化学发光微粒子免疫检测法在梅毒血清学检测中的应用

祝 贺

（商丘市中心医院输血科，河南 商丘 476000）

梅毒是由于梅毒螺旋体（Treponemia pallidum,TP）感染所导致的慢性、系统性的性传播疾病，可导致患者出现硬下疳、淋巴结肿大等临床表现。相关研究显示，2003年至2013年，梅毒发病率年均增长13.37%，严重威胁人们的健康安全[1]。因此快速诊断梅毒，给予相应治疗，对提升治疗效果，控制疾病进展，降低传播风险有积极意义。目前临床对于梅毒主要依据病史、临床表现、血清学检测进行诊断，其中血清学检测是诊断梅毒的重要方式，检测方法不同，对于梅毒的诊断效能也存在差异。因此选择有效的检测方式，对提升梅毒诊断效能有重要意义。梅毒螺旋体特性抗体（Treponema pallidum antibody,TPAb）检测试验，通过检测TP抗体，反映患者TP感染情况[4]。目前临床通常采用的TP-Ab检测试验包括梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（Treponema pallidum particle assay,TPPA）、梅毒螺旋体免疫球蛋白M抗体检测法（TP-IgM）、（Treponema Pallidum Enzyme Linked Immune Sorbent Assay,TP-ELISA）、化学发光微粒子免疫检测法（Chemiluminescence microparticle immunoassays,CMIA）等血清检测方式，其中TPPA是目前血清学检测结果的金标准，能够有效诊断梅毒，但TPPA检查依赖肉眼对结果进行判断，对于操作人员要求较高[2]。TP-ELISA可通过检测IgM达到检测TP感染的目的，同时TP-ELISA可批量检测，节省检测时间[3]。但TP-ELIS易受其他非TP感染、抗体滴度等因素影响，影响诊断结果。CMIA可通过将重组Tpn15、47、17作为固相抗原，通过其与TP结合，触发化学发光，从而诊断梅毒。据相关研究显示，CMIA在检测人类免疫缺陷病毒抗体中取得较好成效[5]。由此推测CMIA可能在梅毒TP-Ab血清学检测中取得相似成效。鉴于此，本研究着重分析CMIA在梅毒TP-Ab血清学检测中的应用价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究方案经本院医学伦理委员会批准，采取前瞻性研究，选择2018年1月至2021年1月商丘市中心医院收治的60 例高度疑似梅毒患者作为研究对象。患者中男38例，女22例；年龄（20～42）岁，平均年龄（30.80±3.64）岁；体重指数（18～26） kg·m-2，平均体重指数（21.90±1.18）kg·m-2。

1.2 入选标准 纳入标准：① 临床表现为无痛性淋巴结肿大合并生殖器溃疡、硬下疳等症状；② 无严重肝肾功能障碍；③ 签署知情同意书。排除标准：① 合并其他性传播疾病；② 合并其他皮肤疾病；③ 入院前接受抗梅毒治疗。

1.3 方法 TPPA：取患者入院次日清晨空腹静脉血5 ml，使用台式低速离心机TDZ5-WS（湘长械备20140072号，湖南湘智）离心（转速3 000 r·min-1，离心半径10cm，离心15min）取血清。使用TPPA试剂盒（梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验）进行检查。CMIA：使用化学发光分析仪BA-G2000 BA-G2000 Pumping Machine及TP-Ab测定试剂盒（化学发光微粒子免疫检测法）对患者梅毒TP-Ab进行检测，从检测到结果判读均由仪器完成。TP-IgM：使用IgM测定试剂盒（胶体金法）进行检查。TP-ELISA：使用TP-ELISA（酶联免疫吸附试验）进行检查。上述试剂盒均来自美艾利尔（中国）医疗器械有限公司，操作步骤严格按照试剂盒说明书操作。

1.4 评价指标 TPPA判断标准：选取本院2名5年及以上工作经验输血科医师对结果分别进行判读，如存在差异则协商统一意见。阴性：反应孔中细胞沉淀在孔中央并呈光滑纽扣状；阳性：反应孔出现凝集呈不规则沉淀；当滴度≥1∶80时判读为阳性，对于弱阳性患者则重复测量2次，如两次均为阴性则为阴性，否则为阳性。CMIA：以检测样本的吸光度值（Signal to cut-off，S/CO）＞1.0为阳性。TP-IgM：若质控线和检测线均出现，则判定为阳性，如只出现1条质控线则为阴性。TP-ELISA：用酶标仪判读，当滴度≥1∶80时为阳性，对于弱阳性标本需重复测定2次，如两次均为阴性则为阴TP-ELISA，否则为阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS 23.0软件进行数据处理，计数资料用百分比表示，以K值评价CMIA与TPPA检测结果的一致性（K≥0.74提示一致性好，K值范围为0.4～0.74提示一致性一般，K＜0.4提示一致性差）。

