布洛芬颗粒含量测定的优化方法

刘素如

布洛芬是临床上经常使用的一种药物,其主要具有消炎、镇痛、解热的作用,如痛经、感冒引起的发热、关节痛等,作用机制是通过对环氧酶的抑制,以此来减少前列腺素的合成,最终降低人体的神经痛觉,调节人体温度,达到解热镇痛的目的［1］。布洛芬颗粒属于非甾体抗炎药,其分子式是C13H18O2,分子量是206.28,化学名为2-甲基丙基(2-甲基-4-)苯乙酸。在临床研究中发现,布洛芬也能对血小板有显著的抑制作用,但是相比于阿司匹林来说,布洛芬颗粒的作用时间更短［2］。世界卫生组织已经将布洛芬划定为家中必备药物之一,并且布洛芬在人们生活中已经得到了十分广泛的应用。关于布洛芬颗粒含量的测定方法有很多,如紫外分光光度法、容量法、气相色谱法、HPLC等。同时,在《国家药品标准》中明确记录了布洛芬颗粒的检测标准,在该标准中主要采用HPLC方法对其含量进行测定,其中的流动相是具有较大毒性的氯乙酸,并且在实际的处理过程中样品消耗时间较长,检测波长也有差异性,进而在操作人员实际的操作过程中,可能会造成样品出现不同程度的损失,药品的真实质量反应也十分不准确［3］。因此,本文参考《中国药典》中布洛芬各类制剂标准中的含量测定方式,在原有的基础上对相关方法进行优化,不仅大大提升了操作的便捷性和灵敏性,还能够更好地控制制剂质量,得出较为准确的数据结果。

1 仪器和试药

1.1仪器 在本次研究中,选用Waters e2695高效液相色谱仪,具体涵盖了四元梯度输液泵,二极管阵列检测器；选用了天平AL104-IC(METTLER TOLEDO),一体式超纯水制备机PCJ-40(成都品成科技有限公司),恒温数控超声波清洗器KQ-500gdv［昆山市超声仪器有限公司(昆山舒美)］。

1.2试药 标准对照品：选取经过HPLC测定含量为99.5%的布洛芬颗粒(中国食品药品检定研究院,批号100722201203)。检测样品：布洛芬颗粒(海南赞邦制药有限公司,国药准字H20110027,规格：0.4 g×8片)。试剂：本次研究中使用的甲醇、乙腈均为色谱纯,水为超纯水,醋酸钠、冰醋酸为分析纯［4］。

2 方法与结果

2.1制备各个溶液 对照品溶液：称取布洛芬对照品10 mg放置于20 ml量瓶中,借助甲醇将其稀释至刻度。供试品溶液：称取本品10包,将其充分混匀之后放置于50 ml的量瓶中,加入甲醇超声20 min让其充分的溶解,并最终稀释到刻度位置,应用0.45 μm的微孔滤膜将其过滤,取出续滤液获得。阴性溶液：按照处方的具体比例制备空白辅料,按照上述方法获得［5］。

2.2考察色谱条件及系统适用性 采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),将6.13 g的醋酸钠融入到750 ml的水中,等待其充分溶解并借助冰醋酸将溶液的pH值调至到2.5,流动相是该溶液-乙腈的比例控制为40∶60,流速为1.0 ml/min,进样量20 μl。

2.3考察专属性 按照2.1的方式制备溶液后采用HPLC进行检测,检测结果得知布洛芬的理论塔板书是9556,最高峰和相邻的分离度都高于1.5,其余的空白辅料对该项检测试验没有明显干扰。

2.4空白辅料干扰试验 根据相应的处方比例取出空白辅料颗粒,然后按照供试品溶液制备方法,对空白辅料溶液进行制备,进样20 μl,将反应结果的色谱图记录下来。同时,另外取出布洛芬对照品和供试品溶液适量,按照上述方法操作,得出最后的结果,表明了空白辅料对布洛芬颗粒的含量测定不会造成显著影响。

2.5峰纯度检查 取出对照品溶液和供试品溶液各20 μl,分别注入进高效液相色谱仪器中,通过电二极管阵列检测器(DAD检测器),记录其在200～400 nm波长范围内的色谱图,为后续的峰纯度检查提供参考依据。检测结果是对照品溶液峰纯度为999.2,供试品溶液峰纯度为999.3.可见,色谱图中的主峰为纯物质峰。

2.6考察线性关系 称取布洛芬对照品25 mg,将其放置于20 ml的容量瓶中,并应用甲醇稀释至刻度。分别取出1、2、4、5、10 ml置于10 ml量瓶中,借助甲醇稀释制作成0.134、0.267、0.534、0.668、1.336 mg/ml的溶液,再依次注入高效液相色谱仪中测定,应用方程计算峰面积A=1277.393C-0.169(r=0.9999,n=6),可见在0.134～1.336 mg/ml范围内线性关系良好。

