微生物检验之病原性真菌检验

文丨曾凡英（眉山市仁寿县人民医院）

真菌是一种真核细胞性微生物，它没有叶绿素，没有根茎叶，由一个细胞或者多个细胞组成。真菌中的很大一部分是对我们有好处的，但是也有一部分真菌可以让我们生病，主要是一些浅部真菌和深部真菌等病原性真菌，医生需要使用病原性真菌检验来检测是否有病原性真菌的存在。那么关于病原性真菌检验你了解多少呢，一起来看一看吧。

常见单细胞真菌的形态观察

（1）新型隐球菌：通过新型隐球菌墨汁负染色片，可以观察到其菌体呈现球形，大小并不一致，菌体的四周被特别厚的荚膜所包围，形体透明发亮，能切能够看到发芽的菌体。

（2）白色念珠菌：使用病人的棉拭子标本进行常法涂片，使用革兰氏进行染色，在显微镜下检查。能够看到白色念珠菌的菌体呈现卵圆形，比葡萄球菌大了二到五倍左右，菌体出芽伸长形成了假菌丝，在假菌丝的生长点上出现芽生孢子，有厚膜孢子沿着假菌丝的顶端生长，厚膜孢子较大且呈现圆形。

皮肤丝状菌的检查

检查材料：

患者的指甲屑、皮屑或者毛发、10%的氢氧化钾溶液、载玻片、盖玻片、镊子、普通光学显微镜等等。

检查方法：

采集标本。使用较钝的刀在手、脚、癣等地方将皮屑轻轻地刮下来，对于甲癣可以使用小刀来获取指甲深处的甲屑。

制作玻片。使用镊子夹取少量的皮屑或者甲屑标本放在载玻片的中间，在上面滴一到两滴的10%氢氧化钠溶液，然后盖上盖玻片，为加快角质的溶解速度，将载玻片在火焰上慢慢加热，当标本变得透明时，在盖玻片上稍微施加压力使标本变成薄片，去除气泡并将周围溢出来的溶液吸取干净。

镜检：先使用低倍镜观察有没有真菌菌丝或者孢子，然后使用高倍镜仔细观察菌丝和孢子的形态。在进行镜检的时候应该将光线调整的比较弱，让视野稍微暗一点。对于阳性的标本，经常可以看到分支菌丝或者孢子。

真菌的培养

培养材料：真菌菌种、沙保氏培养基、平皿、载玻片、盖玻片。

培养方法：

一般培养方法。把白色念珠菌、新型隐球菌、絮状表皮癣菌分别接种到沙保氏培养基上，再放在22到28摄氏度的温度下培养，深部真菌可以在37摄氏度的环境下培养，培养一个星期之后查看菌落的特征。真菌菌落按形态分类可以分为三类：一是酵母型菌落，它类似于细菌菌落，整体为圆形，颜色为白色，并且边缘比较整齐，菌落表面显得湿润且光滑；二是类酵母型菌落，它与酵母型菌落相同，整体为圆形，颜色为白色，但不同的是菌落根部会有假菌丝向培养基内生长；三是丝状菌落，多细胞真菌会表现为这种形式，菌落由很多疏松的菌丝体所组成，整体呈现棉絮状、绒毛状或者粉末状，在丝状菌落的中央部位会出现皱褶，外围有放射状沟，菌落的正面和背面颜色不一定相同，可以呈现出各种不同的颜色。

小培养法：小培养法也就是玻片法，其培养方法为将10到15毫升的沙保葡萄糖琼脂倒入无菌平皿之中，在琼脂凝固之后，使用无菌操作将琼脂切成大小约0.5厘米的小块，然后把琼脂小块转移到已经灭菌的载玻片上，之后将已经分纯的真菌菌种接种在琼脂小块四周，在上面盖上无菌的盖玻片，转移到无菌平皿内，无菌平皿内保持一定的湿度，放置在22-28摄氏度的环境中培养，动态地观察其生长过程，然后根据菌丝以及孢子的特征对真菌的种类进行鉴定。

经过上面对于单细胞真菌形态观察、皮肤丝状菌检查以及真菌培养的介绍，大家对于病原性真菌检验已经有了一个初步的了解。但是在实际检验过程中，还是要注意很多细节操作，才能做出准确的病原性真菌检验。