2 结果

2.1 梅毒TP-Ab血清学检测结果 60例高度疑似梅毒感染患者，经TPPA检测，阳性46例（76.67%），阴性 14 例（23.33%）。

2.1 CMIA、TP-IgM、TP-ELISA检测结果 与TPPA作为参比，CMIA对梅毒TP-Ab抗体的检出的敏感度为95.65%，特异度为92.86 %，准确度为95.00%，一致性较好； TP-IgM对梅毒TP-Ab抗体的检出的敏感度为76.09%，特异度为71.43%，准确度为75.00%，一致性一般； TP-ELISA对梅毒TP-Ab抗体的检出的敏感度为78.26%，特异度为85.71%，准确度为80.00%，一致性一般。见表1。

表1 CMIA检测结果

表2 TP-IgM检查结果

表3 TP-ELISA检查结果

2.2 诊断效能 CMIA诊断TP-Ab敏感度、准确度高于TP-IgM、TP-ELISA，三组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 CMIA、TP-IgM及TP-ELISA诊断效能比较[n（%）]

3 讨论

梅毒传播途径较多，如性接触、母婴、血液等传播形式，传播速度较快，累及器官多，临床表现多样，潜伏期及病程较长，临床对于梅毒的诊断较为困难。因此有效诊断梅毒对梅毒患者治疗及梅毒传播控制有重要意义。TP潜伏期患者临床症状不明显，诊断较为困难，但（2～4）周后，机体便可产生特异性TP-Ab，如免疫球蛋白M、免疫球蛋白G等，因此针对梅毒TP-Ab进行检测，利于梅毒早期诊断与治疗。

目前临床对于梅毒主要采取血清学进行诊断，TPPA是血清学诊断梅毒的金标准，使用明胶将梅毒特异性抗原进行包被与患者血清中特异性抗体产生凝集反应，并通过肉眼对结果进行判读，能够有效诊断梅毒。但TPPA操作较为复杂、耗时较长，同时对于结果的判读过于依赖检测者经验与主观判断，导致临床适用性较差。IgM是机体受限产生的特异性抗体，可在感染两周后测出，治疗后可转阴，再发感染后可再次转为阳性，因此通过检测IgM，可有效诊断与评估梅毒患者感染情况[6]。本次研究显示，60例高度疑似梅毒感染患者，经TPPA检测，阳性46例，阴性14例。提示梅毒发病率较高，梅毒早期诊断与治疗十分重要。同时本次研究显示，以TPPA为参比试剂，CMIA对梅毒TP-Ab抗体的检出敏感度95.65%，特异度为92.86%，准确度为95.00%，与TP-Ab一致性为0.864，一致性较好，且CMIA诊断TP-Ab敏感度、准确度高于TP-IgM、TP-ELISA。提示CMIA对梅毒TP-Ab抗体有着较好的诊断效能，与TPPA诊断效能相近。分析其原因在于，TP-ELISA可利用重组TP47、TP17抗原包被微孔板和辣根过氧化物酶标记的TP47、TP17抗原夹心法原理检测血清中IgM水平，可有效诊断梅毒患者，评估患者病情。但TPELISA受到机体、血液样本、仪器等因素影响出现假阳性，需TPPA验证，导致临床适用性较低，同时需酶标仪进行判读对仪器有所要求，导致诊断成本相对较高。因此临床仍需寻找更加有效的梅毒TP-Ab血清学检测方法。化学发光免疫检测法是利用化学发光剂标记抗原或抗体，利用磁场分离结核状态和游离状态的剂标记物，并加入发光促进剂，测定发光强度，进行定量或定性检查，化学发光免疫检测法被临床广泛应用[7]。CMIA是将重组的梅毒螺旋抗体抗原（Tpn15、17、47）包裹并与检验稀释液混合后加入样本，如血液中存在梅毒TP-Ab，则会结合在抗原包被粒子上，加入预触发液及触发液后，检测化学发光反应物的相对单位，从而检测TP感染情况[7、8]。CMIA全程无需人工干预，更加客观，利于提高诊断效能。同时CMIA相较于传统血清检测，CIMA检测粒直径较小，表面固定量大，同时粒径均一，单分散性好，有利于评估梅毒TP-Ab水平。CMIA整个过程均由同一台机器进行检测判读，对仪器要求相对较低，可减少固定化的时间与成本，提高临床适用性。因此CMIA对于梅毒诊断效能较高，更适用于临床。