2.7考察精密度 将对照品溶液按照2.2的方法进行检测,检测6次之后取平均值,记录对照品峰面积,峰面积相对标准偏差(RSD)为0.37%,证明了该仪器精密度良好。

2.8考察稳定性 将供试品溶液提取出来,在0、4、8、12、24 h的各个阶段按照2.2的方法进行检测,由此计算布洛芬的含量,RSD为0.31%,证明了供试品溶液在24 h内具有较高稳定性［6］。

2.9最低检出限与定量限 将布洛芬对照品溶液进行提出,并用甲醇按照不同比例程度稀释之后,按照2.2的方法检测,S/N=10定为定量限,S/N=3表示最低检出限。布洛芬的定量限为0.267 μg/ml,最低检出限为0.0891 μg/ml。

2.10重复性实验 取出检测样品并称取5份,按照2.1的方法进行溶液制备,按照2.2的方法测定,最终在6次试验之后取平均数RSD为0.54%(n=6),可见该检测方法的重复性较好。

2.11耐用性试验 为了证明检测方法的耐用性是否良好,分别考察其流动相的比例、柱温和流速的实际变化情况,借助三根不同色谱柱对其进行测定,检测布洛芬颗粒中其含量和RSD,结合各个条件综合观察,布洛芬理论塔板数高于2500,RSD低于2.0%。

2.12检测加样回收率 精密称取布洛芬25 mg,共准备6份。将6份样品分别放置于20 ml的量瓶中,并加入甲醇超声使其溶解,稀释样品至刻度,将过滤之后的溶液1 ml放置于25 ml量瓶中,加入浓度为1.254 mg/ml的1 ml对照品溶液,用甲醇稀释至刻度［7］。依据2.2的方法进行测定,并计算回收率,最终结果如表1所示。

表1 加样回收率试验结果 (n=6)

2.13检测样品含量 将布洛芬颗粒样品准备各两份,每份样品约等于布洛芬25 mg,依次按照2.1和2.2的方法进行制备和分析,并记录下色谱峰面积,最终计算出布洛芬的含量为99.3%(n=2)和98.9%(n=2)。

3 讨论

3.1选择合宜的流动相 我国《国家药品标准》中明确规定了,布洛芬颗粒在含量测定时,其流动相是1%的氯乙酸溶液-乙腈(48∶52)。但是在现实生活中,氯乙酸属于中等毒性的化学药品,若使用不当,其不仅会造成皮肤灼伤、眼部灼伤,还会通过呼吸道进入到人体内,引起肺部组织损伤。与此同时,长期的接触氯乙酸,还会加大人体患癌的风险,所以本文选取了醋酸钠缓冲液-乙腈(40∶60)作为流动相［8］。将6.13 g醋酸钠融入到750 ml的水中,并应用冰醋酸将其pH值调至2.5。采用醋酸钠缓冲液不仅毒性较小,且十分容易提取和存储。

3.2选择合适的检测波长 在原有的标准中显示,布洛芬颗粒含量检测的波长是254 nm,和已有的研究结果差异不大。在本次研究过程中,通过紫外光谱扫描,得知在263 nm、273 nm的波长时,布洛芬会呈现最大吸收。通过HPLC检测发现：如果检测波长是220 nm,那么布洛芬发信噪比为3,如果检测波长是254 nm,那么信噪比是1340,如果检测波长是263 nm,那么信噪比是3991。由此本文最终确定263 nm作为检测波长［9］。

3.3确定样品溶液制备方法 在本次研究中,通过向布洛芬颗粒中加入70%的甲醇溶液并充分摇晃20、30、45 min后,分析甲醇超声15、20、30 min对布洛芬含量的实际影响情况［10］。得知,应用纯甲醇提取的布洛芬含量高于使用该方法提取的所有布洛芬含量,并且在45 min的时候,纯甲醇提出的布洛芬含量最高。与此同时,超声20 min和超声30 min得到的含量无显著差异,所以采用甲醇超声20 min更加简单高效。

4 结语

布洛芬存在的形式有很多,如胶囊、颗粒、缓释片、混悬液等等。在传统的布洛芬颗粒含量测定方法中,如酸碱滴定法、紫外分光光度法等,因为专属性较差,所以检测的结果十分容易受到辅料等因素的影响。本文通过前期的方法测验得知,本次测定方法中空白辅料对布洛芬颗粒的含量测定并没有影响,因此可以排除其干扰,获得的准确性也更高。与此同时,在上述色谱条件下对布洛芬颗粒的含量进行检测,得知色谱峰峰形较好,在合理的时间范围内,辅料对测定无干扰。通过对布洛芬颗粒的含量测定,进一步优化的测量方法,方法在准确性、精密度等各个方面都符合相关要求,且操作便捷、易于重复,能够为布洛芬颗粒的质量控制提供更加科学合理的参考建议。在证明本方法作为该药品的含量测定依据时,能够确保布洛芬颗粒检测的数据真实性,能够为药品的质量提供检测依据。