慢性乙型肝炎患者血清可溶性E-钙黏蛋白表达与氧化应激的相关性分析

许俊 谢国艳 黄敏

研究表明，与健康人相比，HBV相关的肝癌(HCC)患者会出现过度的氧化应激[1]。然而，氧化应激在HBV相关疾病中的病理生理相关性仍有待阐明。CDH1基因编码的E-钙黏蛋白(E-cadherin)可以与核转录因子-kB(NF-kB)结合，从而防止NF-kB核定位[2]。同时，促炎细胞因子白细胞介素-1和肿瘤坏死因子-α等介导的E-cadherin表达降低，并减弱E-cadherin介导的langerhans细胞与角质形成细胞的粘附[3]。E-cadherin可以被蛋白酶分解，从而释放出胞外N端可溶性片段，称为可溶性E-cadherin(soluble E-cadherin，sE-cadherin)。既往研究认为，sE-cadherin只能作为非功能性肽发挥作用[4]。同时，sE-cadherin可能是导致HBV相关肝病发生和发展的细胞因子之一，HCC患者的sE-cadherin水平明显高于健康个体[5]。本研究评估了CHB患者血清sE-cadherin水平和体内氧化应激的相关性，进一步揭示CHB的发病机制。

材料与方法

一、研究对象

研究对象为2018年1月至2019年12月在上海新华医院崇明分院诊断为HBsAg阳性54例患者，入组前6个月内未接受抗病毒治疗。根据CHB的严重程度分为轻度16例，中度20例和重度18例，所有患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)》的诊断标准[6]。排除合并有慢性丙型肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝病、代谢性肝病及药物滥用者。选择同期健康体检者20名作为对照组。本研究根据《赫尔辛基宣言》的原则进行，并获得医院医学伦理学委员会批准，所有研究对象签署知情同意书。

二、标本的采集和测定

采集所有研究对象空腹静脉血6 mL，分两管。一管离心后分离血清，采用Au480全自动生化分析仪(日本Olympus公司)测定血清中AST和ALT，然后用采用酶联免疫吸附试验(试剂盒购于美国Quidel公司)检测血清中sE-cadherin、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2，NOX2)，操作方法按说明书进行；采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)测定试剂盒(WST-1法)测定血清SOD浓度(试剂盒购于南京建城生物工程研究所)。另一管加入1 mL TRIzol 后-80 ℃保存备用。采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR，RT-PCR)测定血浆中HBV DNA的水平。HBV DNA<2.0×103拷贝/mL为阴性。

三、统计学分析

采用SPSS18.0统计软件。计量资料以均数±标准差表示，比较采用方差分析；计数资料以例数表示，比较采用χ2检验；进行Pearson分析；采用二分类Logistic回归分析探讨重度CHB的影响因素，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、研究对象一般临床资料比较

各组研究对象的年龄和性别之间，差异无统计学意义(P>0.05)；与对照组比较，各CHB组患者血清中AST、ALT、sE-cadherin、MDA、NOX2和HBV DNA增加，GSH和SOD浓度降低，且随着病情的加重呈相应的变化，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

表1 研究对象一般临床资料比较(±s)

二、sE-cadherin与肝功能指标的相关性分析

血清中sE-cadherin与AST、ALT及HBV DNA呈正相关(r=0.591、0.538、0.675，P<0.05)。

三、sE-cadherin与氧化应激指标的相关性分析

血清中sE-cadherin与GSH和SOD 呈负相关(r=-0.499、-0.492，P<0.05)，与MDA和NOX2呈正相关(r=0.527、0.458，P<0.05)。

四、CHB严重程度的影响因素

将sE-cadherin、AST、ALT、HBV DNA、GSH、SOD、MDA和NOX2是否为重度CHB作为因变量进行多因素分析，结果sE-cadherin、HBV DNA和NOX2是重度CHB的影响因素(P<0.05)。见表2。

表2 Logistic回归分析CHB严重程度影响因素

讨 论

越来越多的证据表明，血清sE-cadherin水平升高可能与全身炎症反应的严重程度以及多器官衰竭有关[7]。重症急性胰腺炎患者血清中sE-cadherin浓度高于轻度急性胰腺炎患者，同时，sE-cadherin浓度与炎症和器官损伤的标志物成正比[8]。研究显示，sE-cadherin在肝炎组织中高表达，并且与炎症活动程度甚至肝纤维化相关，但尚无研究CHB患者中sE-cadherin与氧化应激之间的关系[9]。AST和ALT可以作为HBV诱导的肝脏炎症和疾病进展的标志物[10]。本研究中，CHB患者的sE-cadherin浓度高于对照组，并且sE-cadherin水平与AST和ALT的水平呈正相关。血清中的HBV DNA水平与肝脏疾病的进展和组织病理学分级之间密切相关[11]。本研究结果显示sE-cadherin与HBV DNA水平呈正相关。因此，sE-cadherin对慢性HBV感染的临床预后具有预测价值。

HBV介导的ROS可以诱导慢性感染和炎症，从而导致严重的肝脏疾病[12]。研究证实，脂质氧化与HBV相关疾病的进展有关，MDA、GSH和SOD由于其稳定性而通常被用作脂质氧化标志物[13]。NOX2是人类呼吸道合胞病毒诱导的NF-κB抑制蛋白(IκBα)磷酸化过程中的重要调节剂，可抑制甲型流感病毒的复制，进而改善由甲型流感病毒引起的肺部炎症反应[14]。重要的是，血清NOX2是HBV相关并发症进展的一个重要指标。本研究中，CHB患者的GSH和SOD水平低于健康者，与sE-cadherin呈负相关；CHB患者的MDA和NOX2高于健康者，与sE-cadherin呈正相关；同时，sE-cadherin对CHB严重程度具有诊断价值。

综上所述，CHB患者血清中sE-cadherin浓度升高，sE-cadherin与氧化应激呈正相关，可能是导致CHB相关肝病发生和发展的细胞因子之一。