上皮性卵巢癌组织中TGF-β1和MDR1表达与患者临床病理特征的关系*

喻朝霞，潘陶强，张云荣，黄启梅，马俊，卢静

(安庆市第一人民医院 病理科，安徽 安庆 246000)

卵巢癌是临床妇科常见的恶性肿瘤，其中85%～90%为上皮性卵巢癌，死亡率较高，上皮性卵巢癌的形成、转移、复发是多种环境因素及基因改变的共同结果[1-2]。组织转化生长因子-β1(tyansfoyming growth β1，TGF-β1)为人体中主要的负性调控因子，可抑制多种细胞的活性、延缓细胞的生长，亦可参与免疫调节、胚胎发育、细胞凋亡等活动，在多种肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用[3]；多药耐药基因1(multi-drug resistant 1，MDR1)则为耐药相关基因，可促使肿瘤细胞产生耐药[4]。本研究通过免疫组化法检测上皮性卵巢癌患者病理组织中TGF-β1与MDR1蛋白表达，分析上皮性卵巢癌组织中TGF-β1及MDR1蛋白表达与患者临床病理特征的关系、并进一步探讨2种蛋白的相关性，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1一般资料 选取2015年9月—2019年6月行手术治疗的140例卵巢上皮石蜡包埋组织，患者年龄18～75岁，平均(46.87±7.43)岁。全部病例均为首次手术治疗或追加手术治疗，所用组织标本均由病理专家阅片确诊，并且临床资料完整。排除转移癌患者及术前放、化疗患者，排除有其他合并症的患者。140例患者中，其中56例上皮性卵巢癌患者(包括浆液性肿瘤、黏液性肿瘤与透明细胞瘤)作为上皮性卵巢癌组、50例良性上皮性卵巢肿瘤患者(包括多囊卵巢、黄体囊肿、卵巢纤维上皮瘤与成熟囊性畸胎瘤)作为卵巢良性肿瘤组、34例因良性子宫病变行卵巢切除的患者作为正常卵巢组。所有病例均经手术和病理证实。本研究经医院医学伦理委员会审批通过。

1.1.2试剂 鼠抗人TGF-β1、MDR1单克隆抗体及免疫组织化学试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司(浓度为1 ∶100)。用已知阳性组织作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2 方法

采用免疫组织化学EnVision两步法检测卵巢上皮组织TGF-β1与MDR1表达[5]，取石蜡包埋的卵巢上皮组织，切片、脱蜡、水化、高压抗原修复、封闭，按免疫组化试剂盒进行操作，滴加一抗抗体，稀释浓度为1 ∶100～1 ∶400，以PBS代替一抗作为阴性对照，滴加生物素标记的二抗，PBS冲洗，DAB染色，于光学显微镜下观察染色结果。染色判断标准采用半定量计数法，按阳性细胞所占的百分比和着色强度进行结果判定；阳性细胞数所占百分评分，阴性为0分、≤25%为1分、25%～50%为2分、50%～75%为3分、75%～100%为4 分；着色强度评分，无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；以阳性细胞数百分比与着色强度评分的乘积作为总积分，0～1为阴性，≥2为阳性。

1.3 观察指标

比较3组被检卵巢组织标本中TGF-β1与MDR1表达，分析上皮性卵巢癌组织中TGF-β1、MDR1的表达与患者临床病理特征的关系。采用Speaman相关性分析上皮性卵巢癌组织中TGF-β1与MDR1表达的相关性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 21.0统计软件对数据进行分析。计数资料以率(%)表示，组间比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TGF-β1及MDR1表达

结果显示，3组卵巢组织中TGF-β1及MDR1阳性表达情况比较，差异有统计学意义(P<0.05)；上皮性卵巢癌组阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组及正常卵巢组，差异有统计学意义(P<0.05)；卵巢良性肿瘤组与正常卵巢组比较，TGF-β1及MDR1阳性表达率均升高，MDR1差异有统计学意义(P<0.05)、而TGF-β1差异无统计学意义(P>0.05)。见表1、图1。

表1 3组被检卵巢组织中TGF-β1及MDR1表达[n(%)]

图1 3组卵巢组织中TGF-β1、MDR1阳性表达(EnVision法，×100)

2.2 上皮性卵巢癌组织中TGF-β1、MDR1的表达与患者临床病理特征的关系

结果显示，上皮性卵巢癌患者病理分级为Ⅲ/Ⅳ级的TGF-β1、MDR1阳性表达率均高于Ⅰ/Ⅱ级，有淋巴结转移患者的TGF-β1、MDR1阳性表达率高于无淋巴结转移患者，差异有统计学意义(P<0.05)；而TGF-β1、MDR1阳性表达率与患者年龄、组织类型无明显关系(P>0.05)。见表2。

