复方中药对大肠杆菌脂多糖免疫应激早期断奶仔猪血清细胞因子的影响

孟冬霞，马政禹，曹日亮

（1.山西农业大学，山西 晋中 030801；2.山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西 太原 030032）

早期断奶（21～35 d断奶）是现代养猪的关键技术之一。但由于仔猪自身的发育特点及营养、环境和心理等应激因素的综合影响，极易诱发仔猪早期断奶综合征。研究证实，早期断奶对仔猪免疫、内分泌、消化器官均有严重的影响，尤其对胃肠道的形态、内容物pH、消化酶活性、微生物区系等产生不利影响[1-6]。仔猪常表现出采食量低、消化不良、腹泻、免疫力降低、发病率增高等症状，给养猪业带来很大的经济损失[7]。免疫应激是导致仔猪早期断奶综合征的重要因素之一[8]。在“饲料禁抗、养殖减抗、产品无抗”的养殖背景下，寻找安全、有效的绿色替抗产品降低断奶应激对仔猪造成的伤害是当前养猪业迫切需要解决的问题。

研究证实中草药添加剂可有效缓解仔猪断奶应激[9-13]。本试验在研究复方中药对早期断奶仔猪生产性能、血清激素水平、血清免疫球蛋白及肠黏膜免疫细胞影响的基础上，进一步研究其对早期断奶仔猪血清细胞因子的影响，通过给仔猪注射大肠杆菌脂多糖（LPS）建立免疫应激模型[14]，探讨复方中药对大肠杆菌LPS免疫应激断奶仔猪的保护作用，为其临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 饲养试验设计

选用48头28日龄断奶、体重相近的杜长大三元杂种仔猪，随机分为4组。空白对照组：饲喂基础饲粮，35日龄腹腔注射100 μg/kg体重的生理盐水；中药组：饲喂基础饲粮+0.3%中药制剂，35日龄腹腔注射100 μg/kg体重的生理盐水；内毒素组：饲喂基础饲粮，35日龄腹腔注射100 μg/kg体重的大肠杆菌LPS；中药+内毒素组：饲喂基础饲粮+0.3%中药制剂，35日龄腹腔注射100 μg/kg体重的大肠杆菌LPS。

试验期为14 d，于2015年8月16—29日在山西太原某猪场进行。猪舍、饲养条件、卫生环境、饲料品质及其他饲养管理等均相同，试验猪常规免疫，自由采食和饮水。试验开始第7天采血进行细胞因子测定。试验开始第14天，称重，观察中药对免疫应激仔猪生长性能的影响，将另文报道。试验基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 试验基础饲粮组成及营养水平

1.2 中药制剂

山西省农业科学院畜牧兽医研究所中兽医药研究室负责中药的选择、组方。组方由茯苓乙醇提取物、鱼腥草乙醇提取物、白头翁乙醇提取物、白术乙醇提取物、麦冬乙醇提取物、党参乙醇提取物、当归乙醇提取物、姜黄乙醇提取物、山楂水提取物、葡萄糖、蒙脱石等按一定比例组成；所有中药均购自河北安国市祁瑞中药材有限责任公司。

乙醇提取物的制备：将原料清洗干净，放入提取罐中，加入9～10倍量体积分数为80%的乙醇，回流提取3次，每次分别为2 h、1 h、1 h，过滤，合并提取液；将提取液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度1.20～1.25，得提取物浸膏；提取物浸膏经喷雾干燥机干燥即可。

水提取物的制备：将山楂粉碎成颗粒，加水浸泡1～3 h，加入原料8～12倍量水煎煮2～3次，过滤，合并煎煮液；将煎煮液减压浓缩至相对密度1.20～1.25，喷雾干燥后得混合提取物。

1.3 LPS

大肠杆菌血清型055:B5，Sigma公司产品，注射时用生理盐水配成含LPS 500 μg/mL的溶液。

1.4 血样采集和血清制备

试验开始第7天，LPS注射后3 h，从各组随机选取6头仔猪，前腔静脉采血10 mL于离心管中，室温下放置20 min，3 000 r/min离心10 min，吸取血清，置于-20 ℃冰箱保存备用。

1.5 测定指标及方法

血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行测定；试剂盒均购自美国R＆D System。

1.6 数据分析

试验数据采用SPSS 17.0统计软件中的ANOVA程序进行方差分析和邓肯氏（Duncan）多重比较，结果以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

由表2可知，中药组的白细胞介素-1β极显著低于其它各组（P＜0.01）；内毒素组的白细胞介素-1β极显著高于其它各组（P＜0.01）；中药+内毒素组的白细胞介素-1β极显著低于内毒素组（P＜0.01），极显著高于中药组（P＜0.01），显著高于空白对照组（P＜0.05）。中药组的白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α与空白对照组差异不显著（P＞0.05），极显著低于内毒素组和中药+内毒素组（P＜0.01）；内毒素组的白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α极显著高于其它各组（P＜0.01）；中药+内毒素组的白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α极显著低于内毒素组（P＜0.01），极显著高于中药组和空白对照组（P＜0.01）。

表2 中药对LPS免疫应激断奶仔猪血清细胞因子的影响

3 讨论

细胞因子在免疫应答与免疫调节中发挥重要作用，细胞因子的检测在评价免疫状态、探讨免疫应激发生机制及免疫的营养调控中都有重要意义[15-17]。IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子是炎症细胞在炎症反应过程中产生的蛋白质，其含量高低反映着炎症反应状态[18]。免疫应激指动物在受到能诱发免疫反应的病原和非病原因素刺激时所出现的一系列神经内分泌反应及由此而引起各种功能和代谢的改变[19]。研究表明，动物在发生免疫应激反应时，应激原会刺激单核／巨噬细胞系统过量分泌，并释放IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性细胞因子，这是引起免疫应激动物生长抑制的主要原因[20]。本试验采用腹腔注射大肠杆菌脂多糖（LPS）的方法模拟免疫应激，测定复方中药对注射大肠杆菌LPS后3 h细胞因子的变化。由试验结果可知，腹腔注射大肠杆菌LPS后，断奶仔猪血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量极显著升高，说明其免疫系统被激活；中药+内毒素组的中药制剂使断奶仔猪血清中白细胞介素-1 β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的含量极显著下降（P＜0.01）。结果表明中药制剂有抗内毒素的作用，通过抑制免疫应激所引起的细胞因子水平的上升，来减轻炎症反应对机体的损伤，有效缓解应激反应。