电针足三里对重度失血性休克大鼠肝脏氧自由基的影响△

陆化梅 于国军 郭永娟 耿智隆

(1.河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院)麻醉科 洛阳 471000；2.解放军联勤保障部队第940医院麻醉科(原兰州军区总医院) 兰州 730000)

肝脏是人体的“生化工厂”，失血性休克及再灌注后肝脏可产生大量氧自由基，氧自由基导致的脂质过氧化反应是肝损伤的主要机制之一，也是SIRS、MODS的病理生理基础[1]。穴位电针对机体的调节受多种因素的影响，本研究以电针刺激足三里穴为切入点，观察失血性休克后肝脏氧自由基变化，探讨其对肝脏的保护作用及可能的机制。

1 材料与方法

1.1 一般材料

健康成年雄性SD大鼠60只，体重280g～320g，购于兰州大学动物实验中心。实验前适应性饲养5d，环境温度控制在22℃～26℃，湿度控制在40%～70%，自由进食饮水，每12h昼夜交替一次。

1.2 实验方法

1.2.1重度失血性休克模型制备

实验前12h禁食，自由饮水,温度控制在22℃～26℃，腹腔给予3%戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉，右股动脉插管监测平均动脉压(MAP)和放血，右股静脉插管用于输液。采用改良wigger's法[2]复制重度失血性休克模型，30min内使MAP降低至35mmHg，通过放血或自体血回输维持MAP(35±5)mmHg水平60min。实验全程动物保持自主呼吸，肛温控制在(37±0.5)℃。

1.2.2穴位电针处理

穴位定位参照《腧穴名称与定位》[3]，采用0.3mm×25mm针灸针，刺入双侧足三里穴，进针深度5mm，接电针仪，疏密波2/15Hz，强度0.1mA，30min。非穴位电针组以相同参数刺激双侧足三里穴旁开0.5cm非经非穴处。

1.2.3实验方案及分组

采用随机数字表法将60只大鼠随机分为6组，每组10只。对照组(C组)对照组动物只麻醉，不放血；休克组分为2个亚组：单纯休克组(S组)和休克复合穴位电针组(SEN组)，复制重度失血性休克模型，休克1h时间点处死大鼠；乳酸林格液复苏组分为3个亚组：乳酸林格液复苏组(LR组)、乳酸林格液复合穴位电针1组(LREN1组)和乳酸林格液复合穴位电针2组(LREN2组)。LREN1组，液体复苏同时电刺激30min；LREN2组，放血同时电针刺激30min；各复苏组，在休克1h后给予三倍失血量LR液复苏，30min内恒速输注，输注完毕后，给予生理盐水6ml/kg·h维持输注4h。

1.2.4指标检测

(1)动态观察各组大鼠不同时间点MAP变化、记录失血量。

(2)肝组织MDA、SOD、NF-κB、ET-1及iNOS测定：休克组在休克1h即刻，其余各组在复苏后4h时间点，采用穿刺心脏法处死大鼠，取部分肝组织测定ET-1、NF-κB、iNOS、SOD活性以及MDA蛋白含量。

1.2.5肝组织病理学观察

取部分肝组织，经甲醛固定、脱水、切片、染色，光镜下观察肝组织病理学变化，透射电镜下观察肝细胞超微结构改变。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 各组大鼠出血量、MAP基础值比较

与C组比较，各组休克1h时间点MAP降低，液体复苏0.5h时间点，各复苏组MAP上升，复苏后2h时间点 MAP降低，各复苏组间差异无统计学意义。

2.2 肝组织中MDA、SOD、NF-κB、ET-1及iNOS的变化

与C组比较，其余各组MDA、NF-κB、ET-1及iNOS升高，SOD降低(P<0.05)；与休克各组比较，各复苏组以上指标升高，SOD降低(P<0.05)；与LR组比较，LREN1组及LREN2组以上指标降低，SOD升高(P<0.05)，LREN2组降低更明显，SOD升高更明显(P<0.05)，见表1。

表1 各组大鼠肝组织SOD、MDA、NF-κB、ET-1及iNOS变化

2.3 肝组织病理学改变

光镜下观察(图1)可见：C组，窦内皮细胞正常；S组，汇管区水肿，中性粒细胞浸润，枯否细胞增多;SEN组，肝细胞轻度肿胀，少许中性粒细胞浸润；LR组，肝组织结构紊乱，中央静脉和血窦淤血，大量中性粒细胞聚集，肝细胞可见大量空泡状变性及点状坏死；LREN1组，肝血窦淤血、肝细胞少量空泡变性及中央静脉及汇管区少量中性粒细胞浸润；LREN2组，肝细胞轻度肿胀，少量散在中性粒细胞浸润。

C组

2.4 各组大鼠电镜下肝组织变化

电镜下(图2)可见：C组，肝细胞超微结构基本正常，细胞核结构完整，线粒体及嵴完整，粗面内质网结构完整，排列整齐；S组，细胞膜和核膜变形，线粒体透亮化，嵴疏松，毛细胆管胆汁淤积；SEN组，肝细胞线粒体轻度肿胀，毛细胆管正常；LR组，局灶性肝细胞溶解坏死，细胞染色质边集，核膜溶解，嵴消失，大量空泡形成； LREN1组，细胞核轻度变异，线粒体肿胀，粗面内质网扩张；LRNEN2组，肝血窦腔轻度增大，枯否细胞线粒体损伤较轻。

C组

3 讨论

NO与ET-1在缺血再灌注中扮演双重角色[4]。而休克后NO的过量生成，主要由于iNOS的表达和活性增高导致。过量的NO与超氧阴离子(·O2-)生成过氧亚硝酸阴离子，进而生成过量氧自由基促进失血性休克再灌注后血管低反应的发生，加重器官损伤。ET是调节血管基础紧张性的中心递质，以ET-1的作用最强[5]。在休克早期，组织缺血缺氧促进ET-1的合成和释放，ET-1选择性收缩外周和内脏血管参与血压的维持，保证心脑等重要器官的血供；而在再灌注期，ET-1的升高导致组织灌注不良以及促进大量的NO生成造成组织损伤。因此，ET-1与NO升高程度及失衡，是微循环灌注难以改善、器官进一步损伤进而促进休克向不可逆发展的重要原因之一[1]。本研究结果显示，失血性休克后，肝脏中ET-1与iNOS均升高，休克期ET-1的升高显著(P<0.05)，而液体再灌注后iNOS升高显著(P<0.05)。与LREN1组比较，LREN2组ET-1及iNOS均降低(P<0.05)，肝功能及肝损伤减轻。

MDA是氧自由基代谢产生的脂质过氧化产物，氧自由基产生的可能机制包括黄嘌呤氧化酶形成增多、补体活化、NF-κB激活及儿茶酚胺的自动氧化等。本研究结果显示，失血性休克及液体复苏后，NF-κB活化，ET-1及iNOS的生成增多，氧自由基生成增多，肝功能及肝组织损伤明显，但休克期电针刺激双侧足三里穴能抑制液体复苏后ET-1及iNOS的合成，减少NF-κB活化及氧自由基的产生，减轻肝脏再灌注损伤。