的敏感性、准确性均高于任何单一血清检测，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 不同临床分期OSCC 患者Naa10p、TSGF 及RUNx2 表达比较

Ⅲ、Ⅳ期Naa10p、TSGF 水平及RUNx2 阳性率均高于Ⅰ、Ⅱ期患者，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表2 Naa10p、TSGF、RUNx2 单独及联合检测诊断OSCC的诊断价值［n（%）］Table 2 Diagnostic value of Naa10p，TSGF and RUNx2 alone and combined in the diagnosis of OSCC［n（%）］

2.4 ROC 曲线分析

Naa10p、TSGF、RUNx2 单项及联合检测曲线下面积分别为0.694、0.677、0.830、0.883，各指标曲线下面积以联合检测最大。见表4、图2。

表3 不同临床分期OSCC 患者Naa10p、TSGF 表达比较（±s）Table 3 Comparison of Naa10p and TSGF expressions in OSCC patients with different clinical stages（±s）

表3 不同临床分期OSCC 患者Naa10p、TSGF 表达比较（±s）Table 3 Comparison of Naa10p and TSGF expressions in OSCC patients with different clinical stages（±s）

分期Ⅰ+ⅡⅢ+Ⅳt 值P 值n 30 32阳性20 30--Naa10p（pg/mL）201.79±60.84 294.26±65.71 5.739＜0.001 TSGF（U/mL）84.32±2.47 73.57±2.68 16.392＜0.001 RUNx2阴性10 2 7.276 0.007

表4 Naa10p、TSGF、RUNx2 单项及联合检测对TOSCC的预测价值Table 4 Predictive value of Naa10p，TSGF，RUNx2 single and combined tests to TOSCC

图2 Naa10p、TSGF、RUNx2单项及联合检测ROC曲线分析Figure 2 ROC curve analysis for Naa10p，TSGF，RUNx2 single test and combined test

3 讨论

口腔颌面部恶性肿瘤包括OSCC、腺性上皮癌、基底细胞癌等，其中以OSCC 最为常见［9⁃10］。有学者发现肿瘤标志物的成分改变与局部组织细胞代谢密切相关，检测肿瘤附近体液中的肿瘤标志物较检测外周血的阳性率高，这为进一步探讨OSCC 发病机制并优化诊疗方案提供了新的思路［11］。

Naa10p 是N⁃乙酰基转移酶家族成员之一，其在多种肿瘤组织中高表达［12］。Rosenberger 等［13］报道Naa10p 可能具有DNA 修复的功能，在DNA 双链损伤修复过程中发挥重要的作用。Naa10p 主要通过对NF⁃B 通路的激活作用来抑制凋亡，但其介导的蛋白质N 端氨基酸乙酰化又是凋亡过程所需要的重要步骤，因此Naa10p 在肿瘤细胞的凋亡过程中起双重作用。本研究结果表明Naa10p 参与了OSCC 的发生发展过程。

TSGF 是由肿瘤细胞产生的一种多肽类物质，其随着肿瘤细胞的形成与增长，并逐渐释放到外周血液中。临床研究发现，TSGF 对于肿瘤相关的代谢状态具有直观的反应作用；同时本类指标在肿瘤发生之初即在血液中呈现高表达状态，因此其也作为临床研究中与恶性肿瘤密切相关的一类重要指标。Gao 等［14］研究表明，血清TSGF 对一些恶性肿瘤的早期诊断具有广谱、灵敏的特点。本次研究结果提示示血清TSGF 的检测对OSCC 的诊断具有一定的价值。

RunX2 是Runx 转录因子家族成员的重要组成部分，由于Runx2 作为重要的成骨细胞分化转录因子，参与调控成骨细胞分化过程中的钙化过程，因此其对成骨细胞的成熟和稳定起了重要的调节作用。Mette 等［15］研究发现，Runx2 在人类乳腺癌组织中的表达与其在乳腺癌微钙化形成关系密切。近年来相关学者亦指出，分析RunX2 的表达及其与临床病理参数的关系对早期评估肿瘤生物学行为具有一定参考价值［16］。本研究结果提示通过检测该指标表达变化，可为临床早期诊断OSCC 提供有效参考价值，这也为临床研究OSCC的发病机制提供了新思路、新方法。

临床用于肿瘤检测的血清肿瘤标志物较多，但在众多的肿瘤标志物中，往往因敏感度和特异度不够理想，从而在肿瘤的筛查和辅助诊断中存在一定局限性，导致阳性率降低。本研究利用ROC 曲线分析了Naa10p、TSGF、RUNx2 单项及联合检测OSCC 的预测价值，结果显示各指标曲线下面积以联合检测最大，这表明联合检测可显著提高OSCC患者诊断的阳性率，有利于口腔鳞癌的早期诊断。

综上，Naa10p、TSGF 及RUNx2 表达在OSCC患者显著升高，且与患者临床分期密切相关，联合三者检测可作为预测OSCC 发生的有效手段，临床上应重视三者水平的检测，进而改善患者预后。