表2 上皮性卵巢癌组织中TGF-β1及MDR1表达与患者临床病理特征的关系[n(%)]

2.3 上皮性卵巢癌组织TGF-β1与MDR1表达的相关性

Spearman相关分析结果显示，上皮性卵巢癌组织TGF-β1与MDR1表达呈正相关(r=0.608，P<0.001)。见表3。

表3 上皮性卵巢癌组织TGF-β1与MDR1表达的相关性[n(%)]

3 讨论

卵巢癌因缺乏早期症状，临床上尚无有效的早期诊断方法，临床上约70%的患者确诊时已为晚期，5年生存率仅为20%～30%；上皮性卵巢癌是卵巢癌的常见类型，其形成、转移、复发是多种环境因素及基因改变的共同结果[1-2]，积极探索上皮性卵巢癌发生发展、侵袭、转移及耐药成为目前的研究热点[6-8]。

TGF-β1是TGF-β细胞因子超家族的成员，可通过刺激上皮性卵巢癌组织新生血管形成，促进肿瘤细胞的增殖、生长；协助癌细胞迁移，有利于癌细胞浸润；抑制免疫，使上皮性卵巢癌细胞逃避免疫攻击；上调细胞外基质降解蛋白表达，促进细胞外间质成分聚集，促进癌细胞转移，从而在上皮性卵巢癌的发生发展、转移和复发过程中发挥至关重要的作用[9-11]。文献报道，TGF-β1蛋白在宫颈癌组织中表达增高，对促使宫颈癌细胞发生肿瘤逃逸、促进宫颈癌的形成发挥重要作用，可作为判断患者预后的指标[12]。闫真等[13]研究发现，上皮性卵巢癌组织中TGF-β1表达升高，从而参与了上皮性卵巢癌的发生发展、侵袭及转移。本研究结果显示，上皮性卵巢癌TGF-β1表达与患者病理分级、淋巴结转移显著相关，分析其原因可能为TGF-β1可促进上皮性卵巢癌细胞自身的生长、浸润和转移，从而加速上皮性卵巢癌的恶化，并引发淋巴结转移。

MDR1是第1个确定的多药耐药相关基因，编码了相对分子量为170 000的P-gp，P-gp是一种能量依赖性膜转运蛋白质，位于细胞浆膜，其可将细胞内的一些化疗药物泵出细胞外，从而使患者出现耐药，促进肿瘤发展[14-16]。研究显示，MDR1基因表达水平与多发性骨髓瘤疾病程度具有明显的正相关性，可能作为多发性骨髓瘤的临床评估预测指标[17]。也有研究发现，MDR1基因与上皮性卵巢癌患者铂类化疗临床预后密切相关，提示MDR1基因高表达可使患者更易出现耐药，最终导致预后不佳[18]。本研究结果显示，上皮性卵巢癌组TGF-β1、MDR1的阳性表达率显著高于卵巢良性肿瘤组和正常卵巢组，提示TGF-β1与MDR1高表达参与了上皮性卵巢癌的发生及由良性向恶性发展的过程。吴梦等[18]研究发现，卵巢癌组织中TGF-β1的表达与临床分期呈现正相关性，且TGF-β1与MDR1的表达呈正相关。本研究结果显示，上皮性卵巢癌MDR1表达与患者病理分级、淋巴结转移显著相关，与患者年龄、组织类型无明显相关。分析其原因可能为当上皮性卵巢癌组织MDR1呈现高表达时，易使患者产生耐药，最终加速上皮性卵巢癌的进展，促进恶化。经Spearman相关分析，上皮性卵巢癌患者病理组织TGF-β1与MDR1表达呈正相关，表明TGF-β1、MDR1与卵巢癌的疾病进展相关，且TGF-β1与MDR1在肿瘤的发生、发展中具有相互协同作用[19-20]。

综上所述，上皮性卵巢癌组织中TGF-β1、MDR1呈高表达，TGF-β1、MDR1阳性表达情况与病理分级、淋巴结转移情况显著相关，且TGF-β1与MDR1表达呈正相关，监测上皮性卵巢癌患者TGF-β1与MDR1表达情况，对于评估上皮性卵巢癌转移、恶性程度以及耐药上具有重要的临床意义。